高职第十一章 维生素类药物的分析

第十一章 维生素类药物的分析 Analysis of Vitamines,前言(Preface),维生素是维持人体正常生理机能所必需的生物活性物质；主要用于机体的能量转移和代谢调节；大多数维生素人体不能合成。,40%谷类和麦类主食,12%水果,18%蔬菜,10%肉类、蛋类制品,10%乳类制品,10%油、脂肪及甜品,公元前3500年:古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来的维A;1600年:医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症;1747年:苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。1831年:胡萝卜素被发现;1905年:甲状腺肿大被碘治愈;1912年:波兰化学家冯克为维生素命名（Vitamin);1915年:科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的;1916年:维生素B被分离出来;1917年:英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是缺乏维D引起的。,1920年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素A;1922年-维E被发现;1928年-科学家发现维B至少有两种类型;1933年-维E首次用于治疗;1948年-大剂量维C用于治疗炎症;1949年-维B3与维C用于治疗精神分裂症;1954年-自由基与人体老化的关系被揭开;1957年-Q10多酶被发现;1969年-体内超级抗氧化酶被发现;1970年-维C被用于治疗感冒;1993年-哈佛大学发表维生素E与心脏病关系的研究结果。,现被列为维生素的有60余种，对维持人体健康和促进发育至关 重要的有20余种,其中的14种及其制剂可作为药物使用！,维生素分类,化学结构： 醇、酯、酸、胺、醛、酚,溶解性： 维生素A 维生素D 维生素E 维生素B 维生素C,脂溶性,水溶性,这类药物的分析方法很多，有生物法、微生物法、化学法和物理化学法，但目前常用的分析方法是化学法或物理化学法。,维生素A维生素E维生素C维生素B1,主要介绍,维生素A具有多种生理功能，对视力、生长、上皮组织及骨骼的 发育、生育都是必需的。,效用 ： 防止夜盲症和视力减退，有助于对多种眼疾的治疗（维生素A可促进眼内 感光色素的形成）； 有抗呼吸系统感染作用； 有助于免疫系统功能正常； 生病时能早日康复； 能保持组织或器官表层 的健康； 有助于祛除老年斑； 促进发育，强壮骨骼，维护皮肤、头发、牙齿、牙床的健康； 外用有助于对粉刺、脓包、疖疮，皮肤表面溃疡等症的治疗； 有助于对肺气肿、甲状腺机能亢进症的治疗。,第一节 维生素A( Vit A)的分析,第一节 维生素A( Vit A)的分析,Retinol (Vit A alcohol),VA acetate,VA polmitate,结构特点： （1）环己烯+共轭多烯侧链； （2）天然Vit A侧链为全反式； （3）天然来源主要是鱼肝油，为醋酸酯，棕榈酸酯等,目前多由人工合成。,维生素A( Vit A)的性质,A.紫外吸收 具有共轭多烯侧链紫外吸收； 最大吸收波长在325-328nm，随VA存在状态以及所用的溶剂，最大吸收波长的位置有所不同。B.溶解性： 不溶于水 溶于乙醚，氯仿，异丙醇，环己烷，脂肪和油。C.不稳定性（易发生脱氢、脱水、聚合反应）D.与SbCl3作用Carr-Price反应,CHCl3, 鉴别 含量测定,维生素A( Vit A)的鉴别试验,鉴别？,(1)SbCl3反应,Carr-price反应,加饱和无水SbCl3无醇CHCl3溶液,TLC法,(2),(3),紫外-可见分光光度法,蓝色,紫红色,VA与三氯化锑(SbCl3)中存在的亲电试剂氯化高锑（SbCl5）作用形成不稳定的蓝色正碳离子。,维生素A的无水乙醇-盐酸溶液在326nm波长处有单一吸收峰，将该溶液加热后再测定，在348，367，389nm处出现3个尖锐吸收峰。这是维生素A在盐酸催化下加热，发生脱水反应所致。,紫外-可见分光光度法,确认醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯. 例：VA和其标准品用环己烷溶解 展开剂：环己烷乙醚（80：20） 板：硅胶G 显色：SbCl3T.S.（蓝色斑点） Rf： VA 醇 0.08 VA 醋酸酯 0.41 VA 棕榈酸酯 0.75,薄层色谱法,含量？,HPLC法,荧光法,Vit A的无水乙醇溶液能产生绿色荧光。