执业兽医资格考试微生物学革兰氏阳性球菌

1,细菌总论课堂考查,1.比较革兰氏阳性菌和比较革兰氏阳性菌的细胞壁的结构及化学组成的差异.(20分)2.什么是革兰氏染色?有何意义?其染色机制如何?(20分)3.绘出细菌的基本结构和特殊结构图.(10分)4.细菌的生长曲线如何确定?试述细菌生长各期的 特点.(20分)5.人工培养细菌的条件主要有哪些?(10分)6.比较外毒素与内毒素的主要异同点 .(10分)7.试述毒力岛的概念及遗传学意义.(10分),2,第七章 革兰氏阳性球菌,球菌（coccus）,3,4,第一节 葡萄球菌属（Staphylococcus),广泛分布于自然界：空气、水、土壤、物品及人和动物的皮肤及与外界相通的腔道中。,葡萄球菌能引起皮肤黏膜、多种组织器官的化脓性炎症，是最常见的化脓性球菌。,耐药性菌株多，金黄色葡萄球菌高达90%以上。,5,葡萄球菌属的细菌是一群革兰氏阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状而得名。,Staphylococcus aureus,6,一、生物学性状：,形态与染色 培养特性 生化反应 抗原结构 抵抗力 致病性及毒力因子,7,（一）形态与染色,形状 大小 群体形态,光镜下的葡萄球菌,8,（一）形态与染色,形状 大小 群体形态,特殊结构 染色,9,（二）培养特性,1. 营养要求：,2. 兼性厌氧或需氧,3. 最适生长温度,4. 最适pH值,5. 生长状态,肉汤 普通琼脂平板 血琼脂,10,11,（三）生化特性,生化反应不恒定，因菌株而异。 多数能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。 致病菌株能分解甘露醇。,12,（四）抗原结构,葡萄球菌一般具有两种抗原：,蛋白质 多糖类,13,存在于菌体表面，是一种蛋白质成分，称葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal protein A,SPA)。已知90% 以上的金黄色葡萄球菌含有SPA，是细胞壁上的一种能与多种哺乳动物(如猪、豚鼠、人)IgG结合的蛋白质。可与IgG的Fc段结合，而不影响IgG的Fab段活性，在血清学反应中，可起到第二抗体的作用。,1. 蛋白质抗原：,14,为半抗原，具有型特异性。,2. 多糖类抗原, A型多糖抗原：从金黄色葡萄球菌提取，主要成分为核糖醇残基。 B型多糖抗原：从表皮葡萄球菌提取，主要成分为甘油残基。,15,（五）抵抗力,对外界因素的抵抗力强于其他无芽孢菌。,干燥脓汁、痰液-2-3月 加热60-1h，80 -30min ,对多种抗生素敏感，但易产生耐药性。,16,（六）致病性及毒力因子,金黄色葡萄球菌可产生多种酶类和毒素。,酶类 毒素,17,主要的毒力因子：, 毒素（Alphatoxin) 肠毒素（Enterotoxin） 凝固酶（Coagulase） 毒素休克综合征毒素1（Toxic shock syndrome toxin 1, TSST-1） 耐热核酸酶（Heat stable nuclease) ,18,溶血素,葡萄球菌溶血素（Staphyolysin） 多数致病性葡萄球菌产生溶血等。按抗原性不同，至少有、五种，对人类在致病作用的主要是溶血素。作用特点:是一种“攻击因子”，化学成分为蛋白质，分子量约为30000，不耐热，6530分钟即可破坏。如将-溶血素注入动物皮内，能引起皮肤坏死，如静脉注射，则导致动物迅速死亡。溶血素还能使小血管收缩，导致局部缺血和坏死，并能引起平滑肌痉挛。溶血素是一种外毒素，具有良好的抗原性。经甲醛处理可制成类毒素。,19,血浆凝固酶（Coagulase）,是能使含有枸椽酸钠或肝素抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质，致病菌株多能产生，常作为鉴别葡萄球菌有无致病性的重要标志。 