微生物基础知识的培训

微生物知识培训,案例：,1970-1971年：美国败血症流行，7个州8家医院发现350例败血症流行病，原因是一种静脉注射剂被细菌污染。德旺波特事件：英国德旺波特医院输液灭菌过程局部灭菌不到位，造成污染，导致6例败血症患者死亡。,案例：,“欣弗”事件2006年，安徽华源生物药业有限公司生产的克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液（欣弗）经检验，无菌检查和热原检查不符合规定，导致11人注射死亡。事件原因：在生产过程中违反规定，未按批准的工艺参数灭菌，降低灭菌温度，缩短灭菌时间，增加灭菌柜装载量，影响了灭菌效果。事件处理：国家药监局撤销该公司药品GMP证书和“欣弗”药品的批准文号，撤销总经理等5人职务，并给予安徽省药监局局长、阜阳市药监局局长和安监科科长记大过等行政处分，随后不到一月安徽华源总经理裘祖贻在家谢罪自杀。,案例：,2008年，黑龙江省完达山制药厂生产的刺五加注射液经检验显示被细菌污染，导致3人注射死亡。卫生部、国药局联合处理，吊销该厂39个注射剂批准文号。“毒黄瓜”事件2011年，德国市场的黄瓜遭受肠出血性大肠杆菌（EHEC） “污染”，截至目前已造成15人死亡，约1400人受到感染。目前，在瑞典、挪威、丹麦、英国、荷兰、法国、瑞士、奥地利等国也都发现了病例或疑似病例，整个欧洲人人恐慌，谈“瓜”色变。,一切都是微生物惹得祸！,药品生产过程中微生物控制非常重要,一、微生物学及其发展史二、微生物定义及特征三、微生物的五大共性四、微生物的种类五、微生物的形态六、微生物的结构七、微生物的分布八、微生物的控制九、药品微生物控制,一、微生物学及其发展史,微生物学（mocrobiology）就是研究那些小得必须借助显微镜才能看见的活生物体。我们研究微生物的生命活动，达到控制腐败微生物和病原微生物的活动，以防止食品、药品变质和杜绝因其引起的病害。,一、微生物学及其发展史,1、公元前二千多年夏禹时代，就有酿酒的记载，酿酒的记载，酿酒就必须有酵母菌参与。2、十七世纪荷兰人吕文虎克，用自制显微镜首先观察到微生物（细菌）。3、十九世纪，法国科学家斯德，发现发酵和腐败是微生物的作用结果，为了防止酒类变质，他创造加温处理方法“巴氏消毒法”。,二、微生物定义,微生物(microorganism) 是指存在于自然界的一大群形体微小、结构简单、进化低级、肉眼直接看不见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍、数千倍，甚至数万倍才能观察到的微小生物。,二、微生物的特征,小（形体微小）：m（微米）级在光学显微镜下可见、nm（纳米）级在电子显微镜下可见简（结构简单）：单细胞、简单的多细胞、非细胞低（进化低级）：原核类、真核类、非细胞类,三、微生物的五大共性,1、体积小，面积大 为五大共性的基础。小体积大面积系统必然有一个巨大的营养物吸收面、代谢废物的排泄面、环境信息的接收面。2、吸收多，转化快 为其高速生长繁殖和产生大量代谢产物提供了充分的物质基础。3、生长旺，繁殖快 微生物具有极高的生长和繁殖速度。,三、微生物的五大共性,4、适应强，易变异 微生物对环境条件尤其是恶劣的“极端环境”有惊人的适应能力 ，堪称生物界之最。 微生物的个体一般都是单细胞、简单多细胞或非细胞，通常都是单倍体，繁殖快与外界环境直接接触，即使变异的频率特别低，也可在短时间内产生大量变异的后代。最常见的变异形式是基因突变。,三、微生物的五大共性,5、分布广，种类多 地球上除了火山的中心区域外，从土壤圈、水圈、大气圈直至岩石圈，到处都有微生物的踪迹。 地球上有200万种生物，其中微生物有20万种之多。,四、微生物的种类,微生物根据其不同的进化水平和性状上的明显差别可分为原核微生物、真核微生物和非细胞微生物三大类群。