章病毒感染的检查方法和防治原则

第 25章 病毒感染的检查方法和防治原则Examination and Strategy of Prevention and Therapy for Viral InfectionHigherEducationPressHigherEducationPress第一节 病毒感染的检查方法一、标本的采集和送检用于分离病毒或检测其核酸的标本，应采集急性期标本，要根据感染部位采集标本，应严格注意无菌操作。由于病毒在室温中很易被灭活，应在采集和运送标本中注意冷藏。HigherEducationPressHigherEducationPressTheprincipleforthecollectionofspecimenforviral diagnosis is same as that for bacteria inadditiontothefollowing.1.Addingantibioticsintothespecimen.2. The viral specimen stored into the lowtemperatureorice-bagandtransportedtothelabASAP.Storedatthe-70oCorliquidnitrogeninlab.3. The pathological tissue stored in the 50%neutralglycerol4. The serum taken at onset of illness and 2-3weeks after recover to compare the titre ofantibodies.HigherEducationPressHigherEducationPress二、病毒分离培养的方法1. 动物 animals接种：如鼠、兔、犬、牛和猴等。2. 鸡胚 chickenembryo接种：针对有些病毒，如流感病毒、痘病毒。3. 细胞 cellculture培养：有三种类型的细胞。IsolationandidentificationofvirusesinthelabisGoldstandardfordiagnosis. HigherEducationPressHigherEducationPress（ 1）细胞类型 原代细胞 Primarycellculture：对多种病毒的易感性高，主要用于从标本中分离病毒。 传代细胞 Continuouspassagecellline：是指可在体外连续传代的细胞。大多数来自肿瘤组织或二倍体细胞，如 Hela细胞或自发转化的原代细胞系，如中国地鼠卵巢细胞（ CHO）。这些细胞系的染色体与正常细胞不同，为多倍体。 二倍体细胞 Diploidcellline：则为在体外连续传代 50100代后，仍保持其二倍染色体数目的细胞。HigherEducationPressHigherEducationPress（ 2）病毒增殖指标 细胞病变效应（ cytopathic effect, CPE） ：溶细胞型病毒感染细胞后，可出现细胞团缩、裂解或细胞肿大、数个细胞融合成多核巨细胞或细胞聚集成葡萄串状、脱落或死亡等。 A. 未接种病毒的细胞 B. CPE的细胞（ Hela细胞，柯萨奇病毒感染）HigherEducationPressHigherEducationPress 血吸现象： 感染细胞膜上带有病毒（正黏病毒，副黏病毒）血凝素与加入的红细胞结合。 干扰现象：当两种病毒感染同一种细胞时，常发生一种病毒抑制另一种病毒复制增殖的现象。 HigherEducationPressHigherEducationPress(三 )病毒的鉴定 病毒的形态学鉴定：电子显微镜、光学显微镜 病毒血清学鉴定 病毒成分鉴定HigherEducationPressHigherEducationPress（ 4）病毒定量方法空斑形成单位（ plaque forming unit, PFU）： 测定病毒数量可用空斑形成单位。一个空斑是标本中一个病毒大量复制所致，有感染性的病毒经适当稀释后接种于单层细胞，由于单个病毒的复制增殖使局部单层细胞脱落，此即空斑。50组织细胞感染量（ TCID50）红细胞凝集试验光镜、电镜分离培养免疫荧光ELISA分子生物学技术Southern blotPCRNorthern blot病毒感染的检测方法HigherEducationPressHigherEducationPress三、病毒感染的血清学诊断采用免疫标记技术，即用荧光素、同位素、生物素和酶等标记已知的特异性抗体，用于检测病毒感染局部脱落细胞或分泌物细胞中的抗原，来早期诊断病原。