凝固酶有两种：一种是分泌至菌体外的，称为游离凝固酶（Free coagulase）为蛋白质。另一种凝固酶结合于菌体表面并不释放，称为结合凝固酶(Bound coagulase)或凝聚因子(Chumping factor)凝固酶和葡萄球菌的毒力关系密切。凝固酶阳性菌株进入机体后，使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面，阻碍体内吞噬细胞的吞噬，即使被吞噬后，也不易被杀死。同时，凝固酶集聚在菌体四周，亦能保护病菌不受血清中杀菌物质的作用。葡萄球菌引起的感染易于局限化和形成血栓，与凝固酶的生成有关。,20,肠毒素（Enterotoxin）,从临床分离的金黄色葡萄球菌，约1/3产生肠毒素按抗原性和等电点等不同，葡萄球菌肠毒素分A、B、C1、C2、C3、D、E和F八个血清型，细菌能产生一型或两型以上的肠毒素肠毒素是单一的多肽链，含有较多的赖氨酸、酷氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸肠毒素可引起急性胃肠炎即食物中毒与产毒菌株污染了牛奶、肉类、鱼是虾、蛋类等食品有关，在20以上经810小时即可产生大量的肠毒素肠毒素是一种可溶性蛋白质，耐热，经100煮沸30分钟不被破坏，也不受胰蛋白酶的影响，故误食污染肠毒素的食物后，在肠道作用于内脂神经受体，传入中枢，刺激呕吐中枢，引起呕吐，并产生急性胃肠炎症状发病急，病程短，恢复快。一般潜伏期为16小时，出现头晕、呕吐、腹泻，发病12日可自行恢复，预后良好。,21,毒性休克综合征毒素（Toxic shock syndrome toxin1,TTST1）,系噬菌体群金黄色葡萄球菌产生作用特点:可引起发热增加对内毒素的敏感性增强毛细血管通透性引起血管紊乱而导致休克。,22,二、分 类：,1. 根据色素产生、表型,2. DNA基因型,23,三种葡萄球菌的主要性状,24,三、微生物学检查：,1. 标本：不同病型采集不同标本。,化脓性病灶-脓汁、渗出液 疑为败血症-血液 脑膜炎-脑脊液 食物中毒-剩余食物、呕吐物、粪便,25,2. 涂片、染色、镜检：作出初步判断,3. 分离、培养和鉴定：,4. 葡萄球菌肠毒素检查：,26,四、常见致病菌种,金黄色葡萄球菌,27,葡萄球菌病病鸡胸部发炎，有脓性分泌物,28,葡萄球菌病病鸡股骨坏死，易骨折（箭头指向）,29,葡萄球菌病病鸡鸡冠肿胀，有溃疡结痂,30,葡萄球菌眼睑肿胀，眼结膜充血、出血,31,葡萄球菌病鸡精神沉郁，瘫痪，以胸骨着地,32,雏鸡感染葡萄球菌，引起脐部发炎，皮下充血、出血，有胶冻样渗出物,33,葡萄球菌病鸡趾部溃疡结痂,34,葡萄球菌病病鸡趾部红肿,35,内脏型葡萄球菌病病鸡肝脏、脾脏及肾脏密集大小不一的黄白色坏死点,36,葡萄球菌病病眼睑肿胀，有炎性分泌物,37,葡萄球菌病病鸡趾底肿胀,溃疡,38,广泛分布于自然界：空气、水、尘埃、人和动物的皮肤及与外界相通的腔道黏膜及乳汁、粪便中都有存在。,链球菌能引起人和动物的各种化脓性炎症、猩红热、新生儿败血症、细菌性心内膜炎、肺炎、乳腺炎等疾病。,第二节 链球菌属(Streptococcus),39,一、生物学性状：,形态与染色 培养特性 生化反应 抗原结构 抵抗力 致病性及毒力因子,40,（一）形态与染色,形状 大小 群体形态,光镜下的链球菌,41,（一）形态与染色,形状 大小 群体形态,特殊结构 染色,42,43,Streptococcus pyogenes. Left. Gram stain of Streptococcus pyogenes in a clinical specimen. Right. Colonies of Streptococcus pyogenes on blood agar exhibiting beta (clear) hemolysis,44,（二）培养特性,1. 