食品接触材料及制品 游离酚含量及迁移量的测定-标准文本

GB xxxxxxxx食品安全国家标准食品接触材料及制品 游离酚含量和迁移量的测定（征求意见稿）201x-xx-xx实施201x-xx-xx发布中华人民共和国卫生部 发布1.1.1.1 2010-06-01实施2010-发布 前 言本标准代替GB/T 5009.69-2008 食品罐头内壁环氧酚醛涂料卫生标准的分析方法和GB/T 5009.99-2008 食品容器及包装材料用聚碳酸酯树脂的卫生标准的分析方法。本标准与GB/T 5009.69-2008 和 GB/T 5009.99-2008相比，主要变化如下： 标准名称修改为“食品安全国家标准 食品接触材料及制品 游离酚含量和迁移量的测定”；修改了标准的范围；增加了高效液相色谱法。10食品安全国家标准食品接触材料及制品 游离酚含量及迁移量的测定1 范围本标准规定了食品接触材料及制品 游离酚含量及迁移量的测定方法。本标准适用于食品接触材料及制品 游离酚含量及迁移量的测定，其中第一法滴定法适用于食品接触材料(树脂和涂料)中的游离酚含量的测定，其它三个方法适用于食品接触材料及制品中游离酚迁移量的测定。第一法 滴定法2 原理 利用溴与酚结合成三苯酚，剩余的溴与碘化钾作用，析出定量的碘，最后用硫代硫酸钠滴定析出的碘，根据硫代硫酸钠溶液消耗的量，即可计算出酚的含量。3 试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。3.1 试剂3.1.1盐酸（HCl）。3.1.2三氯甲烷(CHCl3)。3.1.3乙醇(CH3OH) 。3.1.4饱和溴水（Br2）。3.1.5碘化钾（KI）。3.1.6可溶性淀粉(C6H10O5)n。3.1.7硫代硫酸钠（Na2S2O3）。3.2 试剂配制3.2.1 碘化钾溶液（100 g/L） 称取1.00g碘化钾，用水溶解并稀释至10 mL。3.2.2 淀粉指示剂 称取0.5g可溶性淀粉，加少量水调至糊状，然后倒入100mL沸水中，煮沸片刻，现用现配。3.3 标准溶液配制3.3.1 硫代硫酸钠标准滴定溶液c(Na2S2O3)= 0.1 mol/L按GB/T 601配制与标定。3.3.2 溴标准溶液c(Br2)=0.2 mol/L 按GB/T 601配制与标定。4 分析步骤准确称取1.00g试样（最好是现生产的），小心放入蒸馏瓶内，以20mL乙醇溶解（如水溶性树脂用20mL水），再加入50mL水，然后用水蒸馏加热蒸馏出游离酚，馏出溶液收集于500mL容量瓶中，控制在4050min内馏出蒸馏液300400mL。最后取少许新蒸出液样，加12滴饱和溴水，如无白色沉淀，证明酚已蒸完，即可停止蒸馏，蒸馏液用水稀释至刻度，充分摇匀，备用。吸取100mL蒸馏液，置于500mL具塞锥形瓶中，加入25mL溴标准溶液（3.3.2）、5mL盐酸，在室温下放入暗处15min，加入10mL碘化钾溶液（3.2.1），在暗处放置10min，加1mL三氯甲烷，用硫代硫酸钠标准滴定溶液（3.3.1）滴定至淡黄色，加1mL淀粉指示液（3.2.2），继续滴定至蓝色消退为终点。同时用20mL乙醇加水稀释至500mL，然后吸取100mL，进行空白试验（如水溶性树脂则以100mL水做空白试验）。5 分析结果的表述样品中游离酚含量按式（1）计算：(1) 式中： 样品中游离酚的含量，单位为克每百克（g/100g） ； 试剂空白滴定消耗的硫代硫酸钠标准溶液体积，单位为毫升（mL）； V2 滴定试样消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）； 硫代硫酸钠标准滴定溶液的实际浓度, 单位为摩尔每升（mol/L）； 0.01568 与1.0mL硫代硫酸钠标准溶液c（Na2S2O3=1.000mol/L相当苯酚 的质量，单位为克每摩尔（g/ mol）； m 样品质量，单位为克（g）。 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5 %。7 其它 方法的定量限为0.04 g/100g 第二法比色法8 原理在碱性溶液（pH910.5）的条件下，酚与4-氨基安替吡啉经铁氰化钾氧化，生成红色的安替吡啉染料，红色的深浅与酚的含量成正比。用有机溶液萃取，以提高灵敏度，外标法定量。