碱性磷酸酶(ALP) SFBC速率法

项 目碱性磷酸酶 碱性磷酸酶 ALP 方 法SFBC 速率法速率法 目目 录录 1 检测原理 2 标本采集与处理 2 1 受检者的准备 2 2 静脉采血 2 3 抗凝剂 2 4 标本处理 3 试剂 3 1 试剂 3 2 校准血清 3 3 试剂 校准血清的稳定性 4 仪器 5 操作 6 计算 7 操作性能 7 1 精密度 7 2 准确度 7 3 灵敏度 7 4 可报告范围 7 5 特异性 7 6 干扰 8 参考值 9 临床意义 附录 A 参数 1 检测原理检测原理 无色的对硝基苯磷酸二钠在碱性磷酸酶的作用下 生成在 405nm 处有特异吸收的淡黄色对硝基苯酚 通过测定在 405nm 处吸光度的变化速率来计算 ALP 的活性 碱性磷酸酶 对硝基苯磷酸二钠 H2O 对硝基苯酚 H3PO4 2 本采集与处理 本采集与处理 2 1 受检者的准备 受检者的准备 病人空腹 12h 不饮酒 24h 后采集血样 体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录 注意有无应用 影响测试项目的药物 此外 对于体检者 采血的季节都应做相关记录 因为样本中各项目的含量有季节 性变动 为了前后比较应在每年同一季节检验 应嘱体检对象在抽血前 24 小时内不做剧烈运动 2 2 静脉采血 静脉采血 除非是卧床的病人 一般在采血时取坐位 体位影响水分在血管内外的分布 会影响测试项目的浓度 在采血前至少应静坐 5 分钟 一般从肘静脉取血 使用止血带的时间不超过 1 分钟 穿刺成功后立即松 开止血带 2 3 抗凝剂 抗凝剂 血浆使用肝素或 EDTANa2 1mg mL 作为抗凝剂 2 4 标本处理 标本处理 血标本室温放置 30min 45min 后离心分离血清或血浆 在两小时内检测完毕 如两小时内不能检测 完毕 将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖 2 8 保存 3 试剂 试剂 3 1 试剂 试剂 本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司 ALP 试剂盒 为液体双试剂 各组分如下 组 成 R1 R2 5 1 混合后溶液的浓度 R1 缓冲液PH 10 2 2 氨基 2 甲基 1 丙醇 AMP 1 0mol L 氯化镁0 5mmol L R2 起动液 对硝基苯磷酸二钠10mmol L 3 2 校准血清 校准血清 使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的 40 项校准血清 校准频次 校准频次 空白定标 每日需做试剂空白定标 全点定标 试剂换批号使用时或质控结果超过规定的 2SD 范围 需要全点定标 3 3 试剂 校准血清的稳定性 试剂 校准血清的稳定性 原包装试剂储存在 2 8 至标签所示失效日期 18 22 稳定 28 天 试剂应避免污染 当应用试剂空 白吸光度高于 0 7 时 试剂按照失效处理 多项校准血清在 2 8 储存至标签所示失效日期 复溶后 20 保存 可稳定一个月 只可冻融一次 避免反复冻融 参见校准血清说明书 4 仪器 仪器 KONELAB 30 型号仪器 性能 波长 405nm 仪器测定吸光度的灵敏度应达到 0 001ABS 以上 5 操作 操作 样品为血清或肝素 EDTA 抗凝血浆 本法为 SFBC 法 参数见后附 附录 A 试剂参数设置 定标操作以及样本检测常规操作 见仪器操作规程 6 计算 计算 A min Vt 1000 ALP U L A min F e Vs d 式中 A min 每分钟吸光度变化率 e 18 5 摩尔吸光系数 Vt 反应液总体积 ml d 1 比色杯光径 cm 1000 变化因数 Vs 标本体积 ml 7 操作性能 操作性能 7 1 精密度 精密度 批内 CV 0 22 批间 CV 3 4 7 2 准确度 准确度 检测结果的相对不准确度 10 7 3 灵敏度 灵敏度 碱性磷酸酶浓度为 400U L 时 吸光度变化率 A405nm min 为 0 108 0 132 7 4 可报告范围 可报告范围 血清与试剂用量之比为 1 60 时 测定上限为 800U L 7 5 特异性 特异性 测量值在给定值的 90 110 范围内 7 6 干扰 干扰 内源性干扰物溶血为 1000mg ml 脂血 2000mg ml 黄疸 30mg ml 抗坏血酸 300mg ml 对测试结 果无明显影响 8 参考值 参考值 40 150U L 9 临床意义 临床意义 碱性磷酸酶测定试剂用于定量测定人体血清中碱性磷酸酶的活性 碱性磷酸酶 ALP 几乎存在于人体的各个组织中 正常人血清中的 ALP 主要来自骨骼 由成骨细胞产