微生物学实验报告

1 / 19微生物学实验报告 实验名称：用高倍显微镜观察叶绿体和细胞质流动一、实验目的1.初步掌握高倍显微镜的使用方法。2.观察高等植物的叶绿体在细胞质基质中的形态和分布二、实验原理高等植物的叶绿体呈椭球状,在不同的光照条件下,叶绿体可以运动, 改变椭球体的方 向,这样既能接受较多的光照, 又不至于被强光灼伤。在强光下,叶绿体以其椭球体的侧面朝向光源;在弱光下, 叶绿体以其椭球体的正面朝向光源。因此,在不同光照条件下采集的葫芦藓,其小叶内叶绿体椭球体的形状不完全一样。 活细胞中的细胞质处于不断的流动状态，观察细胞质的流动，可以用细胞质基质中的叶绿体的运动做为标志。三、材料用具藓类的叶，新鲜的黑藻，显微镜，载玻片，盖玻片，滴管，镊子，刀片，培养皿，铅笔四、实验过程1制作藓类叶片的临时装片2 / 192用显微镜观察叶绿体3制作黑藻叶片临时装片4用显微镜观察细胞质流动物理实验报告 化学实验报告 生物实验报告 实验报告格式 实验报告模板五、讨论1细胞质基质中的叶绿体是否静止不动，为什么？2叶绿体的形态和分布与叶绿体的功能有什么关系？3植物细胞的细胞质处于不断的流动状态，这对于活细胞完成生命活动有什么意义？4用铅笔画一个叶片细胞，标出叶绿体的大致流动方向。微生物学实验报告 微生物学大实验实验题目：土壤微生物的分离纯化与鉴定一 实验目的：1.巩固本学期所学的所有微生物实验操作技能。3 / 192.再次强调无菌操作概念。3.初步学习微生物鉴定纯化的方法和思路。4.学会应用相关手册对微生物进行分类。二 实验原理：1. 培养基的制备、消毒与灭菌：培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对 pH 要求不一样，霉菌和酵母的培养基的 pH 一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基的 pH 一般为中性或微碱性的 。所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将培养基的 pH 调到合适的范围。此外，由于配制培养的各类营养物质和容器等含有4 / 19各种微生物，因此，已配制好的培养基必须立即灭菌，如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。2. 微生物的分离与纯化：自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研究某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯培养状态。从混杂的微生物群体中获得只含有某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。土壤是微生物生活的大本营，所含微生物无论是数量还是种类都是及其丰富的。因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，人们可以从中分离到很多有价值的菌株。本实验将采用平板划线分离法。3. 平板分离技术与活菌计数：值得指出的是从微生物群体中经分离、生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征等综合考虑。有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种5 / 19或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。平板分离法主要有：平板划线分离法，稀释涂布平板法。后者除能有效分离纯化微生物外，还可用于测定样品中活菌数量。平板菌落计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上；经过培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。统计菌落数，根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，平板上形成的每个菌落不一定是单个细胞生长繁殖而成，有的可能来自 2 个或多个细胞。因此，平板菌落计数的结果往往比样品中实际细胞数低，这就是现在使用菌落形成单位取代以前用绝对菌落数来表示样品活菌含量的原因。4. 分离菌株的鉴定：微生物的分类鉴定是微生物的重要内容，一般从菌落特征、细菌特点及生理生化、分子生物学等方面进行鉴定。各种细菌在代谢类型上表现了很大的差异。不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白质和脂肪的能力不同，所能发酵的类型和最终产物也不一样。不同细菌对营养的要求不同也说明了它们6 / 19有不同的合成能力。所有这些都反映了它们是有不同的酶系统。