机体血清中出现抗某种病毒的抗体，除患过相应的疾病外，亦可因隐性感染或疫苗接种而产生。因此，抗体效价必须明显高于正常人群的水平或随病程递增才有诊断价值。HigherEducationPressHigherEducationPress用已知的病毒与血清中未知的抗体进行反应。Theknownantigenofvirususedforthedetectionofunknownantibodyintheserum.1.neutralizingtest:NTplementfixationtest,CFtest:3.hemoagglutinationinhibitiontest:4.agarimmuno-diffusiontest:HigherEducationPressHigherEducationPressHigherEducationPressHigherEducationPress新病毒的鉴定identificationofnewlyviruses:1.typesofviralnucleicacid:DNaseandRNaseusedforconfirmofDNAorRNA.2.Detectionofphysic-chemicalproperties3.morphologicalobservation:4. serological diagnosis5. gene sequence andmatch.HigherEducationPressHigherEducationPress第二节 病毒感染的防治原则一、病毒感染的预防1. 人工主动免疫 病毒疫苗可分成 传统疫苗 和 新型疫苗 两类。传统疫苗：灭活疫苗、减毒活疫苗和亚单位疫苗等。新型疫苗：主要指基因工程技术生产的疫苗，包括基因工程亚单位疫苗、基因工程载体疫苗、核酸疫苗等。HigherEducationPressHigherEducationPress灭活疫苗：乙脑疫苗、狂犬疫苗、流感灭活疫苗、HAV和 HBV疫苗等。减毒活疫苗：脊髓灰质炎疫苗、麻疹疫苗、 HAV疫苗、腮腺炎疫苗、风疹疫苗等。常见的疫苗种类HigherEducationPressHigherEducationPress2. 人工被动免疫 常用的人工被动免疫制剂有免疫血清、胎盘球蛋白、丙种球蛋白，以及与细胞免疫有关的转移因子等。 administrationofspecificantibody,purifiedimmunoglobulinorcytokinstoallowthebodytoacquirethespecificimmunityimmediately.HigherEducationPressHigherEducationPress二、病毒感染的治疗1. 核苷类药物2. 病毒蛋白酶的抑制物3. 干扰素或干扰素诱生剂4. 抗病毒基因治疗5. 免疫制剂6. 中草药 HigherEducationPressHigherEducationPress（一）抗病毒化学制剂1.核苷类药物(1) 疱疹净（ IDU）(2)阿昔洛韦（ acyclovir, ACV）和 丙氧鸟苷 (acyclovir,ACV)是目前最有效的抗疱疹病毒药物之一 .机制： 竞争病毒 DNA复制酶(3) 拉米呋定 (lamivudine) ：抑制慢性乙型肝炎患者体内 HBV的复制。机制：抑制病毒逆转录酶(4)病毒唑：抑制 DNA和 RNA病毒复制。流感病毒、呼吸道合胞病毒的治疗HigherEducationPressHigherEducationPress2.非核苷类反转录酶抑制剂 nevirapine是第一个新合成的非核苷类反转录酶抑制剂，1996年获准用于治疗 HIV3.蛋白酶抑制剂 ：英迪纳瓦 (indinavir)是 1996年批准的新一代蛋白酶抑制剂，用于 HIV.4.其他抗病毒药物 ：金刚烷胺能阻止脱壳，主要用于治疗甲型流感。 HigherEducationPressHigherEducationPress(二 )干扰素和干扰素诱生剂的应用1 干扰素 (IFN)2 IFN诱生剂 :polyI:C、甘草甜素、芸芝多糖等（三） 中草药防治病毒感染 ： 板蓝根、黄芪、大青叶等（四） 基因治疗 (genetherapy)：目前还处于研究阶段(1)反义寡核苷酸 (antisenseoligonucleotide,asON)人工合成的，与靶基因或 mRNA某一区段互补的核酸片断，结合于靶基因 /mRNA上 ,从而封闭基因的表达。包括：反义 DNA， 反义 RNA， 其来源可有人工合成和体内表达两类。 (2)核酶 (ribozyme)： 是既能与靶基因序列结合又具酶活性的一类 RNA分子 。(3)干扰