片剂微生物限度检测方法验证试验报告

微生物限度检测方法验证试验报告微生物限度检测方法验证试验报告 一 目的 确认供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性 二 内容 细菌 霉菌及酵母菌数测定 即 对五株阳性对照实菌株的回收逐一进行验证 三 菌种 枯草芽孢杆菌 CMCC B 63501 金黄色葡萄球菌 CMCC B 26003 大肠埃希菌 CMCC F 44102 白色念珠菌 CMCC F 98001 黑曲霉菌 CMCC F 98003 四 方法 常规法 培养基稀释法 薄膜法 综合法 依据 中国药典 2005 年版 二部微生物限度检查方法验证实验 五 方法验证 细菌 霉菌及酵母菌数测定 进行三次独立实验 每次平行实验回收率为 70 以上 六 实 验 1 菌 液 组 测定所加的试验菌数 2 供试品对照组 取 1m 供试液注入平皿中 立即倾入营养琼脂培 养基 做两个平板 按平板菌落计数方法测定其菌落数 3 试 验 组 平皿法计数 取供试品 10g ml 加入 PH7 0 无菌氯化钠 蛋白胨缓冲液至 100ml 1 10 作为供试液 取 1ml 供试 液 1ml 试验菌液 50 100cfu ml 分别注入平皿中 立即倾入营养琼脂培养基 每株菌做两个平板 按平板菌落计数 方法测定其菌落数 4 稀释剂对照组 试验时 可用相应的稀释剂替代供试品 加入 1ml 试验菌 50 100cfu ml 立即倾入营养琼脂培养基 每株菌 做两个平板 按平板菌落计数方法测定其菌落数 七 结 论 通过方法学验证实验证明 采用常规法 培养基稀释法 薄膜法 综合法 对 5 株阳性代表 菌株回收率均为 70 以上 该方法适用于 微生物限度检查 复核人 试验人 试验记录 1 批号 验证日期 试验组及 接种量 1 菌 液 组 菌液 1ml 皿 2 供试品 稀释 剂 对照组 1ml 皿 3 试 验 组 供试液 稀释剂 1ml 菌液 1ml 皿 验证菌 及稀释 倍数 大肠埃 希菌 10 金黄色 葡萄球 菌 10 枯草芽 孢杆菌 10 白色念 珠菌 10 黑曲霉 菌 10 细 菌 霉 菌 大肠埃 希菌 10 金黄色 葡萄球 菌 10 枯草芽 孢杆菌 10 白色念 珠菌 10 黑曲霉 菌 10 培养时 间及温 度 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 菌落数 A 试验组回收率 3 2 1 100 B 稀释剂对照组回收率 3 1 100 A B A B A B A B A B 试 验 记 录 1 批号 验证日期 年 月 日 实 试 验 记 录 2 试 试验组及 接种量 1 菌 液 组 菌液 1ml 皿 2 供试品 稀释 剂 对照组 1ml 皿 3 试 验 组 供试液 稀释剂 1ml 菌液 1ml 皿 验证菌 及稀释 倍数 大肠埃 希菌 10 金黄色 葡萄球 菌 10 枯草芽 孢杆菌 10 白色念 珠菌 10 黑曲霉 菌 10 细 菌 霉 菌 大肠埃 希菌 10 金黄色 葡萄球 菌 10 枯草芽 孢杆菌 10 白色念 珠菌 10 黑曲霉 菌 10 培养时 间及温 度 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 菌落数 A 试验组回收率 3 2 1 100 B 稀释剂对照组回收率 3 1 100 A B A B A B A B A B 试验组及 接种量 1 菌 液 组 菌液 1ml 皿 2 供试品 稀释 剂 对照组 1ml 皿 3 试 验 组 供试液 稀释剂 1ml 菌液 1ml 皿 验证菌 及稀释 倍数 大肠埃 希菌 10 金黄色 葡萄球 菌 10 枯草芽 孢杆菌 10 白色念 珠菌 10 黑曲霉 菌 10 细 菌 霉 菌 大肠埃 希菌 10 金黄色 葡萄球 菌 10 枯草芽 孢杆菌 10 白色念 珠菌 10 黑曲霉 菌 10 培养时 间及温 度 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 菌落数 供 稀 供 稀 A 试验组回收率 3 2 1 100 B 稀释剂对照组回收率 3 1 100 A B A B A B A B A B 实批号 验证 日期 年 月 日 试验组及 接种量 1 菌 液 组 菌液 1ml 皿 2 供试品 稀释 剂 对照组 1ml 皿 3 试 验 组 供试液 稀释剂 1ml 菌液 1ml 皿 验证菌 及稀释 倍数 大肠埃 希菌 10 金黄色 葡萄球 菌 10 枯草芽 孢杆菌 10 白色念 珠菌 10 黑曲霉 菌 10 细 菌 霉 菌 大肠埃 希菌 10 金黄色 葡萄球 菌 10 枯草芽 孢杆菌 10 白色念 珠菌 10 黑曲霉 菌 10 培养时 间及温 度 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 菌落数 A 试验组回收率 3 2 1 100 B 稀释剂对照组回收率 3 1 100 A B A B A B A B A B 实 验 记 录 3 试验组及 接种量 1 菌 液 组 菌液 1ml 皿 2 供试品 稀释 剂 对照组 1ml 皿 3 试 验 组 供试液 稀释剂 1ml 菌液 1ml 皿 验证菌 及稀释 倍数 大肠埃 希菌 10 金黄色 葡萄球 菌 10 枯草芽 孢杆菌 10 白色念 珠菌 10 黑曲霉 菌 10 细 菌 霉 菌 大肠埃 希菌 10 金黄色 葡萄球 菌 10 枯草芽 孢杆菌 10 白色念 珠菌 10 黑曲霉 菌 10 培养时 间及温 度 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 小时 菌落数 供 稀 供 稀 A 试验组回收率 3 2 1 100 B 稀释剂对照组回收率 3 1 100 A B A B A B A B A B 批号 验证日期 年 月 日 试验组及 接种量 1 菌 液 组 菌液 1ml 皿 2 供试品 稀释 剂 对照组 1ml 皿 3 试 验 组 供试液 稀释剂 1ml 菌液 1ml 皿 验证菌 及稀释 倍数 大肠埃 希菌 10 金黄色 葡萄球 菌 10 枯草芽 孢杆菌 10 白色念 珠菌 10 黑曲霉 菌 10 细 菌 霉 菌 大肠埃 希菌 10 金黄色 葡萄球 菌 10 枯草芽 孢杆菌 10 白色