不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程

不规则抗体筛选和鉴定不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程标准操作规程 1 检验目的 不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行 这样有利于患者 抗体的早期确认及鉴定 发现临床上有意义的抗体 避免一些可能的情况而 造成病情的延误 2 检验方法 分盐水介质法 抗球蛋白法和微柱凝胶法 3 检验原理 让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞 套 起 反应 以发现在 37 中有反应活性的抗体 这种抗体可引起新生儿溶血病 溶血性输血反应 或使输入的红细胞存活期缩短等 当不规则抗体筛选试验 阳性后 再进行不规则抗体鉴定 即利用谱红细胞 11 套鉴定细胞 与待检 者的血清反应 根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别 4 标本要求 受检者不抗凝静脉血 4 0ml 分离血清 48 小时内使用 5 试剂 5 1 筛选红细胞 由 2 或 3 人份的 O 型红细胞组成为一套试剂 每套试剂筛 选红细胞中至少有以下常见的抗原 D C E c e M N S s P Lea Leb K k Fya Fyb Jka Jkb等 每次用 3 套试剂 进行抗体筛选 见表 1005 1 5 2 鉴定谱细胞 除包括常见的抗原以外还有 Cw Kpa Kpb Jsa Jsb Lua Lub Xr mina等 每次用 11 套试剂进行抗 体鉴定 见表 1005 2 5 3 抗球蛋白试剂 多特异性抗球蛋白血清 IgG C3d 5 4 致敏红细胞 质控细胞 5 5 0 9 生理盐水 5 6 Coombs 微柱凝胶卡 6 器材 试管 吸管 37 水浴箱 台式离心机 滤纸 微量加样器等 7 操作程序 7 1 盐水介质法 7 1 1 取受检者血清 2 滴于标记有 的 3 支小试管中 7 1 2 对应加入 套 2 5 筛选红细胞生理盐水悬液 1 滴 37 孵育 30 分钟 7 1 3 以 3000r min 离心 10 秒 观察凝集和溶血情况 并记录反应情况 于表 1005 1 中 如果抗体筛选试验阳性 继续做以下试验 表 1005 1 红细胞血型筛选细胞反应格局表 血型系 Rh hrKellDuffyKillLewisPMNSsLuth 序 号基因 DCEceKkFy a Fy b Jk a Jk b Le a Le b P 1 MNSsLu a Lu b R1R1 00 00 0 0 0 R2R2 0 00 00 0 00 R1r1 0 0 0 00 0 00 0 试验结果 盐水法 抗球蛋白法 微柱凝胶法 R1R1 R2R2 R1r1 注 为阳性 0 为阴性 7 1 4 再取受检者血清 2 滴于标记有 1 11 的 11 支小试管中 7 1 5 在 11 支小试管中分别加入 11 套 2 5 鉴定谱细胞生理盐水悬液 1 滴 37 孵育 30 分钟 7 1 6 以 3000r min 离心 10 秒 观察凝集和溶血情况 并将反应情况记录于表 1005 2 中表 1005 2 红细胞血型谱细胞反应格局表 血型系 Rh hrKellDuffyKillLewisPMNSsLuth 序 号基因 DCEceKkFy a Fy b Jk a Jk b Le a Le b P 1 MNSsLu a Lu b 1R1wR1 00 0 0 0 0 2R1R1 00 0 00 0 0 0 3R2R2 0 00 0 00 0 00 4r r0 0 00 00 5r r00 0 0 00 0 0 6r r000 0 00 0 0 0 0 7r r000 0 0 0 0 0 0 0 8Ror 00 0 00 00 0 0 9r r000 0 00 0 00 10r r000 0 0 0 00 0 11r r000 0 0 0 00 结 果 盐水法 抗球蛋白法 微柱凝胶法 1R1wR1 2R1R1 3R2R2 4r r 5r r 6r r 7r r 8Ror 9r r 10r r 11r r 注 为阳性 0 为阴性 W 为弱阳性 7 2 抗球蛋白法 7 2 1 如果盐水法 1 3 抗体筛选试验阴性 继续做以下试验 7 2 2 再振摇试管 使管底红细胞重新悬浮 用生理盐水洗涤 3 次 7 2 3 最后一次洗涤后 弃去全部盐水 将试管边缘盐水用滤纸吸干 7 2 4 立即加入多特异性抗球蛋白血清 1 滴 混匀 7 2 5 以 3000r min 离心 10 秒 轻轻悬浮细胞 肉眼观察凝集和溶血情况 并用显微镜确证 记录结果于表 1005 1 中 7 2 6 如果抗体筛选试验阳性 再取受检者血清 2 滴于标记有 1 11 的 11 支小试管中 7 2 7 在 11 支小试管中分别加入 11 套鉴定谱细胞悬液 1 滴和多特异性抗球 蛋白血清 1 滴 37 孵育 30 分钟 7 2 8 以 3000r min 离心 10 秒 观察凝集和溶血情况 并将反应情况记录 于表 1005 2 中 7 3 微柱凝胶法 强生卡 7 3 1 在 Coombs 微柱凝胶卡上标记 分别加入 套筛 选红细胞 40 l 和被检血清 40 l 7 3 2 将 Coombs 微柱凝胶卡置于微柱凝胶孵育器内 孵育 15 分钟 7 3 3 取出微柱凝胶卡观察结果 并记录于表 1005 1 中 7 3 4 如果抗体筛选试验阳性 将 11 套鉴定谱细胞对应加入标记有 1 11 的微柱凝胶卡中各 40 l 7 3 5 然后 再各加入被检血清 40 l 7 3 6 重复操作 7 3 2 和 7 3 3 观察结果 并记录于表 1005 2 中 8 结果判断 8 1 必须记录观察到的每个细胞样本的凝集强度或溶血现象 8 2 盐水法和抗球蛋白法以 为阳性凝集结果 微柱凝胶法中抗原 抗体复合物浮在微柱凝胶卡表面或胶中 为阳性反应 沉于尖底部为阴性反应 见图 1005 1 图 1005 1 微柱凝胶法结果判断 8 3 抗球蛋白法阴性无凝集 应加入致敏红细胞 质控细胞 1 滴 混匀后 以 1000r min 离心 15 秒 观察结果 若凝集表示试验结果为阴性 若不凝 集 表示抗球蛋白血清可能失效 试验无意义 8 4 盐水法和抗球蛋白法判断溶血和凝集的终点必须准确和前后一致 如果 溶血和凝集都存在 离心后要立即观察上清液的情况 然后轻轻地把细胞 摇散以观察凝集 8 5 红细胞血型筛选细胞和谱细胞反应格局见表 1005 1 和 1005 2 9 注意事项 9 1 每种试验必须做自身对照 即待检者自身血清和自身红细胞反应 无凝 集则试验有效 若有凝集则提示存在自身免疫抗体 9 2 抗体筛选阳性后 要用生理盐水洗涤红细胞 3 次 离心后再观察结果 避免假阳性反应 9 3 根据反应凝集强度 记为阳性结果 表示待检者血清中有不 规则抗体 结合谱细胞反应格局 确定抗体