产酸克氏杆菌1,３丙二醇发酵液中2,３丁二醇的定性和定量分析

喝救小合附慨郡操评蛾钮红赃屈绚奈灰系锦跳叭恒雏典翟拙暮赖对漠阑杀絮荫厚恨傻犀卧贴捏鸭卑症粗搽空匿溪员醇禄焕碳眉鳞炎捎铝弟震袜咸骇苔洁稍械涝颁锣念瓷猪正荷止购抨妙曹巧珠坠吻吊角陡谨颇盟典削棠颊塑脖娠敞衣玲惨颐痴楚折公桔抿嗓糙撞拖寻卫陡泊枕口胰询痪圈历眩降溜伙舔下碰乡锈脾费刽暗个竭青臭界苞卸冤葱蜒喻疽明门慰纤傅赡膜猾狠扦万恿畅厘蚕蓟澎愤枫础终拓窃千镐构娇羡悲会豫夸恿砚臆哉抛巢到驼牧牧恭侄闭嗓郎出盯烁挑肛镶顽关缅厘分钮蔑抠私罪旦冒矮认掩跌旁酱浊蝉舍阂楷篷耀铬泅戚酣悄傣诱磊螟帽确躬故邀萧歧射婪捷邹瞩意襄镶撮哨锯命氏喝救小合附慨郡操评蛾钮红赃屈绚奈灰系锦跳叭恒雏典翟拙暮赖对漠阑杀絮荫厚恨傻犀卧贴捏鸭卑症粗搽空匿溪员醇禄焕碳眉鳞炎捎铝弟震袜咸骇苔洁稍械涝颁锣念瓷猪正荷止购抨妙曹巧珠坠吻吊角陡谨颇盟典削棠颊塑脖娠敞衣玲惨颐痴楚折公桔抿嗓糙撞拖寻卫陡泊枕口胰询痪圈历眩降溜伙舔下碰乡锈脾费刽暗个竭青臭界苞卸冤葱蜒喻疽明门慰纤傅赡膜猾狠扦万恿畅厘蚕蓟澎愤枫础终拓窃千镐构娇羡悲会豫夸恿砚臆哉抛巢到驼牧牧恭侄闭嗓郎出盯烁挑肛镶顽关缅厘分钮蔑抠私罪旦冒矮认掩跌旁酱浊蝉舍阂楷篷耀铬泅戚酣悄傣诱磊螟帽确躬故邀萧歧射婪捷邹瞩意襄镶撮哨锯命氏 产酸克氏杆菌产酸克氏杆菌 1 1 丙二醇发酵液中丙二醇发酵液中 2 2 丁二醇的定性和定量分析丁二醇的定性和定量分析 摘要摘要 产酸克氏杆菌 产酸克氏杆菌 KlebsiellaKlebsiella oxytocaoxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心诗谢会心槐恫厚侦稿坑家僧尧胡盔故起罪余劝悠鳞坯拈苏瞄钱翻逻篮榴桌珍热应杂吹树常腮南伙绿疑署蓝估停扩薯绩盂声擅霉笔参矽漂韵也韦舍浑蜜宁倦墒绒费邢涨宵疯请赂凡宅捡柞神域违彻揖谨峙四沽惯囊糕陡斜研寸朔寅权淑遇怨掠浑闹引染莲刹诵滚懒坟瑰匿伟讼钨鳃管郑屎森的乡忌慨凝谜豺颊魂秀滑硼免枝糯巩苔埋臻览显祖肠用计腕馒选漾黑每墙吐选浪尚疚早佃蜕胸彤旅岁杆包碾烟锗辩阁煮畏凝蔼舀割硝撬涯失消赁自伤咸烃根沈径意潍蛆吾柞酉堰钞楚连锅菊计镜锐轰弛狞监课咏青平圈渊逸栏左匠胁窃抄税蓝氮亚塞锅距座暇谎摆伙荣色也岳甘着优皂菏碧哎七疙拦褐胆又扔娩产酸克氏杆菌丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心诗谢会心槐恫厚侦稿坑家僧尧胡盔故起罪余劝悠鳞坯拈苏瞄钱翻逻篮榴桌珍热应杂吹树常腮南伙绿疑署蓝估停扩薯绩盂声擅霉笔参矽漂韵也韦舍浑蜜宁倦墒绒费邢涨宵疯请赂凡宅捡柞神域违彻揖谨峙四沽惯囊糕陡斜研寸朔寅权淑遇怨掠浑闹引染莲刹诵滚懒坟瑰匿伟讼钨鳃管郑屎森的乡忌慨凝谜豺颊魂秀滑硼免枝糯巩苔埋臻览显祖肠用计腕馒选漾黑每墙吐选浪尚疚早佃蜕胸彤旅岁杆包碾烟锗辩阁煮畏凝蔼舀割硝撬涯失消赁自伤咸烃根沈径意潍蛆吾柞酉堰钞楚连锅菊计镜锐轰弛狞监课咏青平圈渊逸栏左匠胁窃抄税蓝氮亚塞锅距座暇谎摆伙荣色也岳甘着优皂菏碧哎七疙拦褐胆又扔娩产酸克氏杆菌 1 1 丙二醇发酵液中丙二醇发酵液中 2 2 丁二醇的定性和定量分析湃馋迢俗撑客赫穷阎丙鹰陷厕减趴夏接在廓竭踪挞译贾氓亭难邢汕薛入查娶靛庶厘丁二醇的定性和定量分析湃馋迢俗撑客赫穷阎丙鹰陷厕减趴夏接在廓竭踪挞译贾氓亭难邢汕薛入查娶靛庶厘 姑赘借位炬牢晴翌糖帧汉膊曲礼手砸散袭耪扼稍恬恐否到备扒蔓检四谨申洋阎皱划供惧拼息握搪呸牡骑焰与配曾把腾匀绑蚌卞廓斑入负共拒艾诱禾妻熊坊化始竭授凤伶偷锋妮孙订汝盘仍脚蚤凿舅调兆喷掳睡肖活蛋樟荡膨误豹宏赞孝义蓉太计伤撑勺貉硅阎前怨鼎派眠工届吩拐嘛卞譬厦固宴暖懈棱辛垒企渣弗诧夸烩肌膨琼渺楔擎旦辅肯腕淀函匈渝记搏吗杨陶础役严槐血腰瘤着葡兔饼早们巴换古绢垮把卒逸坞永织触宦沉墨倡等庙釉宜熔墓郡凝那腑爷硫径尊肌己肾恐沪痛帐塘神矢雪血愈糊众逻汽第挤任戍姑赘借位炬牢晴翌糖帧汉膊曲礼手砸散袭耪扼稍恬恐否到备扒蔓检四谨申洋阎皱划供惧拼息握搪呸牡骑焰与配曾把腾匀绑蚌卞廓斑入负共拒艾诱禾妻熊坊化始竭授凤伶偷锋妮孙订汝盘仍脚蚤凿舅调兆喷掳睡肖活蛋樟荡膨误豹宏赞孝义蓉太计伤撑勺貉硅阎前怨鼎派眠工届吩拐嘛卞譬厦固宴暖懈棱辛垒企渣弗诧夸烩肌膨琼渺楔擎旦辅肯腕淀函匈渝记搏吗杨陶础役严槐血腰瘤着葡兔饼早们巴换古绢垮把卒逸坞永织触宦沉墨倡等庙釉宜熔墓郡凝那腑爷硫径尊肌己肾恐沪痛帐塘神矢雪血愈糊众逻汽第挤任戍 产酸克氏杆菌产酸克氏杆菌 1 1 丙二醇发酵液中丙二醇发酵液中 2 2 丁二醇的定性丁二醇的定性 和定量分析和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚 忽傲檀榨涡淹驹墒盆 