原核微生物：细菌(Bacteria)、放线菌(Actinomyces)、蓝细菌(Cyanobacteria)、立克次氏体(Rickettsia)、支原体(Mycoplasm)、衣原体(Chlamydia)、螺旋体(Spirochaeta)、蛭弧菌(Bdellovibrio)等真核微生物：霉菌(Mold)、酵母菌(Yeast)等非细胞类微生物：病毒(Virus) 个体微小，可通过细菌滤器 等,五、微生物的形态,细菌：是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方式无性繁殖的原核微生物，分布广泛，主要有球状、杆状和螺旋状三种形态。真菌：是一类有细胞壁，无叶绿素，以寄生或腐生方式生存，少数为单细胞，多数为多细胞，能进行无性或有性繁殖的一类真核细胞型微生物。单细胞真菌呈圆形或卵圆形，称为酵母菌；多细胞真菌由菌丝和孢子组成，并交织成团，称丝状菌或霉菌。病毒：属非细胞型微生物，在自然界分布非常广泛，可在人、动物、植物、真菌和细菌中寄居并引起感染。病毒是体积最小、结构最简单的微生物，它仅有一种核酸（DNA或RNA）作其遗传物质。,放线杆菌,弧状菌,酵母菌,葡萄球菌,乳酸杆菌,梭状芽孢杆菌,黑曲霉,六、微生物的结构,细菌的结构：基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核特殊结构：荚膜、芽孢等,细菌的结构：细胞壁：位于细胞表面，是一层较为坚韧、略具弹性的结构。其功能是可以保护细胞免受机械或渗透压的破坏，维持细胞的外形。细胞壁是多孔性的，具有一定的屏障作用，水和某些化学物质可以通过，但对大分子物质有阻拦作用。细胞膜：是外侧紧贴于细胞壁而内侧包围细胞质的一层柔软而富有弹性的半透性薄膜。它是一个重要的代谢活动中心，具有多种新陈代谢所需的酶。,细菌的结构：细胞质：无色透明，呈粘液状。其内含有某些结构和内含物。细胞核：细菌的核位于细胞质内，没有核膜、核仁，没有固定形态，结构也很简单，因而称之为原核。荚膜：有些细菌在一定营养条件下，可向细胞壁表面分泌一层松散透明、粘度极大、粘液状或胶质状的物质称为荚膜。,细菌的结构：芽孢：细菌在一定环境条件下或处在一定的生活阶段，细胞质脱水浓缩，在菌体内形成一个折光性圆形或椭圆形的个体。其对热力、干燥、辐射、化学消毒等理化因素有强大的抵抗力。,炭疽杆菌（芽孢形成 ）,七、微生物的分布,（一）生物体内外的微生物（二）土壤中的微生物（三）水中的微生物（四）空气中的微生物（五）极端环境下的微生物,（一）生物体内外的微生物,植物体表面 根系和叶面动物体表面 人体内外微生物的分布 1、皮肤 2、口腔 3、上呼吸道 4、下呼吸道 5、胃肠道 6、泌尿生殖道,（一）生物体内外的微生物,人是洁净室中最大的污染源 1、人在代谢过程中会释放和分泌污染物。 2、人体表面、衣服能沾染、携带污染物。3、人在洁净室内的各种动作也会产生微粒和微生物。,（一）生物体内外的微生物,在正常人体皮肤、粘膜及与外界相通的各种腔道，存在着对人体无害的微生物群，包括细菌、真菌、螺旋体、衣原体等。习惯称之为正常菌群。而身体的器官内部以及血液和淋巴系统内没有微生物，如果在这些部位的任何一处发现有相当数量的微生物，通常表明疾病状态。因此，将在正常情况下，体表和体腔中所存在的一定种类和数量的微生物称为人体的正常微生物群落。,（一）生物体内外的微生物,所谓的正常菌群，实际上是相对的、可变的和有条件的。当机体防御机能减弱时，一部分正常菌群会成为病原微生物。另一些正常菌群因其生长部位改变，也可引起疾病。还有一些正常菌群由于某些外界因素的影响，破坏了其中各种微生物间的相互制约关系，也能引起疾病。这种情况在长期服用抗生素后尤为突出。这时，由于肠道内对药物敏感的细菌被抑制，而不敏感菌或耐药性菌就会乘机大量繁殖，从而引起病变。,（一）生物体内外的微生物,1、皮肤： 皮肤上常见的主要有表皮葡萄球菌、白色葡萄球菌、八叠球菌属细菌、类白喉棒杆菌等，它们组成皮肤上的正常微生物群落。有时也有金黄色葡萄球菌，当皮肤受到损伤时，可引起化脓性感染。,（一）生物体内外的微生物,药品生产质量管理规范中明确规定：进入洁净室（区）的人员不得化妆和佩带饰物，不得裸手直接接触药品。