组织胚胎学2014绪论-人卫7版.ppt

普通高等教育国家级十一五规划教材 组织学与胚胎学 理论课件 组织学第1章绪论石玉秀中国医科大学 一 组织学的研究内容 组织学 histology 研究机体微细结构及其相关功能的科学 组织 上皮组织结缔组织肌肉组织神经组织 细胞细胞间质 器官和系统 细胞外基质 细胞 是机体形态结构与功能的基本单位 组织 由细胞和细胞间质 又称细胞外基质 组成的群体结构 是构成机体器官的基本成分 器官 具有一定的形态结构 并执行特定的生理功能 系统 由一些结构连续 功能相关的器官组合而成 完成连续的生理活动 细胞 组织 器官 系统 人体器官分类 组织学特征 实质性 器官 中空性 中央 大空腔 表面 被模如 消化腺 淋巴器官 内分泌腺 肾脏等 如 心血管 消化管 呼吸道等 内部 实质 行使功能 管壁 分3 4层 组织学结构观察 组织学结构 光镜结构 用光学显微镜观察的结构 LM lightmicroscope LM简称光镜 电镜结构 电子显微镜下观察的结构 EM electronmicroscope EM简称电镜 又称超微结构 ultrastructure 二 组织学的研究方法和常用技术 一 光学显微镜技术1 常用组织切片标本制备技术石蜡切片术 取材和固定 脱水和包埋 切片和染色 封片 其他 火棉胶包埋 冰冻切片 涂片 铺片 磨片等 苏木精伊红 碱性染料 酸性染料 染成红色 嗜酸性 细胞核中的染色质 细胞质中的核糖体 细胞质细胞间质成份 染成蓝色 嗜碱性 常用染色方法 HE染色 Hematoxylin Eosin HE染色 嗜碱性 可使细胞核内的染色质及细胞质内的核糖体等结构染成蓝紫色 嗜酸性 可使多数细胞的细胞质染成粉红色 中性 与两种染液亲合力都不强 组织结构的嗜色性 嗜碱性 嗜酸性 A嗜银性B嗜铬性C异染性 其它染色方法 普通光学显微镜 是观察组织细胞微细结构最常用的工具 分为 光学部分 机械部分 起放大作用 光镜的分辨率约为0 2 m 可放大1500倍左右 lightmicroscope LM 几种特殊显微镜术 1 相差显微镜 phasecontrastmicroscope 用于观察生活细胞和末经染色细胞的形态结构 神经干细胞培养 2 荧光显微镜 fluorescencemicrscope 是用以观察细胞 组织内荧光物质的分布 神经球 二 共焦激光扫描显微镜 共焦激光扫描显微镜 confocallaserscanningmicroscope CLSM 由激光光源 共焦成像扫描系统 电子光学系统和微机图象分析系统四部份构成 可对样品进行断层扫描重建三维图像 进行体视学分析 测定细胞内pH 钙浓度等 更精确地检测 识别 组织细胞的微细结构及其变化 CLSM又称细胞CT CLSM CLSM图像 Humanneuronalprecursorcells CLSM海马MR GR共存 三 电子显微镜技术 electronmicroscope EM 透射电镜 transmissionelectronmicroscope TEM 观察细胞内部结构分辨率为0 1 0 2nm 可放大几万 几十万倍扫描电镜 scanningelectronmicroscope SEM 观察组织或细胞表面的立体结构冰冻蚀刻 freezeetchingmethod 观察细胞断裂表面形态结构分析电镜X 射线显微分析术 X raymicroanalysis 研究细胞 组织内元素种类分布和含量 透射电镜与照片 TEM 淋巴细胞 扫描电镜与照片 SEM SEM1 纤毛2 微绒毛 冰冻蚀刻细胞 冷冻断裂肾小球右下线粒体 冰冻蚀刻照片 分析电镜 X线微区分析图片 分析电镜 X线微区分析 糖类显示法 PAS反应 过碘酸 希夫反应 periodicacidSchiffreaction PAS 检测组织或细胞中有无多糖存在 原理 多糖 PA 氧化 醛 Schiff试剂 紫红色沉淀 四 组织化学和细胞化学技术 PAS反应阳性部位即表示多糖和蛋白多糖的存在 PAS阳性小肠上皮 组织细胞化学染色图片 酶细胞化学神经元ACP酶阳性 脂类显示法苏丹 脂类显示法苏丹 锇酸髓鞘染色 核酸显示法 利用抗原 antigen Ag 抗体 antibody 特异结合的原理 用已知抗体检测未知抗原的一种方法 免疫细胞化学原理 免疫细胞化学标记物 免疫细胞化学 PAP法 免疫细胞化学 ABC法 五 免疫组织化学与细胞化学技术 免疫组织化学术 immunohistochemistry 是将免疫学原理与组织化学技术相结合建立的新技术 根据抗原与抗体特异性结合的特点 检测组织细胞内某种多肽 蛋白质等大分子物质的存在与分布 人鼻粘膜上皮棘细胞细胞间桥TM阳性 六 原位杂交术 原位杂交 insituhybridization 是一种敏感性高 特异性强的 能在组织细胞原位进行的核酸分子杂交技术 常用的标记物有两种 1 放射性同位素 如3H 14C 32P 35S 125I 2 为非放射性物质 如地高辛等 非放射性原位杂交海马GAP 43mRNA 七 放射自显影术 放射自显影术 autoradiograph 旨在追踪某些物质在体内 组织或细胞中的分布与代谢径路 放射自显影甲状腺125I 同位素注入 取材 制标本 涂核乳胶 暗室曝光 显影 定影 染色 LM观察 八 组织培养和组织工程 组织工程基本方法示意图A获取组织B分离 培养种子细胞C制备三维支架D将种子细胞种植于支架E将细胞 支架复合物植入组织缺损处 细胞培养 神经干细胞培养 九 组织细胞定量术 1 显微分光光度术应用显微分光光度计 microspectrophotometer 对组织和细胞内化学成分进行定量分析 2 形态计量术运用数学和统计学原理