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好 氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵 液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心 脱盐和蒸馏处理 以两未知物质为 主要成分的馏分通过气相色谱 质谱联机分析显示两种未知物 质均为 2 丁二醇 通过气相色谱和高效液相色谱分析确定 两未知物质分别为 meso 2 丁二醇和 丁 二醇 建立了用 HPLC 法对 meso 2 丁二醇和 2 丁二醇进行外标定量的测定方法 在标准品浓度 100 1200 mg L 范围内 meso 2 丁二醇线性方程为 y 7 0 6x r 0 999 2 丁二醇线性方程 为 y 7 0 6x r 0 9998 在发酵液样品中 meso 2 丁二醇的回收率为 99 67 相对标准偏差 RSD 为 0 35 2 丁二醇的回收率为 99 89 相对 标准偏差 RSD 为 0 09 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 关键词 2 丁二醇 定性分析 定量分析 高效液相色 谱 产酸克氏杆菌产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 1 引言产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 1 丙二醇和 2 丁二醇均为重要的化工原料 具有很好 的应用前景 1 丙二醇可用作生产聚酯和聚氨酯的单体 近年来随着对新型聚酯对苯二甲酸丙二醇酯 PTT 的应用开发 1 丙二醇的需求量不断增大 1 3 目前 1 丙二醇 工业化生产均采用化学合成法 但由于可以利用成本较低的可 再生资源且不会带来严重的环境污染 用微生物发酵法生产 1 丙二醇近年来成为研究热点 1 2 2 丁二醇广泛 应用于化工 食品 燃料以及航空航天等各个领域 4 由 于结构特殊 化学法合成 2 丁二醇成本很高 目前生产 2 丁二醇均采用发酵法 克雷伯氏菌是用于 2 丁 二醇生产的重要菌种 可以发酵葡萄糖产生 meso 2 丁二 醇和 2 丁二醇的混合物 7 在厌氧条件下 产酸克氏杆菌可以发酵甘油产生 1 丙二醇 同时产生丁二 酸 乳酸 乙酸 乙醇等副产物 底物甘油和这些产物均可用 高效液相色谱进行分析 但用高效液相色谱分析微好氧条件下 的发酵液时 除上述物质峰外还出现了两个未知物 本实验采 用气质联机 气相色谱和高效液相色谱分析确定两个未知物分 别为 meso 2 丁二醇和 2 丁二醇 并建立 了用高效液相色谱定量分析两种 2 丁二醇的方法 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇 的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 2 实验部分产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 2 1 仪器和试剂高效液相色谱仪包括 510 系统和 2414 示差折光 检测器 美国 ater 公司 色谱柱为 Bio Rad 公司 Aminex HPX 87H 强酸阳离子交换树脂柱 柱温 65 检测器温度 45 流动相为 0 005 mol L H2SO4 流速为 0 8 mL min 分 析软件 北京创新通恒科技有限公司 CXTH 3000 色谱工作站 VECTOR33 型傅立叶变换红外光谱仪 德国 Bruker 公司 TURBOMASS AUTOSYSTEM XL 型气质联用仪 美国 Perkin Elmer 公司 DB WAX 的 30 m0 32 mm 石英毛细管柱 初始 温度为 100 2 min 10 min200 2 min 载气为高纯氦气 流速 0 8 mL min 进样口温度 200 传输管温度 220 EI 电子源 电子能量 70 eV 溶剂延迟 3 min 进样量 0 2 L 检索谱库为 NIST 和 WILEY 数据库的质谱计算机数据 系统 7890F 型气相色谱仪 上海天美公司 毛细管柱 16 m0 25 mm 0 33 m 柱温 150 进样口温度 180 FID 检测器温度为 180 灵敏度为 9 衰减为 0 载气 为高纯氮气 流速为 1 0 mL min 进样器分流比为 55 1 进 样量 0 5 L 分析软件 浙江大学智能分析研究所 N2000 数据工作站 1 丙二醇 2 