IC50曲线测试实验流程

IC50 曲线的测定曲线的测定 IC50 即半抑制率 标准曲线是一个 S 型曲线 IC50 为 50 抑制浓度即细胞存活量为对照样本一半时所对应的 浓度 半数抑制越低 说明药物对细胞的毒性越高 实验操作步骤如下 1 细胞准备 A 细胞状态检测 从培养箱中取出细胞 显微镜下观察 状态描述 观察结果 细胞汇合度 B 细胞处理 将细胞培养基吸出后 加入 2ml PBS 缓冲液洗一次 加入 1ml 0 25 Trypsin EDTA 放入培养箱中静置数分 钟 直至细胞完全离壁悬浮 加入 5ml 含 10 FBS 的培养基 无抗生素 终止酶活 混匀后液体转移至 15ml 离心管 1000rpm 离心 3min 弃去液体 C 细胞计数 于 15ml 离心管中加入 1ml 含 10 FBS 的培养基 无抗生素 充分混匀 取 40ul 计数 公式如下 细胞浓度 数 ml 4 大方格细胞数之和 4 104 稀释倍数 最终得到的细胞密度填入下表 根据最终需要细胞浓度及体积进行稀释 细胞 数 孔 起始浓度 ml 所需体积 ml 需 20 FBS DMEM ml 总体积 终浓度 ml 细胞 株名 D 稀释细胞 2 将稀释好的细胞用排枪加至 96 384 孔板 置于培养箱 37 5 CO2 条件下培养 24 小时 待细胞贴壁后加药 3 药物稀释 将药物进行 3 倍倍比稀释 4 将稀释好的药物加入前一天铺好细胞的细胞板上 37 5 CO2 培养箱培养 72h 5 荧光素酶检测 将 Celltiter Glo 与 ddH20 以 1 1 混合 加入细胞板 96 板 20ul well 384 板 10ul well 静置 10min 后 TECAN infinite F200酶标仪读值 6 分析数据 绘制 IC50曲线 寻找 IC30 IC50等值 7 验证 IC50 根据 IC50曲线找出 IC50理论值 分别取 1 2 倍 1 倍及 2 倍的理论值进行药物浓度验证 附录 Materials for Experiment NameCorporation 96 well plateCorning 384 well plateGreiner CentrifugeTube 15ml BD Falcon Pipets 10ml Greiner T 25 FlaskCorning Tips EP TubeAxygen Matrix Reagents for Experiment NameCorporation FBSExcell DPBSHyclone 0 25 Trypsin EDTAGIBCO MediumHyclone Cell Titer Glo Promega Instruments for Experiment NameModelCorporation Inverted MicroscopeTS100Nikon CO2 IncubatorBB16UVHeraeus BechtopZHJH 1109ZHCHENG Centrifuge5