药品生产质量管理规范中明确规定：无菌工作服必须包盖全部头发、胡须及脚部，并能阻留人体脱落物。,（一）生物体内外的微生物,2、口腔 口腔中有很多微生物。常见的主要有唾液链球菌、溶血链球菌、乳酸杆菌、流感杆菌、类白喉棒杆菌等，它们组成口腔内的正常微生物群落。,（一）生物体内外的微生物,3、上呼吸道 包括喉、鼻道和鼻咽。 存在甲型链球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感杆菌、乙型链球菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌等微生物。,（一）生物体内外的微生物,4、下呼吸道 包括气管、支气管和肺 。 健康人的下呼吸道是无菌的。,（一）生物体内外的微生物,5、胃肠道 胃酸具有杀菌作用，健康人的胃一般无菌。 肠道内呈碱性，同时又有某些食物消化的产 物作为养料，这些都适于微生物的生长繁殖。因此肠道内含有大量的细菌。常见的主要有大肠埃希氏菌、产气杆菌、变形杆菌、粪产碱杆菌、粪链球菌、梭杆菌属、螺旋体属、乳杆菌属、梭菌属、拟杆菌属中的一些种。它们组成肠道内的正常微生物群落。,（一）生物体内外的微生物,大肠埃希氏杆菌： 在环境卫生和食品卫生学中，常用作被粪便 污染的检测指标，是粪便污染的指示菌。 平时生活中尤其在药品生产中，上完卫生间之后一定要记住洗手。洗手程序及其注意事项在SOP中有详细规定。,大肠埃希杆菌，革兰染色 显示肠杆菌科典型的革兰阳性杆菌。（革兰染色，放大1000倍）在麦康基培养基上培养的大肠埃希杆菌 产生粉红色乳糖发酵菌落。麦康基培养基是肠道细菌的选择培养基，含胆盐、乳糖和pH指示剂中性红。乳糖发酵菌落产生酸，将指示剂变红。（麦康基琼脂，18小时，37）,（一）生物体内外的微生物,作为粪便污染的指示菌，应具备以下条件： 该指示菌在肠道内大量存在,，比其它病原微生物多，对人、畜一般无致病性。 受人畜粪便污染的供试品易检出本指示菌，未受污染的供试品无本指示菌。 该指示菌在供试品中存活时间与其它病原微生物的存活时间相当，且在供试品中不自行繁殖。 该指示菌的性状稳定，检查方法简便、快速、准确。,（一）生物体内外的微生物,6、泌尿生殖道 常见的有嗜酸乳杆菌、类白喉棒杆菌、葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌。,（二）土壤中的微生物,土壤是微生物的大本营，有“微生物天然培养基”的称号。 自然界中，土壤是微生物生活最适宜的环境，它具有微生物所需要的一切营养物质和微生物进行生长繁殖及生命活动的各种条件。,（三）水中的微生物,水体是微生物广泛分布的第二个天然环境。 水中的细菌来自土壤、尘埃、污水、人畜排泄物及垃圾等。 药品生产质量管理规范第四章设备第三十四条中明确规定：纯化水、注射用水的制备、储存和分配应能防止微生物的滋生和污染。储罐和输送管道所用材料应无毒、耐腐蚀。管道的设计和安装应避免死角、盲管。储罐和管道要规定清洗、灭菌周期。,（四）空气中的微生物,灰尘“微生物的飞行器”。进入洁净室（区）的空气要经过空气净化系统的处理。洁净室（区）要定期消毒。使用的消毒剂不得对设备、物料和成品产生污染。消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。,（五）极端环境下的微生物,在自然界中，存在着一些可在绝大多数微生物所不能生长的高温、低温、高酸、高碱、高盐、高压和高辐射强度等极端环境下生活的微生物，如嗜热菌、嗜冷菌、嗜酸菌、嗜碱菌、嗜盐菌、嗜压菌、耐辐射菌等，它们被称为极端环境微生物。,八、微生物的控制,（一）5个基本概念（二）消毒剂的种类（三）常用的消毒剂（四）四种灭菌的方法,（一）5个基本概念, 抑菌：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。 防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。使用同一种化学药品在低浓度时为防腐剂，在高浓度时为消毒剂。