营养要求：,2. 兼性厌氧或专性厌氧,3. 最适生长温度,4. 最适pH值,5. 生长状态,肉汤 普通琼脂平板 血琼脂,45,46,（三）生化特性,能分解葡萄糖、蔗糖，产酸不产气。 对乳糖、甘露醇、水杨苷、山梨醇等的利用能力因不同菌株而异。 不产生触酶。 菌种鉴定的依据之一。,47,（四）抗原结构,抗原构造复杂，有三种抗原：,属特异抗原-核蛋白抗原，又称P抗原； 群特异性抗原-多糖抗原，又称C抗原； 型特异性抗原-蛋白质抗原，或称表面抗原。,48,链球菌抗原结构模式图,49,（五）抵抗力,对外界因素的抵抗力不强。,对热敏感，煮沸可很快被杀死。对常用消毒剂敏感。,对青霉素、红霉素、磺胺类药物敏感，极少有耐药菌株发现。,50,（六）致病性及毒力因子,致病性链球菌可产生多种酶类和毒素，导致人、马、牛、猪、羊、实验动物等多种疾病。,胞壁脂磷壁酸（LTA） 纤维粘连蛋白结合蛋白（FBP） M蛋白 链球菌溶血素（streptolysin） 致热外毒素 透明质酸酶 ,51,M蛋白,是链球菌细胞壁中的蛋白质组份具有抗吞噬和抗吞噬细胞内的杀菌作用纯化的M蛋白能使纤维蛋白原沉淀，凝集血小板，白细胞，溶解多形核细胞，并抑制毛细血管中的细胞的移动有抗原性，刺激机体产生型特异性抗体，并与变态反应疾病有关。,52,脂磷壁酸（LTA）,与细菌粘附于宿主细胞表面有关大多数LTA位于细胞膜和肽聚糖之间，通过肽聚糖孔伸展至细菌细胞表面人类口腔粘膜和皮肤上皮细胞、血细胞等细胞膜上均有LAT的结合位点。,53,链激酶(Streptokinase , SK),又称链球菌溶纤维蛋白酶(Streptococcal fibrinolysin)是一种激酶能激活血液中的血浆蛋白酶原，成为血浆蛋白酶，即可溶解血块或阻止血浆凝固，有利于细菌在组织中的扩散耐热，10050分钟加热仍保持活性。链激酶抗体能中和该酶的活性。,54,链球菌溶血素（Streptolysin）,有溶解红细胞，杀死白细胞及毒害心脏的作用，主要有“O”和“S”两种。链球菌溶血素O（Streptolysin O;SLO） 为含-SH基的蛋白质，对氧敏感，遇氧时一SH基即被氧化为-SS-基，暂时失去溶血能力。若加入0.5%亚硫酶钠和半胱氨酸等还原剂，又可恢复溶血能力。溶血素O能破坏白细胞和血小板。动物试验又证实对心脏有急性毒害作用，使心脏骤停。抗原性强，感染后23周，85%以上病上产生抗“O”抗体，病愈后可持续数月甚至数年，可作为新近链球菌感染，或可能风湿活动的辅助诊断。溶血素“S”（Streptolysin S,SLS） 是一种小分子的糖肽，无抗原性。对氧稳定，对热和酸敏感。血平板所见透明溶血是由“S”所引起，能破坏白细胞和血小板，给动物静注可迅速致死。注射小鼠腹腔，引起肾小管坏死。,55,致热外毒素（Pyrogenic extoxin）,曾称红疹毒素(Erythrotoxin)或猩红热毒素(Scarletfever toxin)是人类猩红热的主要致病物质为外毒素，使病人产生红疹该毒素是蛋白质，对热稳定，具有抗原性，产生的毒素能中和该毒素的活性可分为A、B、C三种不同抗原性的毒素且无交叉保护作用该毒素还有内毒素样的致热作用，对细胞或组织有损害作用。,56,二、分 类：,1. 根据溶血现象分类, 型溶血链球菌致病力弱，多引起局部化脓性炎症； 型溶血链球菌致病力强，常引起人和动物的各种链球菌病，大部分致病性链球菌属于此类； 型溶血链球菌一般不致病。,57,2. 根据抗原结构分类(Lancefield分类法),A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T,根据链球菌细胞壁中的多糖抗原的不同，将链球菌分成,AH，KV等20个血清群,、U、V,58,三、微生物学检查：,1. 