番茄的植物组培

叮叮小文库番茄的植物组培14生物科学一班 201412200501026 朱少峰摘要 目的：传统西红柿中的番茄红素含量相当少，并且大量存在于西红柿籽周围的类脂物中，所以我们希望通过植物组培的方法获得高产量番茄红素的番茄。方法：先对番茄种子进行杀菌消毒，进行培育，再利用培养的幼苗选取外植体进行愈伤组织培养，发育成成熟植株。结果：得到了高产量番茄红素的番茄。结论：利用组织培养而成的番茄番茄红素的产量较传统种植多。关键词：番茄红素 愈伤培养 激素配比 外植体培养前言番茄营养丰富，风味香郁，深受人们的喜爱，在世界各地被广泛种植，成为各国的主要蔬菜作物之一。由于它是典型的双子叶植物，具有自花授粉、染色体图谱较清楚、较易栽培等优点，成为生物学领域研究最多的模式植物之一。近年来发现番茄中的番茄红素和胡萝卜素具有抗氧化、治疗各种癌症等功能，因此其食用价值和经济价值备受关注。1、 试验主要仪器和试剂 仪器 烧杯（100ml 3个，用于放初步处理后的外植体；1L 1个，用作废液缸；250ml 3个，包好牛皮纸后灭菌，分别装酒精、升汞和无菌水）、电子天平、称量纸（若干）、钥匙（若干）、玻璃棒（一根）、量筒（100ml和10ml各1个），胶头滴管（1个）、高压灭菌锅、超净工作台、保鲜膜、酒精灯、记号笔（或标签纸）、培养皿、试管 试剂 75% 酒精、大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、铁盐母液、无菌水、0.1%HgCl2、蔗糖、琼脂、6-BA、NAA2、 实验方法1培养基的选择番茄汁 50mL 酵母抽提液 5g 肉膏 10g 乳糖 20g 葡萄糖 2g k2HPO4 2g吐温80 1g 乙酸钠 5g 琼脂 15g 水加至1000mL pH6.80.22.MS培养基（1L） 大量元素 50ml 钙盐 50ml 微量元素 10ml 维生素 10ml 铁盐 5ml 糖 50g 肌醇 0.1g 琼脂 4.5g注意： 1）要在前种物质全部溶解后才能加入后种物质。 2）加热过程中要不停地搅拌。 当半成品的溶液沸腾时立即从电炉上取下搪瓷杯，放在实验桌上，用玻璃棒沾取少量的液体滴在酸性ph试纸上，用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整液体的pH至5.65.8，最后在搪瓷杯中用蒸馏水定容至1L 3. 培养基的分装 准备30支试管，分成两组，一组不添加任何激素，一组添加6-BA、NAA激素4.番茄种子的处理 自来水冲洗种子20min；0.1%氯化汞的浸泡510min，依照种皮硬度而定，所以番茄种子我们只消毒5min；然后用无菌水冲洗4次；5. 接种 1）将所需物品放入超净工作台：三种实验材料、灭菌好的培养基、无菌水、培养皿、吸水纸、操作工具、空烧杯、75%酒精、0.1%升汞溶液、废液缸、刀片、酒精灯、打火机 2）进入接种室前，需要洗净手和手腕。进入超净工作台内需用75%酒精纱布擦拭手、手腕，再擦培养基瓶和超净工作台。 3）剪、镊消毒：接种前剪、镊应插入75%酒精瓶中，取出后置于酒精灯外焰上彻底灼烧，灼烧时应将剪口、镊口张开，烧至剪、镊上火焰熄灭为止，冷却后方可进行接种。 接种后仍需灼烧并插回75%酒精的磨口瓶待用。注意每次取出时剪口并拢，不可接触磨口瓶和其它器皿，并保持尖端向下。 4）种子接种：将处理好的种子无菌操作放进准备好的果酱瓶培养基中，一般放23颗 5）外植体的处理 1.选取番茄的茎尖。 再生能力强，其次是遗传稳定性好。 2.外植体的初处理。将外植体置于医用口缸内，用皂粉清洗干净附着在材料上的泥沙等杂质；并用自来水冲洗干净。 3.外植体的消毒灭菌。将初处理过的材料在无菌操作台上用75%酒精表面消毒10s，再用无菌水冲洗23次；然后再用10%次氯酸钙消毒1015min（此步骤能有效杀灭真菌），再用无菌水冲洗23次；然后再用3升汞（Hgcl2）消毒10min（此步骤能有效钝化细菌），再用无菌水冲洗23次，洗净附着在材料上的药剂。 4.将消毒灭菌后的外植体置于灭过菌的滤纸上，吸干水分。 5.接种时，用剪刀去除外植体取材时的伤口部位，以尽力保障接种材料不带菌。 6）注意事项 操作人员的头、胳膊等不得进入台内 操作人员不得随意谈话、说笑，以免造成污染 用酒精对双手消毒时，务必待酒精彻底挥发后再靠近酒精灯火焰，以免火焰伤 台外人员走动要轻、动作要小 6. 培养： 培养室的温度应控制在2528，每日光照时间为1012h，光照强度为16002000lx。 此外还要定期观察是否出现污染。 7.实验结果观察和分析 在接种后的一周、两周和三周，分别观察各锥形瓶内愈伤组织的形成情况和污染情况，做好记录工作。在三次记录工作完成之后对结果进行分析，计算出诱导率和污染率，并做相应的实验结果分析。 诱导率（%）=形成愈伤组织数/总接种数100 污染率（%）=污染数/总接种数100 8. 实验结果 试管中种子成功发芽，但仍有很多种子因污染问题不能发芽。9. 讨论 本次实验首先第一感觉是很难，因为教学与实验之间相隔一个很大的空白期，所以实验的时候并没有很好的运用理论课的只是，而是盲目的跟随他人的操作，导致污染率其高。有些组的外植体完全被污染了，所以实验失败。对番茄种子的消毒过程操作不熟练。然而，有些添加的激素的试管中，番茄种子成功发芽，也变命了通过完善的激素配比，可以使番茄发芽率进一步提高10. 参考文献1.雷0柱，胡0荣 生物工程下游技术实验手册 北京.科学出版社，2010-11 2.薛殿恩浅谈无公害番茄的栽培技术J 农村经济与科技，2011(1) :39 433.陆云华，张新，马立新蕃茄叶片再生系统建