,（一）5个基本概念, 消毒：杀灭物体上病原微生物的方法。并不一定杀死含芽孢的细菌或非病原微生物。用来消毒的药品叫消毒剂。一般消毒剂在常用浓度下只对细菌的繁殖体有效，对其芽孢则需提高消毒剂的浓度和延长作用时间。,（一）5个基本概念, 无菌：不存在活菌。 灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。比消毒要求高，它杀灭了包括细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。,（一）5个基本概念,灭菌和消毒的比较：共性：杀灭微生物以控制其污染和防止传染。区别：1、杀灭微生物完全性的差异。灭菌要求完全杀灭微生物，灭菌后的药品不应含有活的微生物。而消毒不完全杀灭微生物，只能杀灭一部分微生物即病原微生物。这是相对的。因为强效消毒剂在适宜条件下可能达到灭菌效果；在不适宜条件下灭菌，有不完全杀灭微生物的可能。2、方法上的差异：灭菌方法具有多样性，消毒常借助化学物质。3、效果检查的差异：灭菌效果用无菌检查法检测，而消毒效果以消毒剂的效价来评定。,（二）消毒剂的种类,1、重金属及其化合物2、有机化合物3、卤族元素及其化合物4、表面活性剂5、染料,（三）常用的消毒剂,洁净室（区）常用的消毒剂甲醛薰蒸（作用机制：阻抑菌细胞核蛋白质合成) 甲醛有挥发性，对眼睛、皮肤有刺激性，引起皮肤硬化或皱褶，不宜做皮肤消毒用。） 0.1%新洁尔灭溶液(作用机制：使蛋白质变性，破坏细胞膜。)75%酒精溶液（常用于皮肤消毒。能迅速杀死细菌繁殖体，对一般病毒有一定的消毒作用。） 5%来苏水(甲酚皂)溶液（作用机制：损伤细胞膜 ）,（四）灭菌的方法,1、热力灭菌2、气体灭菌3、辐射灭菌4、过滤灭菌,（四）灭菌的方法,1、热力灭菌： 主要是利用高温的致死作用，使微生物的蛋白质和核酸等重要生物高分子发生变性、破坏，而导致细胞死亡。 分为干热灭菌与湿热灭菌,（四）灭菌的方法,(1)干热灭菌：灼烧与火焰灭菌 、干烤灭菌灼烧主要用于接种工具灭菌，如接种针、接种环、刀、剪等在火焰上烧灼即可达到彻底灭菌。火焰灭菌是在无菌操作中，将试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反复通过火焰数次，利用火焰对管口等进行灭菌，防止管口污染，作为无菌操作过程中的辅助灭菌手段。 干烤灭菌是利用热辐射及干热空气进行灭菌。,（四）灭菌的方法,(2)湿热灭菌法：通过热蒸汽或沸水使细菌蛋白质变性而杀灭微生物的方法。包括：煮沸灭菌、流通蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌煮沸灭菌：加热使水至沸而杀灭细菌的方法。凡不适于高压蒸汽灭菌的物品可常压下在水中煮沸一段时间达到灭菌目的。流通蒸汽灭菌：常压下，用蒸笼、蒸锅等在100灭菌。仅可杀死细菌繁殖体，不能完全杀灭芽孢。,（四）灭菌的方法,高压蒸汽灭菌：通过加压提高蒸汽温度，穿透力强、温度高、灭菌效果最好。是最可靠最适用最广泛的灭菌方法，凡耐高温和潮湿的物品可应用本法灭菌。注意事项：完全排出高压灭菌器内的冷空气。（冷空气存在时，同一表压下所达到的温度值偏低，不符合规定的要求，灭菌就不彻底。）,（四）灭菌的方法,2、气体灭菌：利用化学消毒剂形成的气体来杀灭微生物。臭氧杀菌消毒广泛存在于自然界中，雷雨过后的空气有一种清新的感觉，是因为空中放电产生臭氧，消灭了空气中的微生物，净化了空气。臭氧具有强烈的杀菌消毒作用。其杀菌消毒原理是：臭氧在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧和单个氧分子，后者具有很强的活性，对细菌具有很强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内氧化葡萄糖所必需的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为普通氧分子，不存在任何有毒残留物，故称为无污染消毒剂。