兔的胚胎移植

华中农业大学动物科技学院,兔的胚胎移植,华中农业大学动物科技学院,通过实习了解母畜超数排卵及胚胎移植技术程序，为今后在生产中的科学应用打下良好的基础。,一、实验目的,华中农业大学动物科技学院,掌握母畜同期发情和超数排卵的处理方法以及原理。 掌握母畜采卵和冲胚的一般手术方法。 了解胚胎移植的意义,二、实验要求,华中农业大学动物科技学院,胚胎移植（embryo transfer）：将处于某一发育阶段的早期胚胎移植到与其发育阶段相对应的同种母畜子宫内，使之受孕并产仔的技术。 胚胎移植的实质只是空间位置的更换，而不是生理环境的改变，不会影响胚胎的生长发育。,三、实验原理,华中农业大学动物科技学院,生理基础 1、母畜发情后生殖器官的孕向性变化：大多数自发排卵的家畜，发情后不论是否配种，或配种后受孕与否，其在一定时间内生殖器官所发生的一系列变化都是相同的。 2、 胚胎在早期发育阶段处于游离状态，尚未与母体建立实质性的组织联系，此时的胚胎离开母体后，在短时间内易存活，并能进行短暂的体外培养，当放回到与供体相同的环境中，即可继续发育。 3、胚胎的遗传特性不受受体母畜的影响，母体环境仅一定程度上影响胎儿的体质发育。,华中农业大学动物科技学院,应遵循的一般原则 1、由于胚胎发育对母体子宫环境非常敏感，因此胚胎移植前后所处环境应具有同一性。 受体和供体在分类学上的一致性，即要求亲缘关系比较接近。 受体和供体在生理学上的一致性，即受、供体所处的发情周期阶段要相同。 受体和供体在解剖学上的一致性，即胚胎移植前后所处的空间环境要相似，即胚胎采取的部位要与移植的部位相同。 2、胚胎移植的时限应在周期性黄体退化之前，否则胚胎移植后不易存活。 3、胚胎移植的操作过程要进行严格的质量控制。,华中农业大学动物科技学院,胚胎移植的意义 充分发挥优良母畜的繁殖潜力，加快品种改良和育种的进程。 加快某一特定品种扩群速度。 代替种畜引进。 保存动物的品种资源。 诱发肉畜怀双胎，提高生产效率。 防疫需要和克服不孕。 有利于濒危动物的保护与利用。 作为发育生物学和其他胚胎生物技术的研究手段。,华中农业大学动物科技学院,1、实验动物 供、受体母兔。 2、药 品 FSH、LH、1%巴比妥钠、生理盐水、75%酒精、青霉素、链霉素、冲卵液（PBS）。 3、器械用品 注射器、手术刀、手术剪、手术镊、止血钳、创布、缝合针、线、手术台、冲卵管、移胚管、体视显微镜、表面皿等。,四、试验材料,华中农业大学动物科技学院,五、试验步骤与内容,华中农业大学动物科技学院,1、供体母兔和受体母兔的选择 2、供体母兔与受体母兔的同期发情 3、供体母兔的超数排卵 4、供体母兔体内授精 5、胚胎的回收 6、胚胎质量的鉴别与冷冻保存 7、胚胎移植 8、受体的妊娠诊断,华中农业大学动物科技学院,1、供体母兔和受体母兔的选择 选择品种优良、生产性能及遗传性能稳定，系谱清楚、体质健壮、繁殖机能正常、无遗传和传染性疾病，年龄在12周岁的母兔作为供体。 2、供体母兔与受体母兔的同期发情 运用激素处理供、受体，使其同时缩短黄体期或同时延长黄体期。,华中农业大学动物科技学院,本次实验主要通过挑选发情时间相近的个体作为供体和受体。为使受体兔与供体兔处于相同或相近的生理阶段，以便胚胎着床，对受体兔作假孕处理。 与供体兔同期皮下注射LH，并立即与输精管结扎的雄兔合笼饲养，刺激排卵，造成假孕生理状态。,华中农业大学动物科技学院,3、供体母兔的超数排卵 用于超数排卵激素有多种，不同激素，其处理方法不同。 供体母兔的超数排卵目前较多采用FSH多次注射。 本次实验采用以总量40-80IU的FSH分4天8次皮下注射，最后一次加注10IU的LH，进行处理。 具体如下：,华中农业大学动物科技学院,华中农业大学动物科技学院,4、供体兔体内授精 最后一次注射LH之后，投入公兔，第二天即可进行胚胎回收。 5、胚胎的回收 手术法和非手术法，兔的胚胎收集一般采用手术冲胚法。,华中农业大学动物科技学院,手术冲胚 保定好母兔，用1%戊巴比妥钠0.4-0.5ml耳静脉注射。也可于背部或耳根部皮下注射 。 常规手术部位消毒,沿腹正中线切开,找到双侧输卵管，插入导管并固定； 用注射器抽取56mL冲卵液( PBS + 100 IU 青霉素+ 100g 链霉素），由输卵管伞端向宫管联结部冲洗，用平皿收集卵母细胞。,华中农业大学动物科技学院,输卵管部冲洗收集胚胎具体操作如下： 由宫管联结部向输卵管伞端冲洗 将一根细橡胶管由输卵管伞部插入，并作好固定，有一带有钝头的注射器吸取冲胚液5-8ml，由宫管结合部插入，固定好针头，同时用止血钳夹住针头部位的子宫角，缓慢推动注射器，冲胚液即可将输卵管内的胚胎经插入输卵管伞内的细橡胶管导入承接的表面皿内。 由输卵管伞端向宫管联结部冲洗 用注射器经输卵管伞端缓慢注射冲胚液，胚胎经橡胶管经宫管联结部导入承接的表面皿内。,华中农业大学动物科技学院,华中农业大学动物科技学院,华中农业大学动物科技学院,华中农业大学动物科技学院,华中农业大学动物科技学院,6、胚胎质量的鉴别与冷冻保存 在2040 倍解剖显微镜下取卵，用移液枪头轻吹打使之完全分离，筛选形态正常、透明带完整的受精卵。 经过反复实验,认为在公母兔合笼后7296h，最多不超过106h取胚较合适,这时冲洗出的胚胎约26m大小,晶莹透明,沉于培养皿底部, 用吸胚管容易操作,移植入受体兔也较易存活。,华中农业大学动物科技学院,华中农业大学动物科技学院,显微镜下的胚胎,华中农业大学动物科技学院,胚胎发育模式图,华中农业大学动物科技学院,华中农业大学动物科技学院,华中农业大学动物科技学院,冷冻后的胚胎投入液氮可长期保存。,华中农业大学动物科技学院,7、胚胎移植 受体兔的准备，冷冻胚胎的解冻、移植； 受体兔注射LH 10 IU后与结扎后的公兔合笼,刺激排卵作假孕母兔。 吸取发育良好的胚胎,植入假孕母兔的输卵管内