内蒙古大学基因工程大实验封面

分类号 Q78 编号 00911045 本科生基因工程实验论文本科生基因工程实验论文 指指导导教教师师 学学 生 生 专专 业业 年年 级级 2012 年 9 月 5 日 绿色荧光蛋白绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在基因表达载体的构建及在 大肠杆菌中的表达大肠杆菌中的表达 目目 录录 摘要 绪论 材料与方法 1 材料 1 1 试剂及仪器 1 2 菌种 1 3 质粒 1 4 常用溶液的配制 2 方法 2 1 引物的设计 2 2 绿色荧光蛋白基因的 PCR 扩增 2 3 DH5a 和 BL21 DE3 感受态的制备 2 4 pMD19 T EGFP 的构建及转化和鉴定 2 5 pGEX 4T1 及 pMD19 T EGFP 的酶切与回收 2 6 pGEX 4T1 EGFP 的构建及转化和检测 2 7 pGEX 4T1 EGFP 的诱导表达 2 8 GFP 表达的 SDS PAGE 检测 结果 1 GFP 基因的 PCR 扩增 2 pMD19 T EGFP 的构建与鉴定 3 pGEX 4T1 及 pMD19 T EGFP 的酶切和回收 4 pGEX 4T1 EGFP 的构建与检测 5 pGEX 4T1 EGFP 的诱导表达与 SDS PAGE 检测 讨论 参考文献 致谢 感想 1 绿色荧光蛋白基因绿色荧光蛋白基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 摘要 绿色荧光蛋白 摘要 绿色荧光蛋白 GFPGFP 是一种生物发光蛋白 是一种生物发光蛋白 GFPGFP 作为基因表达标记作为基因表达标记 物或融合蛋白标记在动物 植物 微生物的研究中广泛应用 本实验将物或融合蛋白标记在动物 植物 微生物的研究中广泛应用 本实验将 GFPGFP 基因与基因与 pGEX 4T 1pGEX 4T 1 载体连接在大肠杆菌中表达 根据根据载体连接在大肠杆菌中表达 根据根据 GFPGFP 基因与基因与 质粒载体质粒载体 pGEX 4T 1pGEX 4T 1 的序列 设计一对引物 以的序列 设计一对引物 以 PCRPCR 扩增扩增 GFPGFP 序列 克隆序列 克隆 到表达载体到表达载体 pGEX 4T 1pGEX 4T 1 的的 EcoR EcoR 和和 BamH BamH 酶切位点 与载体连接 重组酶切位点 与载体连接 重组 质粒质粒 转化大肠杆菌转化大肠杆菌 BL21 DE3 BL21 DE3 菌落籽 菌落籽 365nm365nm 紫外光下呈现明亮的绿色荧光 紫外光下呈现明亮的绿色荧光 关键词 绿色荧光蛋白 基因表达 载体 大肠杆菌关键词 绿色荧光蛋白 基因表达 载体 大肠杆菌 ConstructingConstructing ExpressionExpression VectorVector andand ExpressingExpressing GFPGFP inin E coliE coli ABSTRACTABSTRACT TheThe greengreen fluorescentfluorescent protein GFP protein GFP ofof jellyfishjellyfish VictoriaVictoria isis anan unusualunusual proteinprotein withwith strongstrong visiblevisible fluorescencefluorescence bothboth inin vivovivo andand vitro invitro in thisthis study aboutstudy about GFPGFP genegene waswas amplifiedamplified byby PCRPCR andand waswas insertedinserted intointo pGEX 4T 1pGEX 4T 1 vector vector TheThe recombinantrecombinant plasmidplasmid waswas transferredtransferred intointo E coliE coli BL DE3 BL DE3 andand expressedexpressed inin E coliE coli BL DE3 TheBL DE3 The fusedfused proteinprotein GFPGFP couldcould bebe obtainedobtained fromfrom thethe supernatants supernatants