PC,PS,狼疮

1,止凝血产品线移转沃芬中国08 May 2012,血凝特殊项目 PC PS LAC2013.5,Growing Together,2013 |携手发展,蛋白C（Proein C）,1、是什么？,蛋白C（PC）是由肝脏合成的依赖维生素K的双链糖蛋白，分子量62000，由462个氨基酸组成。血浆浓度为60nmol/L。PC活性在1960年为Mammen等首先发现。1976年，Stenflo用离子交换层析法分离时获得的四个蛋白峰中，在第三峰（C峰）中含有这种活性，所以将这种蛋白命名为PC。,蛋白C的结构,维生素K依赖的蛋白肝内合成与 II, VII, IX, X因子结构类似呈无活性状态在血浆中存在,PC是体内重要的抗凝蛋白，其主要功能是通过水解活化的因子（Fa）和活化的因子（Fa）而下调凝血级联。 PC在血浆中以无活性的酶原形式存在，当它的重链氨基端上一个小肽被切下时，就变成有活性的丝氨酸蛋白酶活化的蛋白C（APC）。这一活化作用是凝血酶在钙离子存在下与磷脂表面的凝血酶调节蛋白所构成的复合物对PC催化作用而达到的。,2、有什么用？,蛋白质C激活后，在磷脂和Ca2+（正二价钙离子）存在时，灭活Fa、Fa；阻碍Fa与血小板上的磷脂结合，削弱Fa对凝血酶原的激活作用；刺激纤溶酶原激活物释放，增强纤溶酶活性，促进纤维蛋白溶解 。,蛋白C系统Protein C System,血液凝固 限速因子,在凝血过程中，FVIIIa和FVa是FXa和凝血酶激活的限速因子，（FVIIIa作为辅因子，使FIXa对FX的激活速度提高20万倍；FVa作为辅因子可使FXa对凝血酶原的激活速度提高10000倍）,蛋白C的活化,发生在内皮细胞表面，需要有： 凝血酶 血栓调节蛋白 凝血酶/血栓调节蛋白复合物,活化的蛋白C的功能,通过调节凝血酶的产量抑制血液凝固在蛋白S存在的条件下抑制V和 VIII 因子通过中和纤溶酶原激活物的抑制剂（PAI）而促进纤维蛋白的溶解。,3、临床意义,PC缺乏的临床主要表现为静脉血栓，发病部位以下肢深静脉与肺栓塞常见；浅表性血栓性静脉炎、肠系膜静脉及脑静脉血栓也较多见 PC缺乏症可由获得性或遗传性原因引起。,获得性蛋白C缺乏症,引起缺乏的原因：1、药物：雌激素降低蛋白C合成 维生素K拮抗剂降低蛋白C，蛋白S羧基化 化疗降低蛋白C，蛋白S的表达2、炎症：白细胞酶蛋白水解作用使蛋白C，蛋白S去羧基；DIC中大量消耗蛋白C3、其他：手术后、尿毒症、血液透析、呼吸窘迫症等。,PC缺乏陷的特点,随机选择的静脉血栓栓塞病例中，PC缺陷症的发病率为2%-5%,但在年龄较低的患者群中，发生率较高，达标10%-15%，PC缺陷症患者的静脉血栓的相对风险增加 10-15倍。据文献报道，获得性或杂合子的PC缺陷症在普通人群中有较高的发生率，发生率为1/500，但多数PC缺陷症需要有其他的辅因子缺陷（如蛋白S）或风险因素同时存在时，才会导致血栓形成。新生儿重度PC缺陷症的发生率约为1/50w1/70w。,PC缺陷症临床表现： 90%以上表现为静脉血栓，发病部位以下肢DVT与PE常见；浅表性血栓性静脉炎、肠系膜静脉及脑静脉血栓也较多见，少数患者可出现动脉血栓形成。 50%的患者有血栓形成的家族史，80%患者的首次血栓形成的发病年龄在45岁以前。,4、检测原理,发色底物法（试剂货号20300500） 将待测血浆中加入蛋白C激活剂（铜斑蛇的蛇毒）活化的蛋白C（APC）可水解随后加入的发色底物，释放出显色剂pNA，pNA的量与血浆中APC的量成正比。,蛋白S（PS）,1、是什么？,PS与PC相似，均为依赖维生素K的糖蛋白，是1977年美国西雅图（Seattle）研究人员发现的一种蛋白质。而以该城市的头一个字母“S”命名，故称PS。 PS的分子量为70000，有635个氨基酸组成，血浆浓度约为0.3mol/L。,人类蛋白S基因位于第3号然染色体上，是由肝细胞合成的依赖维生素K的蛋白质。在血浆中的含量，男性高于女性10%15%。,2、有什么用？,PS的主要功能是作为PC灭活Fa和Fa时的辅因子，增强PC的灭活作用。其作用机制是增强APC与磷脂的亲和力，增强APC灭活Fa、Fa的作用。 血浆中的PS存在两种形式，约40%的PS以游离形式存在，它们具有PC灭活Fa、Fa的辅因子功能，其余60%的PS与血浆中C4B结合蛋白构成结合型PS，无辅因子功能。,3、临床意义,PS缺乏的主要临床表现为静脉血栓形成，包括反复的深静脉血栓、肺栓塞、脑或肠系膜血栓形成。主要发生在年轻人。,（1）获得性PS缺乏症： 促使C4B增加，降低FPS的原因：妊娠、口服避孕药、糖尿病、炎症、系统性红斑狼疮、肾病、吸烟等； 促使PS降低的疾病：早产儿、维生素K缺乏、香豆素类药物治疗、乳腺癌化疗、肝病等； PS与细胞结合增多的疾病：真性红细胞增多症、原发性血小板增多症等。