不但对各种细菌（包括肝炎病毒、大肠杆菌、绿脓杆菌及杂菌等）有极强的杀灭能力，且对杀死霉菌也很有效。,（四）灭菌的方法,3、辐射灭菌 （1）电离辐射:用引起电离的X射线、射线灭菌。 电离辐射对微生物的致死作用，主要是细胞内生物化学的变化所致。 辐射的药品、食品的安全问题：辐射灭菌用于药品或食品都应经过安全试验，完全有必要进行科学全面的评价，高剂量的辐射更应慎重。（2）电磁波辐射（包括紫外线波长190350nm、红外线波长0.771000m、微波波长11000mm）。,（四）灭菌的方法,紫外线灭菌1、 紫外线辐射的穿透力很弱，因此主要用于无菌室、某些工作区的空气灭菌、物体表面灭菌。2、实践工作中在无菌室无菌柜净化工作台工作室及车间安装紫外灯，一般仅起杀死空气中部分微生物的作用，而不能起到完全灭菌的作用。3、紫外线消毒方法验证中紫外灯需确认的参数主要有紫外线的波长、紫外线强度、灯管的寿命。4、紫外灯消毒的效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关，还需通过验证来确定。5、注意事项：紫外线直射对眼、皮肤有损害。紫外线照射过程中产生臭氧，臭氧过多对眼及鼻腔有刺激，产生头晕、胸闷、血压降低，所以无菌室及净化工作台紫外线照射停止后，请稍等片刻，让臭氧消散，方可进行实验操作。,（四）灭菌的方法,4、过滤灭菌：以物理的方法除去介质中的微生物。常将空气或液体中的微生物及杂质用不同材料制成的薄膜滤器过滤得到无菌、无杂质的空气或液体。滤过病毒的滤膜孔径为25 100nm；滤过细菌的滤膜孔径为0.220.45m。,九、药品微生物的控制,为什么要对药品生产进行微生物控制？（1）有些微生物可以致病。我们绝不能让我们的顾客有感染致病微生物的潜在危险。,（2）微生物对药物的影响,药物物理形状的改变：药物的物理形状可因染菌而改变。1）固体制剂（如片剂、丸剂等）表面湿润或粘滑这是由微生物大量繁殖所致；呈现出绿色、桃红、褐色、黄或黑色等各种颜色，这是由带色菌落所产生的色素所致。口服后会使使用者引起感染症和痢疾等。2）液体制剂、增稠剂和悬浮剂受微生物污染后可产生解聚作用，粘度降低、悬浮物质沉降、乳剂腐败变块状或砂粒状，甚至分离成两相，变成水和油乳状。3）注射剂被污染后，注射剂会浑浊、有沉淀或有悬浮物、变色等，滴注会出现发烧和败血症，肌注会引起局部感染或溃烂。滴眼剂被污染后，滴眼剂也会浑浊、有沉淀或有悬浮物、变色等，使用后会引起感染症、溃疡、结膜炎等。,药物化学成份的变化微生物几乎具有降解所有有机物的能力，这种降解过程是在温和条件下发生的，它较非生物学过程的工业反应容易得多。各种物质的降解率依其化学结构、产品的物理化学性质、微生物的种类及污染程度等而定。药品疗效的变化某些微生物有很强的降解力。因此许多药物可被降解而失效或显著地改变疗效。,污染：指当某物与不洁净的或腐坏物接触或混合在一起使该物变的不纯净或不适用时，即受污染。药品的微生物污染也称染菌。简单的说当一个产品中存在不需要的物质时，他即受到了污染。交叉污染：主要不同类别药物之间的交叉污染、人流和物流的交叉污染以及空气之间的交叉污染等。,防止污染和交叉污染 有需要时需洗手及消毒尽量减少直接以双手接触药品接触药品的表面及用具 用后清洗 转换产品时清洗,手的卫生：每只手可携带40万个细菌；刚洗过的手，每平方厘米也可检验出3200个细菌 。,洗手的重要性:用流水（如自来水）洗手，能使手上的致病微生物减少80%。用皂液充分洗手，再用自来水冲洗能使致病微生物减少95%。洗手后正确使用消毒剂能使致病微生物减少到99%。,更衣,着衣种类 测定日期 细菌数（cfu）/100cm2上衣内侧 使用五日后 300 外侧 使用五日后 200裤子内侧 使用五日后 450 外侧 使用五日后 70帽子内侧 使用五日后 100 外侧 使用五日后 150口罩内侧 使用一日后 22000 外侧 使用一日后 100袜子内侧 使用一日后 30000 外侧 使用一日后 2800,污染的形式：尘埃粒子污染和微生物污染。污染的载体：空气、水、表面和人。