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文档简介
第四章细胞培养液 培养液是模拟细胞在体内生存的生理环境 是维护组织细胞生存 生长及进行细胞培养各项操作中所需的基本液体 4 2 1细胞培养的常用液体 高纯化水 蒸馏水 密封 短储 离子交换水 含有有机物 胶原酶溶液 C6H14N2O2 7 谷氨酰氨培养液 谷氨酰胺在细胞代谢过程中起重要作用 合成培养基中都要添加 一般配制为100倍浓缩液 配制时应加温至30 完全溶解后过滤除菌 分装至小瓶 储存于 20 使用时 在每100ml培养液中加入0 5 2ml谷氨酰胺母液 终浓度为1 4mmol L 谷氨酰胺在溶液中不稳定 4 放置7天可分解50 两周以上要重新加入原来量的谷氨酰胺 1 培养基的基本要求 4 2 2培养基 L 精氨酸 胱氨酸 组氨酸 络氨酸 浓度 5 20 常用10 血清来源 牛血清 胎牛血清 新生牛血清 小牛血清 马血清 鸡血清 兔血清 羊血清 人血清等 血清的不同批号含有不同的成分 所以许多人发现 应该在使用前对血清进行测试 大多数试剂商提供样品 所满意的批号即可选用 这样可以一次得到足够一年用量的血清 血清在使用前通常在56 加热30分钟 这一过程称为灭活 常用的合成培养基 液 1 199培养基 1950年为培养鸡胚细胞研制的 199培养基含有多达69种成分 其组成成分虽然很多 但单独使用时只能维持细胞存活数天 在加入血清后可以维持很多种细胞的生长 DMEM A 细胞培养基 粉末型 成份 3 RPMl1640培养基 最初为培养小鼠白血病细胞的需要而制备 RPMl1640其组成较为简单 但可以适应很多种类细胞的生长 不仅肿瘤细胞 而且很多正常组织细胞可用RPMI1640进行体外培养 HamF12 DMEM 1 1 补加HEPES NaHCO3 A 添加成分a 促贴壁物质 纤连蛋白 层黏连蛋白 分裂素及分化因子 b 促生长因子及激素 EGF BFGF FGF ECGF IGF 1 PDGF等 c 酶抑制剂 无血清培养基中必须含有 大豆胰酶抑制剂 d 结合蛋白 转运蛋白 转铁蛋白 牛血清蛋白 e 微量元素 硒B 使用方法
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