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水解度的测定水解度的测定 方法一 方法一 茚三酮比色法茚三酮比色法 1 标准曲线制定 1 20 g ml 甘氨酸 2mg 甘氨酸定容到 100ml 容量瓶中 2 茚三酮显示剂 水合茚三酮 0 5g 果糖 0 3g 磷酸氢二钠 11 2g 磷酸二氢钾 6g 定 容到 100ml 稍热溶解 避过低温保存 1 周 3 40 乙醇 标准曲线制作 试管012345678待测 样品 标液 ml0 000 10 20 30 40 50 60 71 00 5 蒸馏水 ml2 001 901 801 701 601 501 401 301 001 5 茚三酮显示 剂 ml 1111111111 摇匀 沸水浴 15min 用冷水迅速冷却至室温 40 乙醇 ml5555555555 甘氨酸 g0246810121420 OD 570nm N 水解液蛋白含量 凯氏定氮 F 米糠蛋白换算系数 5 95 方法二 采用甲醛滴定法 方法二 采用甲醛滴定法 水解度 水解后生成的氨基氮的量 样品中总氮含量 100 1 粗蛋白含量的测定 采用凯氏定氮法 2 氨基氮的测定 氨基酸含有氨基和羧基 具有两性 加入甲醛与氨基酸中的氨基作用 可消除 其碱性 使羧基显示出酸性 用氢氧化钠标准溶液滴定 即可对氨基酸进行定 量 1 酚酞指示剂 0 5g 酚酞溶于 100ml 50 的乙醇中 2 中性甲醛溶液 甲醛溶液 36 37 分析纯 50ml 加入 0 5 的酚酞指示 剂约 3ml 滴加 0 1mol L NaOH 使溶液显微粉色 储存于棕色瓶中 临用前 配制 具体方法如下具体方法如下 分别吸取 2mL 不同水解度的水解液于烧杯中加蒸馏水 5mL 向烧杯中加入 5 滴 酚酞指示剂 混合后加中性甲醛溶液 2 0ml 再混合 用 0 1mol L NaOH 滴定显 微粉色 同时取同浓度但未水解的蛋白液 2mL 做空白实验 式中 V 样品耗用氢氧化钠标准溶液毫升数 V0 空白耗用氢氧化钠标准溶液毫升数 N 氢氧化钠标准溶液摩尔浓度 14 008 1 mL 浓度为 1 000 mol L 氢氧化钠标准溶液相当于氮的质量 mg 方法三 方法三 氮溶指数测定 氮溶指数测定 TCA NSI 可以通过检测其氮溶解指数来初步判定小肽或寡肽含量 NSI N1 N0 100 N0 总氮 N1 可溶性氮 用三氯乙酸 可溶性氮测定法 三氯乙酸 TCA 是一种蛋白质沉淀剂 它可以沉淀蛋白质和较长的肽段 可 以被三氯乙酸沉淀的肽段所含的最少氨基酸残基数与底物的种类有关 就特定 的底物而言 三氯乙酸氮溶解指数可以定性反映蛋白质的分解情况 溶解指数 越高 表明较短肽段含量越高 三三氯氯乙乙酸酸氮氮溶溶指指数数 TCA NSI 测测定定方方法法 将 20ml 10 三氯乙酸 TCA 溶液添加到20ml 待测混合液 混合液浓 度为 10 混合液震荡 静置10 分钟 在4000 转 分下离心20 分钟
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