洁净区的主要污染源：空气、制药用水、操作人员、设备，原辅料等，其中操作人员是主要的污染源。,洁净区的主要污染源：空气由于人们的生产和生活活动，使空气中存在某些微生物，包括一些病原微生物，使其附着于空气中的尘埃、飞沫上进入人体或药品而引起疾病 和污染。洁净度测定包括： 悬浮粒子 微生物 - 浮游菌 - 沉降菌 - 表面微生物,悬浮粒子：泛指悬浮在气体当中的微细固体或液体粒子（直径小于100m的颗粒物 ）。在环境科学中，悬浮粒子特指悬浮在空气当中的微细污染物，为空气污染的其中一个主要来源。,悬浮粒子计数器,微生物沉降菌：是收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。 本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。,浮游菌：即悬浮在空气中的活微生物粒子。 本测试方法采用计数浓度法，即通过收集悬浮在空气中的生物性粒子于专门的培养基，经若干时间，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数，以此来评定洁净室(区)的洁净度。,浮游菌采样器,表面微生物：包括设备、车间、人员、包装材料等表面微生物。本测试方法采用接触碟法和棉签擦拭法。,棉签,接触碟,洁净区的主要污染源：水工艺用水在制药企业防止污染及作为制药用水方面至关重要 。因为它不仅作为产品的一个成分，而且需用其洗涤或冷却。药品的微生物污染的关键环节在于工艺用水，因为水是微生物生长代谢的一个必要成分。 措施：对工艺用水系统采用湿热灭菌。,洁净区主要的污染源：设备几乎没有细菌不“吃”的东西，设备表面、容器内外表面等，都可能是微生物寄存的地方。设备和器具与药品直接接触 设备和器具的清洗清洁程序必须经过验证按清洗周期清洗清洗和存放设备、器具处应与生产区域洁净等级相同,生锈的机器,卫生不彻底,洁净区的主要污染源：原辅料原辅料可能将大量的微生物带入到药物制剂中。因此，选用符合标准的原辅料，将有助于控制药品和环境的污染水平。 措施：原辅料在贮藏过程中必须注意环境条件 ；清洁或消毒处理，进行合理封装。,洁净区的主要污染源：人员人体散发的尘粒数（万个/每分钟） :,10,50,100-250,人员不良行为所产生的污染:当有如下行为时将相应增加微粒的产生量:吸烟者的呼吸 500%喷嚏 2000%搓手 200%行走 200%跺脚 5000%静止时散发的尘粒数最少。,在洁净室内当操作人员穿无菌服时发菌量：,微生物的污染途径自身污染：由于患者和员工自身携带微生物而污染。接触污染：由于和非无菌的用具、器械或人的接触而污染。空气污染：由于空气中所含微生物的沉降、附着或被吸入而污染。其他污染：由于其他因素（如昆虫）而污染。,控制微生物污染的措施事前控制（1）人员条件：体检（直接接触药品人员每年至少体检一次，传染病患者，体表有伤口者，皮肤病患者、药物过敏者不得从事直接接触药品生产）、人员培训；（2）生产过程风险分析与评估；（3）过程设计：灭菌工艺设计、工艺审查；（4）检验方法：设计、实验室控制；（5）设施、设备设计、安装与验证：洁净等级、在线清洗与灭菌装置、验证（工艺、公用系统、检验方法验证）；,事中控制（1）人员卫生a.卫生习惯 在生产区内做到三个严禁：禁止吃东西、禁止喧哗、禁止吸烟。勤洗手；不得戴手表、饰品和化妆；b.人员着装按要求对工作服、鞋和帽进行穿戴、清洗和更换。c. 口罩按要求带好口罩，口罩要遮住口、鼻；口罩要经常清洗、消毒或换新；尽量使用一次性性口罩；,（2）工艺卫生按工艺要求进行消毒、灭菌；控制进入洁净区的人数，包括进入房间的人数。（3）环境卫生定期做好压差、温湿度、风速、尘埃粒子、沉降菌、浮游菌等空气净化洁净度的监测。有效地阻止室外的污染侵入室内。（空气过滤、压差）迅速有效地排除洁净区内已发生的污染。灭菌（湿热灭菌：衣服）、清洁、消毒（甲醛消毒最彻底，臭氧和紫外辅助）控制污染源，减少污染发生量（人、物）。,（4）物料制定合理的内控质量标准，购进物料必须符合质量要求；按规