RNA凝胶电泳试验

餐后高血糖餐后高血糖 大血管疾病 他汀完全阻滞大血管疾病 他汀完全阻滞 TAGE 引起的引起的 核因子活性上升 核因子活性上升 VEGF 表达增加和随之的表达增加和随之的 DNA 合成增加 微合成增加 微 血管 甲羟戊酸抑制他汀的生长阻滞作用 他汀可能阻血管 甲羟戊酸抑制他汀的生长阻滞作用 他汀可能阻 TAGE RAGE 信号通路 血管高通透性和生成 信号通路 血管高通透性和生成 还剂量依赖性降低 还剂量依赖性降低 T AGE 引起的超氧族产生 阿托伐他汀抑引起的超氧族产生 阿托伐他汀抑 CRP 表达表达 TAGE toxic 是否有非毒性是否有非毒性 AGE AGE 引起并发症的主要引起并发症的主要 成分 成分 甘油醛与蛋白的氨基快速反应后形成甘油醛与蛋白的氨基快速反应后形成 TAGE 导致血管炎症导致血管炎症 和氧化应激 和氧化应激 TAGE 形成可能较糖化血 形成可能较糖化血 glc AGEs 的前体 的前体 快 快 Cerivastain advanced glycation end products atherosclerosis 糖基化终末产物对大鼠肾皮质基质金属蛋白酶糖基化终末产物对大鼠肾皮质基质金属蛋白酶 2 活性的影响活性的影响 SD 大鼠 100 40 天 微血管病变 视网膜 肾脏 结果变化不明显 Wistar 100 一个月 肾脏病变 仅比较了肾功能 无结构变化的比较 胰高血糖素样肽胰高血糖素样肽 1 GLP 1 一种肠促胰岛素因子 空肠 一种肠促胰岛素因子 空肠 回肠和盲肠的 回肠和盲肠的 L 细胞分泌促胰岛素释放 延缓胃排空 降低细胞分泌促胰岛素释放 延缓胃排空 降低 胰高血糖素和降低食欲等 可进一步水解 胰高血糖素和降低食欲等 可进一步水解 GLP 1 7 36 NH2 是体内是体内 GLP 1 的自然形式 其促胰岛素分泌的作用最强 的自然形式 其促胰岛素分泌的作用最强 GLP 1 的生理功能 促葡萄糖依赖性促胰岛素的分泌 有效降低餐的生理功能 促葡萄糖依赖性促胰岛素的分泌 有效降低餐 后血糖 抑制胰高血糖素分泌 避免低血糖 影响肠胃消化 后血糖 抑制胰高血糖素分泌 避免低血糖 影响肠胃消化 GLP 1 可能通过促进生长抑素的释放和抑制胃泌素的释放而抑可能通过促进生长抑素的释放和抑制胃泌素的释放而抑 制胃酸分泌 控制餐后血糖 制胃酸分泌 控制餐后血糖 GLP 1 显著影响中枢神经系统 显著影响中枢神经系统 明显抑制食欲 明显抑制食欲 GLP 1 可促进可促进 B 细胞增殖 再生 抑制其凋亡细胞增殖 再生 抑制其凋亡 GLP 1 分泌减少被认为是分泌减少被认为是 B 细胞功能衰退的重要因素 细胞功能衰退的重要因素 GLP 1 血管内皮功能明显效果 对神经元具有保护作用 血糖正常血管内皮功能明显效果 对神经元具有保护作用 血糖正常 时 时 GLP 1 作用随之降低 治疗不会引起低血糖 最主要是降作用随之降低 治疗不会引起低血糖 最主要是降 低餐后高血糖 低餐后高血糖 160 0 240 RNA 凝胶电泳试验凝胶电泳试验 实验基本原理实验基本原理 RNA 可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测 在非变性电泳中 可以分离混合物 中不同分子量的 RNA 分子 凡是无法确定分子量 只有在变性情况下 RNA 分子完全伸 展 其泳动率才与分子量成正比 判断 RNA 提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一 完整的未降解的 RNA 制品的 电泳图谱应可清晰看到 18s rRNA 28s rRNA 5s rRNA 的三条带 且 28s rRNA 的亮 度应为 18s rRNA 的两倍 实验试剂实验试剂 1 0 1 DEPC 水 200ml 双蒸去离子水加 0 2mlDEPC 焦炭酸 二乙酯混匀 室温 放置过夜 高压灭菌 2 10 x 电泳缓冲液 吗啉代丙烷磺酸 MOPS 0 4mol L pH 7 0 NaAc 0 1mo l L 乙二胺四乙酸 EDTA 10mmol L 3 50mL 变性琼脂糖凝胶 1 10 x 电泳缓冲液 5 mL 琼脂糖 0 5 g 0 1 DE PC 水 36 5 mL 加热溶解 稍冷却 加入 8 5 ml 37 甲醛 4 上样缓冲液 染料 50 甘油 1mmol LEDTA 0 4 溴酚兰 0 4 二甲苯蓝 5 甲酰胺 去离子 v 电泳槽清洗 去污剂洗干净 一般浸泡过夜 水冲洗 乙醇干燥 3 H2O2灌满 室温放置 10 分钟 0 1 DEPC 水冲洗 操作步骤操作步骤 1 将制胶用具用 70 乙醇冲洗一遍 晾干备用 2 制胶 称取 0 5g 琼脂糖粉末 加入放有 36 5mL 的 DEPC 水 蒸馏水蒸馏水 40ml 的 锥形瓶中 加热使琼脂糖完全溶解 稍冷 60 70 却后加入 5ml 的 10 x 电泳缓冲液 8 5 9 ml 的甲醛 0 5 l 溴化乙锭溴化乙锭 然后在胶槽中灌制凝胶 插好梳子 水平放置待 凝固后使用 3 加样 在一个洁净的小离心管 DEPC 处理过的 500 l 的 中混合以下试剂 电 泳缓冲液 10 x 2 l 甲醛 3 5ml 甲酰胺 10ml l RNA 样品 3 5 4 5 l 混匀 置 60 保温 10min 冰上速冷 加入 3 l 的上样缓冲液 染料 混匀 取适量加样于凝胶 点样孔内 同时点 RNA 标准样品 4 电泳 打开电泳仪 电泳槽内加入电泳槽内加入 1XMOPS 缓冲液缓冲液 稳压 7 5V cm ml 电泳 5 电泳结束后通过紫外透视仪观察 注意事项注意事项 本实验中必须保持 RNase 污染以免 RNA 降解 所有试剂用 DEPC 水配制 用具也 用 DEPC 水冲洗 并灭菌 电泳 RNA 所用器械如制胶的模具 梳子 电泳槽等用肥皂粉洗干净后用双蒸水冲 洗二遍后在室温晾干备用 用新的 1XTBE 配制 1 2 琼脂糖凝胶 倒胶时溴化乙锭 EB 直接加入凝胶中 制备好的琼脂糖凝胶板放入电泳槽后再加入经高压灭菌过的 1XTBE 液面只能刚好同胶 面平齐 缓冲液不要淹过胶面 点样时 样品 RNA 每 1