标本：不同疾病采集不同标本。,脓汁、血液、乳汁、组织,2. 涂片、染色、镜检：作出初步判断,3. 分离、培养和鉴定：,4. 血清学试验：,59,链球菌的微生物学诊断一般程序如下：,60,四、常见致病菌种,无乳链球菌 停乳链球菌 乳房链球菌 马链球菌兽疫亚种 化脓性链球菌 肺炎链球菌 猪链球菌,61,1、猪链球菌病 猪链球菌病的潜伏期为7天。可表现为败血型、脑膜炎型和淋巴结脓肿型等类型。,临床症状,62,(1)败血型 主要为C、D、L群链球菌引起，以仔猪发病较多(发病率10%，病死率60%)，架子猪次之。 最急性型：发病急、病程短，常无任何症状即突然死亡(似丹毒的败血型)。体温高达4143，呼吸迫促，腹下有紫红斑，四肢关节和肌肉疼痛驱赶时尖叫，多在24小时内死于败血症。 急性型：多突然发生，体温升高4043，呈稽留热。呼吸迫促，鼻镜干燥，从鼻腔中流出浆液性或脓性分泌物。结膜潮红，流泪。颈部、耳廓、腹下及四肢下端皮肤呈紫红色，并有出血点。多在13天死亡。 慢性型(关节炎型)：表现为多发性关节炎。关节肿胀，跛行或瘫痪，最后因衰弱、麻痹致死。,63,精神沉郁，共济失调，昏睡，全身皮肤广泛性出血、潮红,64,精神沉郁，颈部、耳廓皮肤呈紫红色，并有出血点,65,耳廓皮肤呈紫红色，并有出血点,66,腹下皮肤呈紫红色，并有出血点,67,腹下及四肢下端皮肤呈紫红色，并有出血点,68,关节肿胀、疼痛，有跛行，甚至不能站立,69,(2)脑膜脑炎型 可由多种C群链球菌(、)所引起，多见于48周龄以下哺乳或断奶仔猪，也可发生于较大的猪，哺乳仔猪发病常与母猪带菌有关。 病猪体温升高，不食，主要表现为CNS紊乱症状，如磨牙、口吐白沫，眼凝视，共济失调，后肢摇摆不稳，盲目运动或转圈运动，全身痉挛、抽搐，倒地四肢划动似游泳状，最后麻痹衰竭而死。病程短的几小时，长的15天，致死率极高。有的可转为慢性，生长不良，关节肿胀。,70,CNS紊乱，共济失调，全身痉挛抽搐，倒地四肢划动似游泳状,71,神经症状，全身痉挛抽搐,72,(3)心内膜炎型 本型不容易生前发现和诊断，多发于仔猪，突然死亡或呼吸困难，皮肤苍白或体表发绀，很快死亡。往往与脑膜炎型并发。,73,(4)淋巴结脓肿型 主要由E群链球菌引起，以颌下、咽部、颈部等处淋巴结化脓和形成脓肿为特征。 本病多见于架子猪，传播较缓慢，发病率低。病猪脓肿破溃后，脓汁污染饲料、饮水、环境，带菌猪扁桃体容易分离本菌，尤为病愈猪带菌可达半年之久。颌下淋巴结化脓性炎症最常见，其次为咽部和颈部淋巴结。可见局部隆起，触诊硬固，有热、痛，可影响采食、咀嚼、吞咽、呼吸，直至脓肿成熟，可自行破溃而自愈。,74,2牛链球菌病。主要引起牛发生急性与慢性卡他性乳管炎和乳腺炎。表现除高热及全身症状外，乳房有肿胀，有热痛，奶汁变色变性，泌乳停止，乳腺硬化，严重者乳房形成脓肿。3羊链球菌病。体温升高，不食，反刍停止。眼结膜充血、流泪，口流涎。呼吸困难，咽喉部及颌下淋巴结肿大。粪便带血，孕羊流产。死前磨牙，抽搐等。4禽链球菌病。急性病例体温高，粘膜发绀，腹泻，内髯水肿而显苍白。经1224小时死亡。慢性病例常见闭目、嗜眠、腹泻、消瘦，少数发生结膜炎，腿，翼轻瘫。病雏精神沉郁，运动障碍，有的出现神经症状，作转圈运动，痉挛，常于35日内死亡。5兔链球菌病。主要危害幼兔，体温升高，不食，沉郁，呼吸困难，间歇性下痢，呈脓毒败血症而死。,75,1败血型 呈现出血性败血症变化，与最急性猪瘟相似。剖检可见鼻黏膜紫红色、充血及出血，喉头、气管充血，常有大量泡沫。肺充血肿胀。全身淋巴结有不同程度的肿大、充血和出血。脾肿大13倍，呈暗红色，边缘有黑红色出血性梗死区。胃和小肠黏膜有不同程度的充血和出血，肾肿大、充血和出血，脑膜充血和出血，有的脑切面可见针尖大的出血点。