9 试剂和材料 注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为不含酚纯水，纯水的导电率（25）0.10mS/m。无酚蒸馏水的制备方法：于水中加入氢氧化钠至pH12以上，进行蒸馏，在碱性溶液中酚形成酚钠不被蒸出。9.1 试剂 9.1.1磷酸（H3PO4）。9.1.2硫代硫酸钠（Na2S2O3） 。9.1.3盐酸（HCl）。9.1.4三氯甲烷（CHCl3）。9.1.5碘化钾（KI）。9.1.6可溶性淀粉(C6H10O5)n。9.1.7溴酸钾（KBrO3）。9.1.8溴化钾（KBr）。9.1.9硫酸铜（CuSO4）。9.1.10 4-氨基安替吡啉（C11H13N3O）。9.1.11铁氰化钾K3Fe(CN)6。9.1.12氯化铵（NH4Cl）。9.1.13氨水（NH3H2O）。9.1.14苯酚（C6H5OH）。9.1.15无水硫酸钠（NaSO4）。9.1.16氢氧化钠（NaOH）。9.2 试剂配制9.2.1磷酸溶液（1+9）：量取10mL磷酸，用蒸馏水定容至100mL。9.2.2硫酸铜溶液（100g/L）：称取10.0g 硫酸铜，蒸馏水溶解并定容至100mL。9.2.3 4-氨基安替吡啉溶液（20g/L）：称取0.1g 4-氨基安替吡啉，蒸馏水溶解定容至50mL， 4保存， 一周内使用。9.2.4氯化铵缓冲液（pH9.8）：称取20g氯化铵溶解于100mL氨水中，密封，4保存。9.2.5铁氰化钾溶液（80g/L）：称取4.0g 铁氰化钾，蒸馏水溶解并定容至50 mL。9.2.6溴酸钾-溴化钾溶液：准确称取2.78g经过干燥的溴酸钾，加水溶解，置于1000mL容量瓶中，加10g溴化钾溶解后，以水稀释到刻度。9.2.7淀粉指示液：配制同3.2.2。 9.2.8 氢氧化钠溶液(4g/L)：称取0.4g 氢氧化钠，蒸馏水溶解并定容至100 mL。 9.3 标准溶液的配制9.3.1硫代硫酸钠标准溶液c(Na2S2O3)=0.025mol/L 按GB/T 601配制与标定。9.3.2酚标准溶液准确称取新蒸182184馏程的苯酚约1g，加水溶解后，以水定容至1000mL。9.3.3酚标准使用液的配制与标定 （1 mg/L）吸取10mL待测定的苯酚标准溶液（9.3.2），放入250mL碘量瓶中，加入50mL水、10mL溴酸钾-溴化钾溶液（9.2.6），随即加入5mL盐酸，盖好瓶塞，缓缓摇动，静置10min后加入1g碘化钾。同时取10mL蒸馏水，同上步骤做空白试验，用硫代硫酸钠标准滴定溶液（9.3.1)滴定空白和酚标准溶液，当溶液滴至淡黄色后加入2mL淀粉指示液（9.2.7）,继续滴至蓝色消失为终点。 按式（2）计算酚标准溶液中酚的含量： （2）式中：X酚标准溶液中酚的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；V1空白滴定消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）；V2酚标准溶液滴定消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）；c硫代硫酸钠标准滴定液的实际浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；15.68与1.00mL硫代硫酸纳c(Na2S2O3)=1.000mol/L标准滴定溶液相当的酚的含量，单位为毫克每摩尔（mg / mol）；V标定用酚标准使用液体积，单位为毫升（mL）。 根据上述计算的含量，将酚标准溶液稀释至1mg/mL，临用时吸取10mL，置于1000mL容量瓶中，加水稀释至刻度，使此溶液每毫升相当于10g苯酚。在吸取此溶液10mL，置于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于1.0g苯酚。10 仪器和设备可见分光光度计11 分析步骤11.1 试样制备11.1.1采样方法按GB 5009.156操作。11.1.2试样的清洗按GB 5009.156操作。11.1.3试样的食品模拟物及模拟条件的选择按相应的产品标准操作。11.1.4 试样的迁移试验预处理方法按GB 5009.156 操作。