3株乳酸菌体外拮抗致病性大肠杆菌试验

3株乳酸菌体外拮抗致病性大肠杆菌试验 哈尔滨中科生物工程有限公司 赵前 摘要 为研究乳酸菌体外对大肠杆菌的拮抗作用 将3 株乳酸 菌与2株大肠杆菌体外分别共培养观察拮抗情况 结果显示 等 量同时间接种 96h内乳杆菌就将大肠杆菌全部抑杀 乳酸菌比 大肠杆菌早24 h 接种 72 h内将大肠杆菌全部抑杀 大肠杆菌 比乳酸菌早24 h 接种 在120 h 内也可全部被抑杀 3 株乳酸 菌按一定比例复合 会使拮抗的效果增强 关键词 微生态 中药 益生素 发酵 乳酸杆菌 大肠杆菌 拮抗作用 畜禽大肠杆菌病是畜牧业生产中常见传染病之一 对集约 化养殖业危害极大 生产上由于大肠杆菌耐药情况非常严重 给 临床治疗此病带来困难 乳酸杆菌是畜禽肠道内主要的正常菌 群 具有抗感染 免疫刺激等许多生理功能 本试验研究3株乳 酸菌体外对大肠杆菌的拮抗作用 以期为乳酸菌用于预防治疗 大肠杆菌病提供理论依据 1 材料与方法 1 1 试验材料 菌种 乳酸乳杆菌 Lactobacillus lactis L l 嗜酸 乳杆菌 Lactobacillus acidophilus L a 乳酸链球菌 Strep toccuelactis S l 分离自健康鸡肠道 大肠杆菌1701 株由发病鸡场分离得到 大肠杆菌TM 128株由江苏省农业科学 院惠赠 培养基 改良MRS液体培养基 普通琼脂培养基 普通肉汤 培养基 1 2 试验方法 将乳酸乳杆菌 乳酸链球菌 嗜酸乳杆菌 大肠杆菌分别 在各自适宜的培养基内繁殖 传1代 取20 h培养物 调整菌的 浓度为10 7 CFU mL 取含改良MRS液体培养基试管4 支 分别接种乳酸乳杆菌 嗜酸乳杆菌 乳酸链球菌及三者的混合物 50 50 2 100uL 同时再分别接种大肠杆菌1701或TM 128各100 uL 设大肠杆菌 单独培养管作对照 置恒温培养箱37 培养 取培养 24 48 72 96 120 h的培养液倒普通琼脂平板 检查大肠杆 菌存活情况 记录含活菌数 取含改良MRS液体培养基试管4 支 分别接种乳酸乳杆菌 嗜酸乳杆菌 乳酸链球菌及三者的混合物 50 50 2 100 uL 37 培养24 h后 分别接种大肠杆菌各100 uL 置恒温培养箱37 再培养 取培养24 48 72 96 120 h的培养液倒普通琼脂平 板 检查拮抗情况 取含改良MRS液体培养基试管4支 接种大肠杆菌各100 uL 37 培养24 h后 分别接种乳酸乳杆菌 嗜酸乳杆菌 乳酸链球 菌及三者的混合物 50 50 2 100 uL 37 再培养 取培养 24 48 72 96 120 h的培养液倒普通琼脂平板 检查拮抗情 况 分别取上述各时间点培养物0 5 mL 用灭菌生理盐水做连 续稀释 10 1 10 10 后 用滴注法点种于事先制作并烘 干表面水分的普通琼脂平板上 每滴100 uL 每个稀释度平 行3滴 经37 24 h培养后分别计数大肠杆菌菌落数 2 结果 1 乳酸菌和大肠杆菌同时接种 乳酸菌对大肠杆菌的拮 抗作用结果见图 1 和图 2 图 1 同时接种乳酸菌对大肠杆菌 1701 拮抗结果 图2 同时接种乳酸菌对大肠杆菌TM 128拮抗结果 由图1 2可以看出 无论是试验组还是对照组 1701株与 TM 128在前24 h都处于增殖期 试验组在24 h后 细菌数开始 下降 而对照组 则在48 h后 开始出现下降 但是试验组明 显下降的更快 乳酸菌和大肠杆菌培养96 h后 大肠杆菌全部 被抑杀 对照组培养120 h后 大肠杆菌仍有存活 复合菌表现 出比单一菌更强的拮抗能力 2 乳酸菌培养24 h 后接种大肠杆菌 乳酸菌对大肠杆 菌的拮抗作用结果见图3和图4 图3 乳酸菌培养24 h后接种大肠杆菌1701的拮抗结果 图4 乳酸菌培养24 h后接种大肠杆菌TM 128的拮抗结果 结果表明 当乳酸菌先培养24 h 然后接种大肠杆菌共培 养时无论是试验组还是对照组在前24 h 大肠杆菌仍然处于增殖 期 但是试验组大肠杆菌的增殖幅度明显小于同时间等量接种 结果 说明了乳酸菌提前接种具有良好的拮抗效果 3 大肠杆菌先培养24 h后 再接种乳酸菌对大肠杆菌的 拮抗作用见图5和图6 图5 大肠杆菌1701培养24 h后接种乳酸菌的拮抗结果 图6 大肠杆菌TM 128培养24 h后接种乳酸菌的拮抗结果 图5 6可以看出 当大肠杆菌先培养24 h 然后接种乳酸 菌共培养48 h后 大肠杆菌的仍得到很好的抑制 120 h后 大 肠杆菌可以完全被抑杀 3 结论与讨论 本试验中 3株乳酸菌对大肠杆菌1701 TM 128 株的生长 增殖的拮抗作用 均显示了抑制效果 所得的结果可归纳为以 下几点 无论是禽致病性大肠杆菌1701 还是猪致病性大肠杆菌 TM 128 在与包括L a L l和S l在内的乳酸菌混合培养时 大 肠杆菌的生长增殖均受到抑制 S l对大肠杆菌的抑制效果最为 明显 这可能与S l的生长增殖速度较其它两株菌快有关 生长 增殖速度越快其培养基pH 下降速度越快 培养基的pH 降低越 明显 则抑制效果越强 只是在抑制时间上有差异 这可能与所 用菌株的生长增殖速度有关 复合乳酸菌在拮抗效果上优于单一菌株 说明某些菌种 复合可以形成较强的微生态制剂 机理不明 可能因为不同菌 株在生长增殖过程中起到了相互促进增殖的作用 或者由于其 中的某一菌株可以促进另一菌株产生抗菌素一类的物质 不管是同时接种还是先后不同时间接种 乳酸菌对大肠 杆菌均有一