实验三_叶绿体色素的提取、分离和性质分析

实验三叶绿体色素的提取 分离 性质及含量 一 实验目的 掌握叶绿体色素的提取方法 掌握纸层析法分离叶绿体色素的原理和步骤 掌握叶绿体色素的部分理化性质 二 实验原理 2 类胡萝卜素 一 叶绿体色素 胡萝卜素叶黄素 二 四种色素的化学性质 均为亲脂性 亲水性 均不溶于水 而溶于有机溶剂 故可用乙醇 丙酮等有机溶剂提取 极性大小 叶绿素b 叶绿素a 叶黄素 胡萝卜素根据相似相溶原理 在有机溶液中的溶解度 叶绿素b 叶绿素a 叶黄素 胡萝卜素 叶绿素的卟啉环 叶绿素分子头部的金属卟啉环中心均为Mg2 在弱酸作用下 叶绿素分子中的镁可被H 取代而形成褐色的去镁叶绿素 后者遇铜则可形成绿色的铜代叶绿素 铜代叶绿素很稳定 在光下不易被破坏 故常用此法制做植物的原色标本 三 叶绿素的光学性质 叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性 表现出一定的吸收光谱 可用分光光度计精确测定 叶绿素的荧光现象 叶绿素溶液在透射光下呈绿色 而反射光下呈红色的现象 三 实验材料与试剂 新鲜的菠菜叶片 95 乙醇 CaCO3 醋酸铜结晶 浓盐酸 汽油 量筒 滤纸 大培养皿一只 小培养皿一只 长滴管 剪刀 四 实验步骤 1 叶绿体色素提取 将菠菜叶片擦净 去中脉后取10g剪碎 加少许碳酸钙和石英砂 再分次加入10mL酒精研磨 过滤 定容至50ml 分装于5个试管内 容量分别为10ml 2 3 4 5 1 2 叶绿体色素的分离 纸层析法 用滤纸条浸色素提取液 试管1 吹干 反复多次 将带色素的滤纸条卷成灯芯 将表面皿放在培养皿内 注上汽油 把灯芯浸在汽油内 加盖 色素层分清后 取下吹干 即可看到分离的各种色素 标明各层成分名称和判断依据 3 叶绿体色素吸收光谱曲线 取1ml提取液于比色杯中 试管2 加3ml95 乙醇 用95 乙醇作为对照 在400 700nm之间每隔20nm测一次光 记录波长和吸光度A于下表中 并在标准绘图纸上绘出叶绿体色素的吸收光谱曲线 4 叶绿体色素含量的计算 在标准曲线上查出波长600nm时的叶绿体色素浓度 叶绿体色素含量 mg g 1 5 叶绿素提取液荧光现象观察 取试管3 从与入射光垂直的方向观察 再在透射光方向观察叶绿体色素溶液的颜色 记录叶绿素体色素溶液颜色有何不同 分析原因 6 光对叶绿素的破坏作用 将试管4置于暗处 试管3置于强光下 照射2 3小时后 观察试管颜色的变化 解释这种现象 7 铜代叶绿素反应 向试管5中逐滴加入浓盐酸 并不断摇匀 至颜色变化 观察并记录现象 向变色后的叶绿素溶液中加入少量醋酸铜 并在酒精灯上缓缓加热 观察并记录颜色的变化 分析原因 五 注意事项 分离色素用的圆形滤纸 在中心打的小圆孔 周围必须整齐 否则分离的色素不是一个同心圆 每次改变波长后 要用95 乙醇重新调零 六 实验结果 画图说明叶绿体色素纸层析结果 并解释原因 在标准绘图纸上绘出叶绿体色素的吸收光谱曲线并计算色素含量 解释叶绿素的荧光现象 解释光对叶绿素的破坏作用现象 解释叶绿体色素分子的替代作用现象 七 思考题 1 用不含水的有机溶剂如无水乙醇 无水丙酮等提取