（2）遗传性PS缺乏症,PS缺陷症有以下特点,（1）由于蛋白S也是维生素K依赖性蛋白质，所以口服抗凝药时，可见游离蛋白S降低，但可不显著。（2）遗传性PS 缺陷患者常伴发严重的深静脉血栓形成（3）DIC时蛋白S可正常。（4）呼吸窘迫综合症（ARDS）时游离蛋白S降低。,（5）雌激素可使蛋白S释放减少。绝经前妇女有生理性降低（正常的80%）。（6）肝病可引起蛋白S 中度降低。（7）应用雌激素或口服避孕药可引起蛋白S 活性显著降低。,试剂货号：20002700参考值范围（ACL TOP）： 蛋白S： 76135%,4、检测原理,免疫比浊法： 第一步先向待检血浆里加入吸附了乳胶的纯化C4B，在钙离子存在的情况下，血浆中的游离PS与C4B结合； 第二步再加入抗PS的单克隆抗体乳胶试剂，使其血浆中PS-C4B复合物结合成大复合物。待检血浆中大分子复合物的浓度与游离PS的量成正比。,狼疮抗凝物（LAC）,1、是什么？,是存在于患自身免疫性疾病的病人血浆中的一种抗磷脂的自身抗体。最早发现在系统性红斑狼疮（SLE）患者血清中，故名。,由 IgG, IgM, or IgA 组成的免疫球蛋白，在体外可干扰依赖磷脂的凝血过程从而导致凝血过程的延长。LAC 是抗磷脂综合症的一个信号，本身不是疾病。,2、有什么用？,狼疮抗凝物通过结合磷脂复合物及抑制磷脂表面发生凝血反应来干扰依赖磷脂的凝血过程而起作用。,3、临床意义,LAC阳性的患者在临床上并不出血，反而与血栓形成有关，LAC阳性患者中约有1/3发生血栓，最常见的是深静脉血栓、肺栓塞及大血管血栓。由于凝血和抗凝血过程均依赖磷脂的参与，因此LAC由于抑制磷脂的生物学特性，在体外产生抗凝效应，而在体内可促进血栓的形成。,为什么检测 LA?,反复发生的习惯性流产 15-20% RSA due to APA怀孕2-3个月发生胎儿宫内死亡胎儿生长延迟早熟新生儿血栓症,为什么检测 LA?,获得性血栓形成倾向：动脉:脑动脉血栓形成 50岁以下的中风占30%冠状动脉血栓视网膜动脉血栓静脉:DVT & PE肾静脉血栓肠系膜静脉血栓,临床意义,1、抗磷脂综合症2、结缔组织疾病3、自身免疫性疾病4、血栓性疾病,谁需要此类测试？,1、年轻血栓形成病者：静脉45岁，动脉30岁2、静脉血栓形成复发者及血栓性静脉炎患者3、血栓形成于异常部位4、没有原因的新生血栓形成5、有血栓形成倾向病者的亲人,谁需要此类测试？,6、有静脉血栓形成家庭病史的患者7、没有原因的APTT延长8、经常流产、特发性血小板减少及全身的红斑狼疮患者,4、检测原理,凝固法： 包括二个试验内容LAC-S（狼疮抗凝物筛选试验）、LAC-C（狼疮抗凝物确认试验）。 第一步是LAC-S，试剂中含有与蝰蛇毒结合的稀释磷脂，该试验对LAC非常敏感。蝰蛇毒可直接激活因子，在因子的辅助下可激活凝血酶，最终形成纤维蛋白，引起血浆凝固。如果待测血浆中含有LAC（抗磷脂抗体），则凝固时间明显延长。,如果LAC-S结果明显延长，则必须做LAC-C。 第二步LAC-C：试剂中含有高浓度的磷脂，如果检测结果恢复正常，则证明血浆中确有磷脂抑制物存在。 第三步按下式计算结果： LAC-S值/LAC-S正常人均值=LAC-S比率 LAC-C值/LAC-C正常人均值=LAC-C比率,注：LAC-S、LAC-C正常人均值来源于该试剂说明书，各实验室应建立自己的正常值。 LAC-S比率/LAC-C比率=标准化LAC比率 结果解释： 标准化比率2.0 有大量LAC存在 标准化比率在1.5-2.0之间 中等量LAC存在 标准化比率在1.2-1.5之间 少量LAC存在本试验无需定标,dRvvt试剂介绍,NEW HemosIL dRVVT Screen (PN0020301500)NEW HemosIL dRVVT Confirm(PN0020301600) 将会取代HemosIL LAC Screen (PN 0020008000)HemosIL LAC Confirm (PN 0020008200),39,dRvvt试剂介绍,在ACL全自动血凝仪上检测和原来的LAC有相似的性能和原来的LAC试剂盒的配置一样使用IL的4ml试剂瓶，每试剂盒比LAC能增加大约30%的检测量（从160到210测试/盒ACL TOP，扣除死腔量）条码标签的使用使ACL TOP Family的试剂装载过程进一步自动化，且具有能够跟踪试剂效期等相关功能,40,41,狼疮抗凝物试剂盒（SCT）,试剂盒组成: PN 0020004800 3 x 5 mL SCT 筛选试剂15mL Liq. 3 x 5 mL SCT 确认试剂15mL Liq. 3 x 10 mL氯化钙(聚凝胺) 30mL Liq.,42,实验原理及试