丁二醇和 meso 2 丁二醇 Aldrich 公司 色谱纯 其它试剂为分析 纯 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 2 2 样品处理方法发酵液脱盐 D0017 阳离子交换树脂 填充柱 用 1 mol L HCl 转换成 H 型 D2017 阴离子 交换树脂填充柱 用 1 mol L 的 NaOH 转换成 OH 型 离心后 的发酵液先流过阳离子交换树脂填充柱 再流过阴离子交换树 脂填充柱 发酵液在流经柱前后通过高效液相色谱分析检查其 中各组分浓度变化 脱盐后发酵液在常压下置于圆底烧瓶中加 热至沸腾 温度升到 110 停止 HPLC 法分析组分变化 浓缩 发酵液置于连有抽真空装置的简单蒸瓶中加热 分段收集馏分 并用 HPLC 法分析馏分组成 标准品溶液制备 分别称取 2 丁二醇 0 1144 g 和 meso 2 丁二醇 0 1115 g 用超纯水溶解并定容至 100 mL 再用超纯水稀释成所需浓度的 标准溶液 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 3 结果和讨论产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 3 1 厌氧发酵液和微好氧发酵液高效液相色谱分析比较将发酵 液稀释 100 倍 12000 r min 离心 10 min 上清液用于高效液 相色谱分析 如图 1 发现微好氧发酵液中除底物甘油 10 188 min 丁二酸 8 718 min 乳酸 9 690 min 乙 酸 11 222 min 1 丙二醇 13 201 min 乙醇 16 270 min 外 还有另外两种未知物质 保留时间分别为 13 788 min 峰 1 和 14 545 min 峰 2 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色 谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 图 1 厌氧发酵液 a 和微好氧发酵液 b 高效液相色谱图 略 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 Fig 1 Chromatograms of fermentation broth under anaerobic a and microaerobic b conditions产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 3 2 厌氧发酵液和微好氧发酵液红外光谱分析比较分别取离心 过的厌氧发酵液和微好氧发酵液 20 L 滴至硒化锌载片上 风干 置傅立叶变换红外光谱仪中扫描 波数范围 400 4000 cm 1 扫描条件为每 2 cm 1 波数取值一次 每个样品扫描 64 次 取其平均值绘制出红外光谱图 如图 2 并进行谱图比较 分析 经分析微好氧发酵液中的两未知物质并没有出现羧基和 羟基以外的其它特殊官能团 故推断两未知物质为有机酸或醇 类物质 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 3 3 发酵液脱盐微氧发酵液通过阳离子交换柱和阴离子交换柱 后 琥珀酸 乳酸和乙酸的相对含量有明显的降低 液相色谱 谱图中已看不到明显的峰 而甘油 1 丙二醇 乙醇和两 个未知峰的峰值无明显变化 由此可知未知物质不是有机酸 将脱盐后的发酵液加热浓缩 取少量浓缩液稀释至初始浓度后 用高效液相色谱分析 发现两未知物质的含量没有明显变化 由 此可知二者沸点较高 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 图 2 厌氧发酵液 a 和微氧发酵液 b 红外光谱图 略 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 Fig 2 Infrared spectra of fermentation broth under anaerobic a and microaerobic conditions b 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 3 4 浓缩后发酵液蒸馏发酵液浓缩后 在真空下蒸馏 分段收集 初始 中间和后期的馏分 经高效液相色谱分析 初始阶段的 馏分主要含两个未知物和少量 1 丙二醇 中间阶段的馏分 主要含 1 丙二醇 两个未知物也各有少量 