蛙类心博观察及

实验29蛙类心博观察及离体蛙心灌流 目的要求 1 观察蛙心起搏点和蛙心脏不同部位的自律性 加深对心脏自动节律性 正常起搏点和潜在起搏点的理解 2 观察细胞外液钾离子 钙离子以及去甲肾上腺素 乙酰胆碱等神经递质对心脏活动的影响 理解内环境理化因素相对稳定对维持心脏正常节律性活动的重要意义 3 学习离体蛙心灌流 了解离体器官的研究方法 基础知识 心肌自动按一定节律发生兴奋的能力 自律性 autorhythmicity 指标 自动兴奋的频率除房室结的结区外 特殊传导系统的细胞均有自律性 对于人类 以窦房结P细胞的自律性最高 是心脏兴奋的正常开始部位 两栖类动物的心脏正常起搏点为静脉窦 自律性 实验器材 1 药品与器材常用蛙类手术器械 毁髓针 蛙钉 滴管 丝线 蛙板 培养皿 大瓷盘 斯氏蛙心套管 蛙心夹 长细滴管 铁支架 任氏液 共用 计算机生物信号采集处理系统 0 65 NaCl 2 CaCl2 2 5 NaHCO3 3 乳酸 1 KCl 1 10000去甲肾上腺素 升压 1 100000乙酰胆碱 1 1000普萘洛尔 1 2000阿托品 25 氨基甲酸乙酯 麻醉 5 肝素 抗凝 2 实验对象蟾蜍或蛙 方法步骤 1 破坏脑脊髓 2 仰卧位固定于蛙板上 3 打开胸腔暴露心脏 观察心脏的结构 4 斯氏结扎 记录结果 实验结果及理论分析 斯氏结扎记录表 次 分钟 两栖类动物的心脏为两心房 一心室 心脏的起搏点是静脉窦 静脉窦的自动节律最高 心房次之 心室最低 正常情况下 心脏的活动节律服从静脉窦的节律 其活动顺序为 静脉窦 心房 心室 窦房沟 一 离体心制备 1 破坏脑和脊髓 打开胸腔 暴露心脏 蛙心灌流方法步骤 2 暴露出心脏 识别静脉窦 心房和心室 3 在左主A干下穿一条线 4 在左主A干下再穿一条线A圆锥根部剪口 将A插管插入心室腔内 5 固定插管 6 摘出心脏 二 连接实验装置 注意 固定换能器时 应稍向下倾斜 以免从心脏滴下的水流入换能器内 随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润 启动PCLAB UE系统 实验项目 循环系统实验 蛙心灌流 三 观察项目 一 描记正常心搏曲线 曲线的幅度 心脏收缩的强弱 曲线的疏密 心率的快慢 曲线的规律性 心跳的节律性 曲线的基线 心室舒张的程度 观察项目 顺序观察项目药量心肌收缩力 任氏液灌流0 65 NaCl灌流33 CaCl21 2滴41 KCl1 2滴51 10000E1 2滴61 10000ACh1滴73 乳酸1滴82 5 NaHCO32 4滴 顺序观察项目药量心肌收缩力 任氏液灌流正常0 65 NaCl灌流减弱33 CaCl21 2滴增强 舒张不完全41 KCl1 2滴减弱51 10000E1 2滴增强61 10000ACh1滴减弱73 乳酸1滴减弱82 5 NaHCO32 4滴恢复正常 实验结果 注意事项 1 当每种化学药物作用已明显时 应立即将蛙心插管内液体吸出而换上任氏液数次 以免心肌受损2 须待心跳恢复正常后 才能进行下一实验项目3 每次换液时 蛙心插管内液面应保持相同高度 顺序观察项目药量心肌收缩力 任氏液灌流正常0 65 NaCl灌流 33 CaCl21 2滴 舒张不完全41 KCl1 2滴 51 10000E1 2滴 心率 61 10000ACh1滴 心率 73 乳酸1滴 82 5 NaHCO32 4滴恢复 实验结果 讨论 1 任氏液 做对照2 0 65 NaCl灌流 Na o Na 内流 Na Ca2 交换 Ca2 i 兴奋 收缩耦联 收缩力 1 KCl溶液 K o Ca2 内流 收缩力 Ca2 o Ca2 内流 Ca2 i 兴奋 收缩耦联 收缩力 舒张期Ca2 与肌钙蛋白不完全解离 基线上移产生Ca2 强直 3 3 CaCl溶液 K 与Ca2 在心肌细胞膜上有竞争性抑制作用 5 l 10000E E与心肌 1受体结合 cAMP 激活心肌膜上的钙通道 Ca2 内流 肌浆网释放Ca2 E C耦联 收缩力 窦房结4期If和ICa T 4期自动除极速度 自律性 心率 6 l 10 000乙酰胆碱 Ach与心肌细胞膜M受体结合 K 通透性 Ca2 通透性 K 外流 Ca2 内流 3期K 外流 最大复极电位 最大复极电位与阈电位差距 自律性 心率 E C耦联 Ca2 i 收缩力 7 3 乳酸H 与Ca2 竞争肌钙蛋白 Ca2 不能与肌钙蛋白结合 收缩力 8 2 5 NaHCO3中和H Ca2 与肌钙蛋白结合 收缩力恢复 1 心肌的生理功能依靠内环境的稳态2 各种离子对心肌收缩力的影响主要依赖Ca2 来实现 结论 思考题 一 正常情况下 两栖类动物 或哺乳类动物 的心脏起搏点是心脏