实验二-食品中细菌总数的测定

实验实验 2 食品中细菌总数的测定食品中细菌总数的测定 1 目的 1 1 学习并掌握细菌的分离和活菌计数的基本方法和原理 1 2 了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义 2 原理 菌落总数是指食品经过处理 在一定条件下培养后 所得 1g 或 1ml 检样中所含细菌 菌落总数 菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志 也可以应用这一方法观察细菌 在食品中繁殖的动态 以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据 菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数 菌落总数并不能区分其中细菌的 种类 所以有时被称为杂菌数 需氧菌数等 3 材料 3 1 食品检样 3 2 培养基 营养琼脂培养基 无菌生理盐水 3 3 其它 无菌培养皿 无菌移液管 无菌不锈钢勺 4 步骤 4 1 取样 稀释和培养 4 1 1 以无菌操作取检样 25g 或 ml 放于 225mL 灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 瓶内 预置适量的玻璃珠 或灭菌乳钵内 经充分振要或研磨制成 1 10 的均匀稀释液 固体检样 在加入稀释液后 最好置灭菌均质器中以 8000 10000r min 的速度处理 1min 制成 1 10 的均匀稀释液 4 1 2 用 1ml 灭菌吸管吸取 1 10 稀释液 1ml 沿管壁徐徐注入含有 9ml 灭菌生理盐水的试管 内 振摇试管混合均匀 制成 1 100 的稀释液 4 1 3 另取 1ml 灭菌吸管 按上项操作顺序 制 10 倍递增稀释液 如此每递增稀释一次即 换用 1 支 10ml 吸管 4 1 4 根据标准要求或对污染情况的估计 选择 2 3 个适宜稀释度 分别在制作 10 倍递增 稀释的同时 以吸取该稀释度的吸管移取 1ml 稀释液于灭菌平皿中 每个稀释度做两个平 皿 4 1 5 稀释液移入平皿后 将凉至 46 营养琼脂培养基注入平皿约 15ml 并转动平皿 混 合均匀 同时将营养琼脂培养基倾入加有 1ml 稀释液 不含样品 的灭菌平皿内作空白对 照 4 1 6 待琼脂凝固后 翻转平板 置 36 1 温箱内培养 48 2h 取出计算平板内菌落数目 乘以稀释倍数 即得每克 每毫升 样品所含菌落总数 4 2 菌落计数方法 作平皿菌落计数时 可用肉眼观察 必要时用放大镜检查 以防遗漏 在记下各平皿 的菌落总数后 求出同稀释度的各平皿平均菌落数 到达规定培养时间 应立即计数 如 果不能立即计数 应将平板放置于 0 4 但不要超过 24h 4 3 菌落计数报告方法 4 3 1 平皿菌落数的选择 选取菌落数在 30 300 之间的平皿作为菌落总数测定标准 每一个稀释度应采用两个 平皿平均数 其中一个平皿有较大片状菌落生长时 则不宜采用 而应以无片状菌落生长 的平皿作为该稀释度的菌落数 若片状菌落不到平皿的一半 而其余一半中菌落分布又很 均匀 则可以计算半个平皿后乘以 2 以代表全皿菌落数 4 3 2 稀释度的选择 4 3 2 1 应选取平均菌落数在 30 300 之间的稀释度报告 表 2 1 表 2 1 计算菌落总数方法举例 不同稀释度的平均菌落数 两个稀释度菌落数 之比 菌落数之比 个 ml 10 110 210 3 1136516420 16400 22760295461 637750 32890271602 227100 4无法计数1650513 527115 270 6无法计数30512 30500 4 3 2 2 若有二个稀释度均在 30 300 之间时 应以二者比值决定 比值 2 取平均数 比值 2 则其较小数字 表 1 中例 2 和 3 4 3 2 3 若所有稀释度均 300 则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告之 表 1 中 例 4 4 3 2 4 若所有稀释度均 30 则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告之 表 1 中例 5 4 3 2 5 若所有稀释度均无菌落生长 则应按300 有的又 30 则应以最接近 300 或 30 的平均菌落数乘以稀释倍数报告之 表 1 中例 7 4 3 4 菌落计数报告方法 菌落数在 1 100 时 按实有数字报告 如大于 100 时 则报告前面两位有效数字 第 三位数按四舍五入计算 为了缩短数字后面的零数 也可以 10 的指数表示 5 结果 5 1 将实验测出的样品数据以报表方式报告结果 5 2 对样品菌落总数作出是否符合卫生要求