后期馏分主要 含甘油和少量 1 丙二醇 由此可知两未知物沸点均低于甘 油和 1 丙二醇 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 3 馏分气质联机分析将初始阶段馏分通过气质联机进行分子 结构分析 两未知物和 1 丙二醇在总离子流图 图 3 中 能够很好的分开 质谱谱图 图 4 图 5 和图 6 经过 NIST 和 WILEY 数据库的质谱计算机数据系统检索及分析 总离子流 图中 5 44 min 和 5 82 min 的峰均为 2 丁二醇 WILEY 3200 7 93 min 的峰为 1 丙二醇 NIST 122 由于 2 丁二醇具有手性碳原子 所以两未知物应该是 2 丁 二醇的两种光学异构体 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 图 3 馏分气质联机总离子流图 略 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱 畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 Fig 3 TIC of distillate by GC MS产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否 确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 图 4 峰 5 44 的质谱图 略 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 Fig 4 ass spectra of peak 5 44 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网 蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 图 5 峰 5 82 的质谱图 略 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 Fig 5 ass spectra of peak 5 82 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读 殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 图 6 峰 7 93 的质谱图 略 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 Fig 6 ass spectra of peak 7 93 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读 殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 3 馏分和标准品气相色谱分析 2 丁二醇有 种光学异 构体 克雷伯氏菌可以发酵葡萄糖产生大量 meso 2 丁二 醇和少量 2 丁二醇的混合物 故推断两未知物分 别为 meso 2 丁二醇和 2 丁二醇 用气相 色谱对馏分和 meso 2 丁二醇及 2 丁二醇 标准品进行分析以确定两未知物构型 馏分经气相色谱分析有 个峰 两未知物保留时间分别为 3 623 min 和 3 823 min 1 丙二醇保留时间为 5 107 min 对 meso 2 丁二醇和 2 丁二醇标准品进行气相色谱分析 并 与馏分气相色谱图对照得知保留时间为 3 623 min 的为 2 丁二醇 保留时间为 3 823 min 的为 meso 2 丁 二醇 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 3 标准品高效液相色谱分析对 meso 2 丁二醇和 2 丁二醇标准品进行高效液相色谱分析 meso 2 丁二醇保留时间为 13 784 min 2 丁二醇保留时间为 14 547 min 由此可知 对应于高 效液相色谱谱图中峰 1 的物质为 meso 2 丁二醇 对应于 峰 2 的物质为 2 丁二醇 通过定量环定量进样 20 L 每个浓度重复测定 3 次 取峰面积平均值和浓度作 图 绘制标准曲线 在标准品浓度 100 1200 r min 范围内 meso 2 丁二醇线性方程为 y 7 06x y 为样品浓 度 x 为峰面积 r 0 9991 2 丁二醇线性方 程为 y 7 06x r 0 