11.2 标准曲线制备吸取0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0、30.0 mL苯酚标准使用液（相当于0、2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0、30.0g苯酚），分别置于250mL分液漏斗中，各加入无酚水至200mL，各分别加入1mL氯化铵缓冲液（9.2.4）、1mL 4-氨基安替吡啉溶液（9.2.3），1mL铁氰化钾溶液（9.2.5），每加入一种试剂，要充分摇匀，放置10min，各加入10mL三氯甲烷，振摇2min，静止分层后将三氯甲烷层经无水硫酸钠过滤于具塞比色管中，用2cm比色杯以零管调零，于波长460nm处测吸光度，绘制标准曲线。11.3样品测定 量取250mL样品浸泡液置于500mL全磨口蒸馏瓶中，加入5mL硫酸铜溶液（9.2.2），用磷酸溶液（9.2.1）调剂pH在4以下亦可用两滴甲基橙指示剂（1g/L）调至溶液为橙红色加入少量玻璃珠进行蒸馏，在200mL容量瓶中预先放入5mL氢氧化钠溶液（9.2.8），接收管插入氢氧化钠溶液液面下接收蒸馏液，收集馏液至200mL，同时用250mL无酚水按上法进行蒸馏，做试剂空白试验。 将上述全部样品蒸馏液及试剂空白蒸馏液分别置于250mL分液漏斗中，以下按11.2自“各分别加入1mL缓冲液”起，依法操作，与标准曲线比较定量。12分析结果的表述 游离酚含量的计算见式（3）： （3） 式中： X试样浸泡液中游离酚的含量，单位为毫克每升（mg/L）； m1测定试样浸泡液中游离酚的含量，单位为微克（g）； m2试剂空白中酚的含量，单位为微克（g）； V测定用浸泡液的体积，单位为毫升（mL）； 1000单位转换常数。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。13 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。14 其它 方法的定量限为0.05mg/L。 第三法 高效液相色谱法15 原理 苯酚具有荧光性，将样品浸泡液，注入液相色谱仪中经C18色谱柱分离，用高效液相色谱荧光检测器检测，外标法定量。16 试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为不含酚纯水，纯水的导电率（25）0.10mS/m。无酚蒸馏水的制备方法：于水中加入氢氧化钠至pH12以上，进行蒸馏，在碱性溶液中酚形成酚钠不被蒸出。16.1 试剂16.1.1乙腈（CH3CN）色谱纯。16.2 标准品 16.2.2苯酚（C6H5OH）纯度 99%。16.3 标准溶液的配制16.3.1酚标准储备液（100 mg/L）： 同9.3.2。16.3.2苯酚标准工作液（10 mg/L）：按照9.3.3的方法进行苯酚标准储备溶液（16.3.1）的标定，根据标定的结果,将酚标准储备液用纯水稀释成浓度为: 10 mg/L。16.3.3苯酚系列标准工作液：分别吸取0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL标准工作液（16.3.2），蒸馏水定容至100mL，标准系列工作液中苯酚的浓度分别为：0.01 mg/L、0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.10 mg/L、0.20 mg/L。17 仪器和设备17.1高效液相色谱仪，配有荧光检测器17.2 分析天平：感量0.1 mg。18 分析步骤18.1 仪器参考条件 18.1.1 色谱柱： C18色谱柱（250 mm4.6 mm5m），或等效色谱柱。18.1.2流动相：乙腈+水（30+70），等度洗脱。18.1.3流速：1.0 mL/min。18.1.4柱温：30。18.1.5进样量：20L。18.1.6 检测波长：激发波长：270nm，发射波长：295nm。18.2 试样制备 同11.1 18.3 标准曲线的制作 将酚标准系列工作液(16.3.3) 按照18.1的色谱条件，注入高效液相色谱仪中，测定相应的苯酚峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。18.4 试样溶液的测定 将18.2制备的样品浸泡液冷却至室温,按照18.1的色谱条件，注入高效液相色谱仪中，得到苯酚的峰面积，根据标准曲线计算得到待测液中苯酚的浓度。