,病理变化,76,心脏充血、出血,77,胃出血,78,肝充血、肿大,79,肝脏出血、坏死,80,脾肿大，败血脾,81,肺充血、出血,82,肺充血、出血，内有大量泡泡沫,83,小肠充血、出血,84,胃充血、出血,85,肠系膜淋巴结出血,86,肠粘膜充血、出血,87,膀胱出血,88,2脑膜脑炎型 剖检可见脑膜充血、出血甚至溢血，脑组织切面有点状出血，个别脑膜下积液，脑脊髓液浑浊，增量，有多量白细胞。其他病变与败血型相同。,脑膜充血、出血,89,3心内膜炎型 剖检可见心内膜炎、心包炎，瓣膜上有菜花样赘生物。,心二尖瓣上有菜花样赘生物,90,纤维素性心包炎，心瓣膜上有菜花样赘生物,91,4淋巴结脓肿型 剖检可见关节腔内有黄色胶胨样或纤维素性、脓性渗出物，淋巴结脓肿。,淋巴结化脓性出血性炎,92,下颌淋巴结化脓性炎,93,关节液增多，关节囊肿大,94,1根据流行特点、临床症状、病理变化、实验室检验等作出诊断。实验室检验有： 涂片镜检：可以分别采取内脏触片或血液、脑脊髓液、关节液、脓汁涂片镜检，可见革兰氏阳性球形或卵圆形细菌，无芽胞，有的可形成荚膜，常呈单个、双连的细菌，偶见短链排列。 分离培养：该菌为需氧或兼性厌氧，在血液琼脂平板上接种，37培养24小时，形成无色露珠状细小菌落，菌落周围有溶血现象。镜检可见长短不一链状排列的细菌。 必要时用PCR方法进行菌型鉴定。,诊断,95,96,97,98,2结果判定 疑似：临床症状符合败血型、脑膜炎型、淋巴结脓肿型之一的；或剖检病变符合败血型、脑膜炎型或淋巴结脓肿型之一的。 确诊：已判定为疑似猪链球菌病的，且符合涂片镜检或分离培养镜检症状的。,99,任何单位和个人发现患有本病或疑似本病的猪，都应当及时向当地动物防疫监督机构报告。 当地动物防疫监督机构接到疫情报告后，按国家动物疫情报告管理的有关规定上报。 疫情确诊后，动物防疫监督机构应及时上报同级兽医行政主管部门，由兽医行政主管部门通报同级卫生部门。,疫情报告,100,1发现疑似猪链球菌病疫情时 发现疑似猪链球菌病疫情时，当地动物防疫监督机构要及时派员到现场进行流行病学调查、临床症状检查等，并采样送检。确认为疑似猪链球菌病疫情时，应立即采取隔离、限制移动等防控措施。,疫情处理,101,2当确诊猪链球菌病疫情时 当确诊发生猪链球菌病疫情时，由所在地县级以上兽医行政主管部门按下列要求划定疫点、疫区、受威胁区。 疫点：指患病猪所在地点。一般是指患病猪及同群畜所在养殖场（户组）或其它有关屠宰、经营单位。 疫点出入口必须设立消毒设施。限制人、畜、车辆进出和动物产品及可能受污染的物品运出。对疫点内畜舍、场地以及所有运载工具、饮水用具等必须进行严格彻底地消毒。,102,本病呈零星散发时，疫点病猪作无血扑杀处理，对同群猪立即进行强制免疫接种或用药物预防，并隔离观察14天。必要时对同群猪进行扑杀处理。对病死猪及排泄物、可能被污染饲料、污水等按附件的要求进行无害化处理（GB16548畜禽病害肉尸及其产品无害化处理规程）；尸体需要运送时，应使用防漏容器，并在动物防疫监督机构的监督下实施。对可能被污染的物品、交通工具、用具、畜舍进行严格彻底消毒。 参与处理疫情的有关人员，应穿防护服、胶鞋，戴口罩和手套，做好自身防护。,103,疫区：指以疫点为中心，半径1公里范围内的区域。在实际划分疫区时，应考虑当地饲养环境和自然屏障（如河流、山脉等）以及气象因素，科学确定疫区范围。 疫区交通要道建立动物防疫监督检查站，派专人监管动物及其产品的流动，对进出人员、车辆须进行消毒。停止疫区内生猪的交易、屠宰、运输、移动。对畜舍、道路等可能污染的场所进行消毒。对疫区内的所有易感动物进行紧急免疫接种。,104,受威胁区：指疫区外顺延3公里范围内的区域。对受威胁区内的所有易感动物进行紧急免疫接种。对猪舍、场地以及所有运载工具、饮水用具等进行严格彻底地消毒。 本病呈暴发流行时（一个乡镇30天内发现50头以