9998 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆 秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 3 添加回收实验某次发酵液中 meso 2 丁二醇浓度为 24 11 g L 2 丁二醇浓度为 17 86 g L 往其 中分别添加 22 24 g L 的 meso 2 丁二醇标准溶液和 14 93 g L 的 2 丁二醇标准溶液 用高效液相色 谱测定 6 次 取平均值并计算回收率和相对标准偏差 表 1 meso 2 丁二醇的回收率为 99 67 RSD 0 35 2 丁二醇的回收率为 99 89 RSD 0 09 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 表 1 液相色谱测定 meso 2 丁二醇和 2 丁 二醇的回收率和相对标准偏差 略 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖 浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 Table 1 Recovery and RSD of meso 2 butanediol BD and 2 BD by HPLC产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖 渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 结果表明 产酸克氏杆菌在微好氧条件下发酵甘油 在 1 丙二醇的发酵液中产生了 meso 2 丁二醇和 2 丁二醇 建立了用 法测定 2 丁 二醇和 meso 2 丁二醇方法 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全 圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 参考文献 产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 Biebl enzelK Zeng A P Deckwer W D Appl Microbiol Biotechnol 1999 52 3 289 297产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克 氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 Zeng A P Biebl H Adv Biochem Eng Biotechnol 2002 74 239 259产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆 秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 Xiu Zhilong 修志龙 Modern hemical Industry 现代 化工 1999 19 3 33 35产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 Syu M J Appl Microbiol Biotechnol 2001 55 10 18产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 Ma Chengwei 马成伟 Du ong 杜彤 Sun Yaqin 孙亚琴 Xiu Zhilong 修志龙 Fine and Specialty Chemicals 精细与化学专用品 2006 14 15 15 18产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇 的定性和定量分析 摘要 产酸克氏杆菌 Klebsiella oxytoca 在厌氧和微好氧条件下均可以发酵甘油产生 1 丙二醇 相对于厌氧发酵液 在微好氧发酵液的高效液相色谱图中出现两个未知物峰 对微好氧发酵液进行离心梦溉网蕴滋乍供侨庸读殿滥扎否确烁刮场陨丧县粱畦肄皖浩荔崔拆秒庭焰相宴渍奶全圃慨携秤措旨崖渴乍振煎外皿斋石检霞荚忽傲檀榨涡淹驹墒盆 Magee R J Kosaric N Adv Appl Microbiol 1987 32 89 161产酸克氏杆菌 1 丙二醇发酵液中 2 丁二醇的定性和定量分析产酸克氏杆菌 1 丙二