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实验十二动物组织核酸的分离纯化 核酸是一类生物高分子化合物 存在于一切生物体内 是组成细胞的重要成分 它以与蛋白质结合的形式 核蛋白存在于细胞中 是生命的基本物质之一 具有储存 复制生物体遗传信息的功能 也是蛋白质合成不可缺少的物质 因此它对于生物体的生长 遗传 变异等现象起着重要的决定作用 核酸分为两大类 核糖核酸 RNA 和脱氧核糖核酸 DNA 核酸完全水解产生嘌呤和嘧啶等碱性物质 戊糖 核糖或脱氧核糖 和磷酸的混合物 1 猪肝DNA和RNA的分离 核酸分离的原则核酸存在于多种细胞 因此分离方法复杂而多样 又因各种DNA RNA的含量差异 各种分析方法对核酸的纯度及量的要求有差异 因此在实验前应对所采用的方法有所了解和选择 总的说来核酸的分离与纯化是在溶解细胞的基础上 利用苯酚等有机溶剂抽提 核酸溶于缓冲液 即水相 分离 纯化 利用乙醇 丙酮等有机溶剂沉淀 收获 DNA和RNA分离的基本原理 根据核糖核蛋白与脱氧核糖核蛋白在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离 然后用蛋白质变性沉淀剂去除蛋白 使核酸释放出来 再利用核酸不溶于乙醇的性质将核酸析出 达到分离DNA和RNA的目的 在0 14mol L的氯化钠溶液中 RNA核蛋白溶解度大 而DNA核蛋白溶解度小 相反在1mol L的氯化钠溶液中 DNA核蛋白的溶解度大 而RNA核蛋白的溶解度小 从而使DNA和RNA核蛋白分开 酚 氯仿 异戊醇抽提 酚 有效的使蛋白质变性 不能完全的抑制RNA酶的活性 能溶解带有长poly A 的RNA分子 使用前必须用水饱和并用Tris平衡至pH 7 8 以防止DNA分配到有机相 结晶酚要在182度下重蒸去除醌类等氧化产物 这些物质能够引起磷酸二酯键的断裂或促进核酸交联 纯酚的比重为1 07 有机相和水相有时很难分开 氯仿 纯酚的比重为1 07 有机相和水相有时很难分开 加入氯仿 比重为1 47 可以避免这一问题 同时 酚有时会微溶于水 可以用氯仿将水相中的酚去除 异戊醇 减少
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