微生物饲料添加剂肠球菌的测定 实时荧光聚合酶链反应法——XX材料_第1页
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微生物饲料添加剂肠球菌的测定微生物饲料添加剂肠球菌的测定 实时荧光聚合酶链反应法实时荧光聚合酶链反应法 XXXX材料材料 一 标准名称微生物饲料添加剂肠球菌的测定实时荧光聚合酶链反 应法 二 提出单位上海市动物疫病预防控制中心 三 起草单位上海市动物疫病预防控制中心 四 立项理由微生物饲料添加剂可参与调节胃肠道内微生态平衡 刺激免疫功能 从而促进动物生长 提高饲料转化率 因其无污染 无残留 且可作为抗生素的有效替代物而在畜牧业发 展中具有良好的应用前景 屎肠球菌和粪肠球菌是我国饲料添加剂目录中包含的两种肠球菌 屎肠球菌肠道黏附能力好 对高温 高盐 酸碱等具有良好的耐受 性 对部分抗生素也具备很好的耐受性 粪肠球菌可在肠道上皮细胞上形成生物膜 保护肠上皮细胞免受有 害物质侵袭 并可产生抑菌物质 从而起到抑菌杀菌作用 上述两种肠球菌饲料添加剂因其对家畜家禽的生长 免疫及消化功 能具有明显的改善作用而被广泛使用 是市售微生物饲料添加剂产 品的重要组成部分 但目前还没有统一的检测标准对其进行质量控制 有效活菌数是评价微生物饲料添加剂产品质量的重要指标 目前国内主要应用平板计数法和镜检法对微生物饲料添加剂进行检 测 但这两种方法存在耗时 操作繁琐 重复性差等缺点 国外采用的生物化学发光法 免疫法 显色培养基法等方法由于检 测成本昂贵 检测条件限制 难以在国内普及与推广 鉴于目前市售微生物饲料添加剂质量参差不齐 难以充分发挥作用 影响了畜牧业的健康发展 因此亟需建立一种快速有效且普适性 好的标准方法对微生物制剂的质量进行评估 本标准旨在建立EMA qPCR快速检测方法对肠球菌饲料添加剂进行检测 叠氮溴乙锭 EMA 是一种荧光插入型核酸结合染料 能够选择性地 与死细胞DNA共价结合 从而抑制其PCR扩增 实时荧光定量PCR qPC R 可通过荧光信号的累积实时监测PCR进程 根据标准曲线对产品中 肠球菌的有效活菌数进行准确定量 现阶段在食品 环境及临床样本检测等方面已有研究采用EMA qPCR方法对活菌数进行定量 但该方法在微生物饲料添加剂领域的应用未见报道 本标准拟建立的EMA qPCR方法能快速 准确地对肠球菌饲料添加剂的有效活菌数进行检 测 也可为其它菌种微生物饲料添加剂检测标准的建立提供参考 目前我国饲料添加剂目录中微生物添加剂有34种 其中仅有5种微生 物添加剂具有国家标准或农业标准 EMA qPCR检测方法的建立将有效填补我国饲料行业微生物添加剂检测的 空白 为国家饲用微生物制剂的质量控制奠定基础 同时 应用EMA qPCR方法对市售肠球菌饲料添加剂产品的质量进行评估 将进一步 为微生物饲料添加剂产品质量提供有力保障 有效推进畜牧业的健 康发展 五 主要内容本标准规定了微生物饲料添加剂粪肠球菌 屎肠球菌 的EMA qPCR测定方法 该方法能快速 准确地对粪肠球菌 屎肠球菌饲料添加剂的有效活

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