19 分析结果的表述试样中游离酚的含量按式（5）进行计算。 （5）式中：X样品浸泡液中游离酚的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；c根据标准曲线计算待测液中游离酚浓度，单位为毫克每升（mg/L）。 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。20 精密度在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。21 其它方法检出限为0.003mg/L，方法的定量限为0.010 mg/L。 第四法 示波极谱法22 原理在加热条件下，游离苯酚与亚硝酸钠发生亚硝化反应生成亚硝基酚化合物，在滴汞电极上产生灵敏的极谱催化波，于电位-0.47V处，波高与苯酚的浓度在一定范围内呈良好的线性关系。试样的波高于苯酚标准曲线的波高比较而进行定量。试验中Zn2+、Fe3+、As3+、Pb2+、Cu2+等均干扰酚的测定。试样经蒸馏，大部分干扰物均可以消除。共存的10000g丙酮；800g乙醇、邻苯二甲酸酯类、乙醛；200g甲醇、三乙醇胺、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙腈、二甲基甲酰胺、丙三醇；20g甲醛、异丁醇、异戊醇；10g双酚A均对苯酚测定无干扰。在该底液中，对苯二酚、苯三酚与亚硝酸钠不起波，故无干扰。23 试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为不含酚纯水，纯水的导电率（25）0.10mS/m。无酚蒸馏水的制备方法：于水中加入氢氧化钠至pH12以上，进行蒸馏，在碱性溶液中酚形成酚钠不被蒸出。23.1 试剂23.1.1汞（Hg）。23.1.2磷酸（H3PO4）。23.1.3亚硝酸钠（NaNO2）。23.1.4硫酸铜(CuSO4)。23.1.5氢氧化钠(NaOH)。23.1.6硫代硫酸钠(Na2S2O3)。23.1.7溴酸钾(KBrO3)。23.1.8溴化钾(KBr)。23.1.9盐酸(HCl)。23.1.10碘化钾(KI)。23.1.11淀粉(C6H10O5)n。23.1.12苯酚（C6H5OH）。23.2 试剂配制23.2.1硫酸铜溶液（100g/L）: 配制同9.2.223.2.2氢氧化钠溶液（4g/L）: 配制同9.2.823.2.3溴酸钾c(1/6KBrO3)=0.10mol/L-溴化钾（10g/L）溶液：分别准确称取2.78g经过干燥的溴酸钾和10g溴化钾，以水溶解后定容至1000mL。23.2.4淀粉指示液（5g/L）：配制同3.2.2。23.2.5亚硝酸钠溶液（2mol/L）：称取138g亚硝酸钠，加水溶解并定容至1000mL。23.2.6磷酸溶液（1+9）：配制同9.2.1。23.3 标准溶液配制23.3.1硫代硫酸钠标准溶液c（Na2S2O3）=0.0250mol/L：按GB/T 601配制与标定。23.3.2酚标准储备溶液： 同9.3.2。23.3.3酚标准使用溶液（0.20mg/L）：按照9.3.3的方法进行酚标准储备溶液（23.3.2）的标定，根据标定的结果,将酚标准储备液用纯水稀释成1.00mL含10g苯酚,再吸取此溶液5.00mL,用纯水定容至250mL，此溶液1.00mL含有0.20g苯酚。24仪器和设备24.1示波极谱法仪。24.2三电极体系：用氮气控制的多模式工作电极、Ag/AgCl参比电极和铂辅助电极。24.3电热恒温水浴箱：温度为1000.5。25 分析步骤25.1 试样制备 同11.1 25.2 标准曲线的制备精密吸取0.00mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL酚标准使用液（相当于0.00、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00g苯酚）分别置于10mL容量瓶内。加3mL 2mol/L亚硝酸钠溶液，加水至刻度，盖塞，混匀。放入100水浴中，即刻准确计时60min，立即放入冷水中冷却终止反应，待温度至室温后，全部溶液移入电解池（15mL烧杯）中，起始电位-0.20V进行线性扫描，读取电位-0.47V处二阶导数的波高值。以苯酚浓度为横坐标、波高值为纵坐标，绘制成标准曲线或计算回归方