天麻素诱导脐血间充质干细胞分化为神经元样细胞实验研究

06级七年制硕士研究生开题论证 天麻素诱导脐血间充质干细胞 分化为神经元样细胞的实验研究 研究生 金萍导师 向光红教授 专业 中医内科学研究方向 神经内科 目录一 选题的目的 思路和意义二 研究进展及发展趋势三 立题依据四 实验设计方案和技术路线五 创新之处六 工作的进度计划七 毕业论文设计 一 选题目的 思路和意义 干细胞移植是国际国内研究的热点问题 临床应用具有很大前景 神经系统退行性疾病发病率逐年增加 临床难治 神经干细胞的应用为此类疾病的治疗带来新的希望 脐血间充质干细胞分化能力强 原材料 脐血采集方便 应用不受伦理 法律限制 人体干细胞分为成体干细胞和胚胎干细胞 间充质干细胞是成体干细胞的一种 二 研究进展 研究证明多种抗氧化中药具有诱导间充质干细胞向神经干细胞分化的作用 天麻素具有抗氧化作用 安全 毒副作用小 有望成为新一代的干细胞分化诱导剂 二 立题依据 中医理论依据现代医学理论依据 一 中医理论依据 天麻药性甘 平 归肝经 功能息风止痉 平抑肝阳 祛风通络 神经干细胞存在于大脑中 中医属于 脑髓 肾主髓 天麻归肝经 肝肾同源 天麻可以通过滋肝阴 以补肾阴 达到滋补脑髓的作用 二 现代医学理论研究 1 天麻素现代研究证明天麻的主要有效成分 天麻素 具有抗氧化 保护受损脑细胞 抗衰老等作用 2 脐血间充质干细胞的鉴定脐血间充质干细胞 UBMSCs 表面标志抗原主要包括SH2 SH3 CD29 CD71 CD90 CDl05 CDl20a CDl24 CD105 CDl66等 而CD34 CD45 CDl4 CDllb CDl33等造血细胞表面标志为阴性 本实验中采用流式细胞仪CD45 CD29 CD54 CD33 CD105 CD166 从而对脐血对分离扩增后的脐血间充质干细胞进行鉴定 3 神经干细胞的鉴定巢蛋白 Nestin 是目前鉴定神经干细胞应用最广泛的一种标志物 它是中间丝蛋白的一种 存在于干细胞 反应性星形细胞中 神经元特异性烯醇化酶 NSE 为烯醇化酶的同工酶 特异性地存在于神经元中 是神经干细胞成熟的标志 胶质纤维酸性蛋白 GFAP 为星形胶质细胞特异性产生的蛋白 四 实验设计方案和技术路线 脐血10份 脐血间充质干细胞分离 培养 扩增 脐血间充质干细胞鉴定 A组B组C组D组 培养14d 试验评估 形态学免疫组化流式细胞仪观察鉴定检测表面标志物 收集数据 统计分析 研究报告 附表 分组按照诱导剂的不同分为4组A组不添加诱导剂 B组加入天麻素20 l L C组添加以含30 mol L全反式维甲酸 RA 成纤维生长因子 bFGF 10ug L的培养液诱导 D组添加天麻素20 mol L RA30 mol 10ug LbFGF 附表 实验评估1 形态学观察 倒置显微镜下 动态观察诱导前后UBMSCs形态学变化 2 免疫组化方法检测 巢蛋白 神经元特异性烯醇化酶 胶质纤维酸性蛋白 统计处理 实验数据建立EXCEL数据库 采用SPSSl6 0统计软件分析 五 创新之处 将中医药与现代前沿研究结合 着眼于解决西药诱导剂毒副作用大的临床实际问题 为UBMSCs的诱导分化提供新的材料来源 六 工作的进度安排 1 2012 03 2012 05文献检索 撰写综述和开题报告2 2012 05开题论证3 2012 06 2012 07实验准备阶段 预实验4 2012 07 2013 01完成细胞实验 各项指标检测5 2013 02 2012 03实验数据处理 资料整理 论文撰写6 2013 04论文送审7 2013 05论文答辩 七 毕业论文