细菌的这种生化反应的多样性在自然界产生了两种结果：异，有些细菌能分解某种糖产生有机酸和气体，有些细菌只产酸不产气。IMViC 是吲哚、甲基红、伏-普和柠檬酸盐四个实验的缩写，主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水细菌学检查。吲哚试验是用于检测吲哚的产生，某些细菌可产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。对二甲基氨基苯甲醛遇吲哚形成玫瑰吲哚。但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，因此吲哚试验可以作为一个生物化学检测的指标。色氨酸水解反应：吲哚与对二甲基氨基苯甲醛反应：6. 实验整体思路：7 / 19在确定取样环境之后，对微生物原样进行梯度稀释，产生合适的浓度进行涂板用于微生物的计数。染色并镜检，利用形态学方法对微生物做一粗略的定位。根据镜检设计相关生理生化试验作进一步定位。根据以上获得的信息确定微生物类群并加以定位。三 实验器材：1. 实验菌种：大肠杆菌 金黄色葡萄球菌2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基，马铃薯培养基，固体油脂培养基，固体淀粉培养基，葡萄糖发酵培养基试管，乳糖培养基试管，蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基。3. 溶液和试剂：50%乙醇，20%8 / 19的甘油，硝酸银染色液、香柏油、二甲苯、美兰水溶液，卢戈氏碘液，甲基红指示剂，5%孔雀绿水溶液、%番红水溶液，革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈式碘液，95%乙醇，番红复染液，香柏油，二甲醇等。4. 土样：山东大学中心校区图书馆前光草坪内地表 10cm 土样。5. 仪器和其他用品：普通光学显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，双层瓶，接种环，试管架，镊子，滴管，二甲苯，香柏油，蒸馏水，盖玻片，吸水纸，无菌平板，无菌试管，U 型玻棒，解剖刀，无菌吸管等。四 操作步骤：1.培养基的制备与分装。称量：按培养基配方依次准确地称取药品。熔化：在沸水浴锅中或电炉上加热熔化。调 pH ：用9 / 191mol/L NaOH 或 1mol/L HCl 调 pH 至培养基所需 pH。分装：将溶化的固体培养基趁热加至漏斗上，装试管时，注意管口不要沾上培养基。液体分装装量不超过试管的 1/4，固体分装装量不超过试管的 1/5，分装三角瓶的量不超过三角瓶容积的一半，半固体分装装量为试管的 1/3，灭菌后垂直待凝。加棉塞：培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能，然后包扎一层牛皮纸。试管先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明培养基名称、日期、组别。2无菌水的制备。用量筒量取90ml 水于带玻璃珠三角瓶中，塞上棉塞，包扎牛皮纸。用 10ml 吸管取 9ml 水于 10 支试管中，塞上棉塞，包扎牛皮纸。3器皿的准备。培养皿的包装：每 10 套一包，用牛皮纸包扎。10 / 19吸管的包装：首先在吸管的上端塞上一小段棉花，用长纸条包扎、打结。玻璃涂布棒的包装：方法同吸管的包装。枪尖的包装：放入枪尖盒，牛皮纸包装。4高压灭菌。将所要灭菌微生物学实验报告物品放入高压蒸汽灭菌锅内，根据需要设定灭菌温度和时间。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。灭菌完毕，将试管培养基搁成斜面，搁置的斜面长度以不超过试管总长度的一半为宜。培养基冷至 50 左右，倒平板。5微生物的分离与纯化。土壤稀释液的制备：称取 10g 土壤，放入灭好菌的无菌水中用玻璃珠打碎土壤，静置 30min。取 10mL 土壤原液于 1 号试管中，从中取 1mL 浸液于装有 9mL 无菌水的试管中，充分震荡后依次操作，将 7 支试管按稀释倍数分别记作 0，-1 ，-2，-3，-4，-5，-6 号试管。11 / 19涂布平板：分别取 0 度，-2 度和-5 度的试管中的土壤浸出液于细菌培养基平板上，用刮刀涂布均匀。再分别取0 度和-3 度稀释液于准备好的霉菌培养基平板上，涂布均匀。相同稀释度的浸液涂布 3 个平板。培养：将细菌培养基平板置于 37 恒温箱培养 24h，将霉菌培养基平板置于 27 恒温箱培养 3d。平板计数及菌落描述：将培养好的细菌进行平板计数掌握一般培养基的制备原理及要求，掌握培养基酸碱度的测定，熟悉一般培养基的制备过程和各种器皿灭菌方法。掌握细菌分离培养的基本要领和方法，掌握细菌抹片的制备方法和革兰氏染色法及油镜的使用方法，并认识革兰氏染色的反应特性。掌握学习用微生物学原理诊断疾病的一般方法及步骤。