蛋白质还原糖脂肪的鉴定实验ppt课件.ppt

生物组织中还原糖 脂肪 蛋白质的检测 1 1 实验原理 1 斐林试剂鉴定还原糖时 溶液的颜色变化为 由蓝色变成砖红色 沉淀 斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否 而不能鉴定非还原性糖 葡萄糖 麦芽糖 果糖是还原糖 2 苏丹 染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色 苏丹 染液遇脂肪的颜色反应为红色 3 蛋白质可与双缩脲试剂产生紫色反应 肽键 2 一 生物组织中可溶性还原糖的鉴定 1 实验原理当质量浓度为0 1g mL的氢氧化钠溶液与质量浓度为0 05g mL的硫酸铜溶液混合后 立即生成淡蓝色的Cu OH 2悬浊液 Cu OH 2与葡萄糖 果糖 麦芽糖等可溶性还原糖共热 能够生成砖红色的Cu2O沉淀 因此 利用该反应 可证明样液中含可溶性还原糖 R CHO 2Cu OH 2 R COOH Cu2O 2H2O 3 试剂配制甲液 0 1g mL的氢氧化钠溶液 斐林试剂乙液 0 05g mL的硫酸铜溶液 甲液乙液等量混合 现用现配 切不可分开滴加 或者久置后才用 4 二 生物组织中蛋白质的鉴定 1实验原理在碱性溶液 NaOH 中 双缩脲 H2NOC NH CONH2 能与Cu2 作用 形成紫色的络合物 这个反应叫做双缩脲反应 由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键 因此 蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应 5 试剂配制A液 0 1g mL的氢氧化钠溶液 双缩脲试剂B液 0 01g mL的硫酸铜溶液 6 2 实验目的 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类 脂肪和蛋白质3 实验选材 1 材料应富含相关物质 使现象更加明显 2 材料本身应无色 以免对结果产生干扰 1 做可溶性还原性糖鉴定实验 应选含糖高 颜色为白色的植物组织 如苹果 梨 也可用白萝卜替代 因为组织的颜色较浅 易于观察 2 做脂肪的鉴定实验 应选富含脂肪的种子 以花生种子为最好 实验前一般要浸泡3 4小时 3 做蛋白质的鉴定实验 可用富含蛋白质的黄豆 可用豆浆替代 或鸡蛋清 7 4 实验试剂斐林试剂 包括甲液 质量浓度为0 1g mLNaOH溶液和乙液 质量浓度为0 05g mLCuSO4溶液 苏丹 或苏丹 染液 双缩脲试剂 包括A液 质量浓度为0 1g mLNaOH溶液B液 质量浓度为0 01g mLCuSO4溶液 体积分数为50 的酒精溶液 碘液 蒸馏水 8 5 方法步骤 可溶性还原糖糖的鉴定 水浴加热 9 实验步骤 1 制备组织样液 教师制备 2 鉴定样液 先在试管中加入2mL组织样液 10 再加入2mL刚配制的斐林试剂 水浴煮沸2分钟 注意观察整个实验过程中 溶液颜色的变化 11 12 脂肪的鉴定 需要显微镜 13 实验步骤 1 切片制作 去掉花生种皮 用左手的三个手指夹住花生的一片子叶 使花生子叶高于手指之上 为什么 右手持刀片 将子叶削去一层 形成平面 刀口向内 与花生断面平行 以均匀的动作 自左前方向右后方快速拉刀 滑行切片 注意要整个臂部用力 而不要腕部用力 如此连续动作 切下一些薄片 14 2 染色 用毛笔将最薄的几片材料移至洁净的载玻片的中央 滴苏丹 溶液2 3滴于花生子叶薄片上 2 1min后 吸去染液 滴50 的酒精洗去浮色 吸去多余酒精 再滴1 2滴蒸馏水 盖上盖玻片 制成临时装片 3 镜检鉴定 在低倍镜下观察 找到花生子叶切片的最薄处 最好只有1 2层细胞 移至视野的中心 换用高倍镜观察 调焦至最清晰 可发现细胞内橘黄色的圆形小颗粒 这就是脂肪滴 油滴 若发现观察物外围也有许多橘黄色小颗粒 则是脂肪跑了出来 15 脂肪检测实验的实验结果 16 若用物理方法如何鉴定脂肪的存在 烘烤种子后 把子叶放在白纸上用手指挤压 白纸上会出现透明的油迹 说明子叶含有脂肪 17 蛋白质的鉴定 18 实验步骤 1 制备生物组织样液 教师制备 2 鉴定 先加2mL组织样液 再加2mL双缩脲试剂A液 加3 4滴双缩脲试剂B液 19 蛋白质检测实验的实验结果 20 6 讨论 1 选取富含还原糖的生物材料时 能用甘蔗或者橘子吗 为什么 答 不行 橘子本身富含色素 会掩盖颜色反应的结果 而甘蔗不含还原糖 蔗糖不是还原糖 2 斐林试剂和双缩脲试剂有哪些区别 a溶液浓度不同 斐林试剂中CuSO4溶液为0 05g mL 双缩脲试剂中CuSO4溶液为0 01g mLb使用原理不同 斐林试剂实质是新制Cu OH 2沉淀 双缩脲试剂实质是碱性条件下的Cu2 c使用方法不同 斐林试剂使用时 先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合 然后立即使用 双缩脲试剂是先加NaOH溶液 然后再加入3至4滴CuSO4溶液 21 7 练习与巩固