可测定血液或动物组织中Vit A含量,SbCl3比色法,加SbCl3无水CHCl3溶液，在618620nm波长处有最大吸收，符合Beer定律。,(3),(2),(1),(4),UV法(三点校正法),维生素A( Vit A)的含量测定,专属性差、显色不稳定、受水分和温度影响大,UV法(三点校正法),1.概述 共轭多烯的结构具有特征的紫外吸收。 维生素A中稀释用油和有关杂质结构相似,在维生素A最大吸收波 长附近也有吸收，对测定产生干扰。 Morton和Stubbs等人提出了三点校正法。2.原理（根据、假定） 杂质吸收在310-340nm内呈直线，且随波长的增大吸收度变小； 物质对光的吸收有加和性。,UV法(三点校正法),Vit A含量表示,生物效价：国际单位IU(international Unit) 效价(I.U./g):每克供试品中所含Vit A的国际单位数按WHO规定 Vit A醋酸酯 Vit A醇效价(I.U./g) 0.344106 0.300106 1g pure VA Vit A醋酸酯 0.344106IU,Vit A含量测定,第一法（直接测定法）：适用于酯式维生素A的测定,第二法（皂化法）：消除植物油干扰，适合VA醇。,Vitamin E,第二节 维生素E( Vit E)的分析,存在于豆类、 蔬菜、麦胚油中,与生育有关，防治习惯性流产、不育症、牙周炎等；也用于心血管疾患、脂肪肝，新生儿硬肿症的辅助治疗。,有还原性，可作抗氧剂,第二节 维生素E( Vit E)的分析,Vit E (dl-Tocopheryl Acetate),消旋-生育酚醋酸酯,结构特征：1、具有苯并二氢吡喃结构，苯环上有1个乙酰化的酚羟基，易被水解、氧化；2、脂溶性维生素。3、有四种异构体，其中型活性最强,Vit E 鉴别,Identification,(1),(4),(2),(3),硝酸反应(无水乙醇硝酸，750C显橙红色),UV法(284),GC法,三氯化铁反应,加KOH醇试液，加热，加水、乙醚，取乙醚液再加2,2-联吡啶的乙醇溶液和FeCl3的乙醇液，应显血红色。,（二）生育酚的检查,硫酸铈溶液（0.01mol/L）,指示剂：二苯胺（亮黄灰紫）,（反应摩尔比1 : 2）,（一） 酸度 游离醋酸,Vit E 的杂质检查,ChP,滴定液：,气相色谱法 ChP（2005） 内标法加校正因子 内标物 正三十二烷 固定相 硅酮（OV17） 检测器 氢火焰离子化检测器 FID,系统适用性试验要求 理论塔板数按维生素E峰计算应不低于500，维生素E峰与内标物质峰的分离度应大于2,n 500 R2,特点 准确、灵敏度高、专属性好,Thiamine Hydrochloride 盐酸硫胺,第三节 维生素B1( Vit B1)的分析,Vitamin B1,治疗脚气病、多发性神经炎和胃肠道疾病,存在于米糠、麦麸和酵母中,易溶于水不溶于乙醚,UV吸收(mmax246nm),沉淀反应碘化汞钾或硅钨酸等反应生成,碱性中遇氧化剂(铁氰化钾)产生有荧光的硫色素,鉴别试验,TLC,维生素B1结构特点与鉴别,硫色素反应 VB1特有,硝酸铅反应 生成黑色硫化铅沉淀,氯化物反应,氨基嘧啶环,噻唑环,因本品为盐酸盐,噻唑环在碱性介质中可被高铁氰化钾等氧化剂氧化，然后与嘧啶环上的-NH2缩合生成具有荧光的硫色素，后者易溶于异丁醇中显强烈的蓝色荧光，该反应又称为硫色素荧光反应。为维生素B1所特有,分子结构中含有杂环，易与生物碱沉淀剂(碘化铋钾、碘化汞钾、苦味酸等)，硅钨酸，雷氏盐等作用形成组成恒定的沉淀,维生素B1在碱性加热条件下反应放出H2S,与Pb(Ac)2试液形成黑色PbS,Vit B1 含量?,Assay,非水碱量法冰HAc和Hg(Ac)2 HClO4滴定,毛细管电泳法,硫色素荧光法(VB1专属反应),紫外可见分光光度法(max 246nm),酸性染料比色法,盐酸硫胺与酸性染料(溴麝香草酚蓝)形成盐，在420nm处测A值。,高效液相法,1,2,3,6,5,4,片剂、注射液,原料,简便、快速、准确,含量测定 Assay,第三节 维生素C( Vit C)的分析,Vitamin C,防治坏血病，预防冠心病，大量静脉注射用于克山病的治疗,参与机体代谢，可帮助酶将胆固醇转化为胆酸而排泄，减低毛细管的脆性，增加机体抵抗力,( L-抗坏血酸Ascorbic acid),L-抗坏血酸 L-去氢抗坏血酸 L-二酮古罗糖酸,有生物活性 有生物活性 无生物活性,二烯醇强还原性,弱酸性,UV,max 243nm,维生素C结构与性质,溶于水，不溶于氯仿或乙醚,旋光性,糖类性质,水解性,Vit C 鉴别,1,5,4,3,2,UV法溶于盐酸中 (max 243nm),AgNO3反应(Ag ),2,6-二氯靛酚反应 (颜色消失)氧化性染料 Vc专属反应,与其他氧化剂反应使KMnO4、亚甲蓝、磷钼酸等褪色,糖类性质反应,加HCl水解、脱羧、失水后变为糠醛，再加吡咯50加热变蓝色,玫瑰红,黑,强还原性,（二