二、实验用品器材12 / 19量筒、烧杯、电子天平、漏斗、三角烧瓶、空试剂瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、pH 试纸、纱布、脱脂棉、天平、电炉、试剂瓶瓶塞、扎绳、放大镜、包装纸、洗耳球、酒精灯、载玻片、火柴、吸水纸、剪刀、记号笔、接种环、注射器、镊子、钳子、毫米尺、培养箱、水浴培养箱、高压蒸汽灭菌锅、油镜试剂及材料肘胨、蛋白胨、猪胆盐、氯化钠、琼脂、乳糖、%结晶紫水溶液、% 中性红水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氢氧化钠、盐酸、牛血清、革兰氏染色液、蒸馏水、小白鼠、病猪内脏三、实验步骤培养基的制备1、麦康凯培养基组成：蛋白胨17g、肘胨 3g、猪胆盐 5g、氯化钠 5g、琼脂 17g、乳糖10g、%结晶紫水溶液 10ml、%中性红水溶液 5ml、蒸馏水 1000ml方法：将蛋白胨、肘胨、猪胆盐和氯化钠溶解于 400ml 蒸馏水中，调节13 / 19pH 至。将琼脂加入 600ml 蒸馏水中，并加入乳糖，加热熔化。将两液混合，分装于烧瓶内，用纱布、扎绳等捆好后，121高压灭菌1530min。待冷却至 50 55 时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。注：结晶紫和中性红水溶液配好后需经高压灭菌。2、血清平板组成：营养琼脂、牛血清方法：将灭菌的营养琼脂加热熔化，冷却至 4550时，加入牛血清，并混匀，倾注平板。注：不得将牛血清一并加入后再灭菌。3、LB 培养基组成：胰化蛋白胨 10g、酵母提取物 5g、氯化钠 10g、琼脂 15g方法：在 950ml14 / 19蒸馏水中加入胰化蛋白胨、酵母提取物、琼脂和氯化钠，调节 pH 至，加热熔化，分装于瓶中，用纱布、扎绳等捆好后，121高压灭菌 1530min。待冷却至 50 55时，倾注平板。4、液体培养基病料取材在病猪死亡后，首先用显微镜检查其末梢血液膜片中是否有炭疽杆菌存在，未发现，则立即用消毒的器械对其进行生理解剖，观察其病理特征现象，取出病猪的十二指肠、胃、肝脏三处的组织物，并注意组织的完整性，用储物袋密封保存。细菌粗培养1、消毒灭菌：操作人员先用消毒水清洗手或戴好实验手套，再用消毒水对无菌操作台内桌面及用酒精灯外焰对待用器械进行火焰灭菌。2、接种在无菌操作台酒精灯旁打开用储物袋密封保存的病料，先左手持镊子右手持剪刀，把病料剪出一个小口。15 / 19右手持灭过菌的接种环，左手持平板，并用拇指、食指及中指将平皿揭开约 20 左右，然后将接种环前端插入小口旋转一下后，再用划线接种的方法接种到一个血清平板上。用记号笔在平板底部作好日期、操作人员、部位等标记，并将平板倒放。以此方法，分别接种十二指肠、胃粘膜、肝脏于血清平板上，各接种 2 个血清平板。3、培养：将接种好的血清平板倒扣放入 37 培养箱中，反向培养 24 小时。注：划线接种时尽量划开，以保证长出单个菌落，且划线时接种环应尽量倾斜，以免划破培养基；待接种完毕后熄灭无菌操作台内酒精灯，关闭好无菌操作台窗口，打开无菌操作台内的紫外灯。微生物学实验报告 细菌纯培养1、菌落特征判断16 / 19待粗培养的细菌培养 24 小时后，取出用放大镜观察记录单个小菌落的形态特征并用实验报告纸记录好，并在平板底部上做好观察标记，其形态特征包括大小、形状、菌落边缘、表面构造、隆起度、湿润度、透明度、颜色等。2、取单个菌落进行革兰氏染色镜检取干净的载玻片，用记号笔在其一面做好正反面标记，再在载玻片另一面中央滴上一小滴蒸馏水。将接种环在火焰上灭菌，待冷却后，在酒精灯旁从标记的单个小菌落中取少许细菌置于蒸馏水中混匀，用接种环涂成直径约的菌膜，再在酒精灯火焰上方以钟摆速度通过固定好细菌，待冷却进行染色。先滴加草酸结晶紫溶液染色 12min，再水洗；然后滴加革兰氏碘液溶液染色 12min，再水洗；随后滴加 95%的酒精脱色 3060s，再水洗；最后滴加稀释的品红进行复染 3060s，再水洗；待干燥或吸水纸吸干后镜检。17 / 19将干燥的载玻片放在 1000 倍油镜下，滴加一滴松柏油进行镜检，观察其形态特征，判断细菌的种属。3、细菌接种培养消毒灭菌：操作人员先用消毒水清洗手或戴好实验手套，再用消毒水对无菌操作台内桌面及用酒精灯外焰对待用器械进行火焰灭菌。接种：右手持灭过菌的接种环，左手持平板，并用拇指、食指及中指将平皿揭开约 20左右，然后将接种环插入揭开的平板口内蘸去一下镜检标记的小菌落，再用划线接种的方法接种到一个血清平板、LB 平板或麦康凯平板上。并用记号笔在平板底部作好日期、操作人员、菌种、部位等标记，将平板倒放。将接种好的平板倒扣放入 37培养箱中，反向培养 24 小时。注：油镜用完后应立即清理物镜上的松柏油；划线接种时尽量划开，以保证长出单个菌落；待接种完毕后熄灭无菌操作台内酒精灯，18 / 19关闭好无菌操作台窗口，打开无菌操作台内的紫外灯。菌液的制备1、镜检：用革