菌落总数 PPT课件

第三节食品卫生细菌学菌落总数的检验技术 1 一 菌落总数的定义二 菌落总数检验的意义三 菌落总数的报告方式四 菌落总数的检验方法五 细菌菌落总数测定的其他方法六 非常见细菌菌落总数的测定方法 一 菌落总数的定义 菌落总数是指在被检样品的单位质量 g 容积 mL 或表面积 cm2 内 在一定条件下培养后所生成的细菌菌落的总数 二 菌落总数检验的意义 菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志 也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态 以便为被检样品进行卫生学评价时提供依据 从食品卫生观点来看 食品中菌落总数越多 说明食品质量越差 病原菌污染的可能性愈大 由于每种细菌都有它一定的生理特性 培养时只有分别满足不同的培养条件 才能将各种细菌培养出来 但在实际工作中 细菌菌落总数的测定一般都用 平板活菌计数法 因而并不能测出每克或每毫升中的实际总活菌数 所以所得结果 只反映一群在普通营养琼脂中发育的 嗜温的 需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数 三 菌落总数的报告方式 菌落总数的测定是根据微生物在固体培养基上所形成的菌落的生理及培养特征进行的 也就是说 一个菌落即代表一个单细胞 但食品检样中的细菌细胞是以多种形式存在 因此在平板上所得菌落的数字不应报告为活菌数 而应以单位质量 容积或表面积内的菌落数或菌落形成单位数 CFU 报告之 四 菌落总数的检验方法 1 检测常用器材营养琼脂 恒温培养箱 托盘天平 吸管 三角瓶 玻璃珠 平皿 试管 均质器或乳钵等 四 菌落总数的检验方法 2检验程序 四 菌落总数的检验方法 3 操作方法 1 检样稀释及培养 四 菌落总数的检验方法 2 菌落计数方法做平皿菌落计数时 可用肉眼观察 必要时用放大镜检查 以防遗漏 在记下各平皿的菌落总数后 求出同稀释度的各平皿平均菌落数 到达规定培养时间 应立即计数 四 菌落总数的检验方法 3 菌落计数的报告 平板菌落数的选择选取菌落数在30 300之间的平皿作为菌落总数测定标准 应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落数 如果平板内有链状菌落生长 若仅一条链 则视为一个菌落 若有不同来源的几条链 则视每一条链为一个菌落 四 菌落总数的检验方法 3 菌落计数的报告 稀释度的选择 四 菌落总数的检验方法 3 菌落计数的报告 菌落数的报告菌落数在100以内时 按其实有数报告 大于100时 以四舍五入法采用两位有效数字报告 也可用10的指数来表示 四 菌落总数的检验方法 4 注意事项 检验中所需玻璃仪器必须是完全灭菌的 并在灭菌前彻底清洗干净 不得有残留物 用作样品稀释的液体 每批都要有空白对照 必要时追加对照平板 检样的稀释液可用灭菌盐水或蒸馏水 四 菌落总数的检验方法 4 注意事项 注意每递增稀释一次 必须另换1支1mL灭菌吸管 吸管在进出装有稀释液的玻璃瓶或试管时 不要触及瓶口或试管的外侧部分 当用吸管将检样稀释液加至另一装有9mL空白稀释液的管内时 应小心沿管壁加入 四 菌落总数的检验方法 4 注意事项 在检液加入平皿后 应在20min内倾入琼脂 并立即使之与琼脂混合均匀 皿内琼脂凝固后 将平皿倒置于培养箱进行培养 四 菌落总数的检验方法 4 注意事项 在取样进行检验的同时 于操作台上打开一块琼脂平板 其暴露的时间应与该检样从制备 稀释到加入平皿时所暴露的时间相当 然后与加有检样的平皿一起培养 四 菌落总数的检验方法 4 注意事项 培养温度一般为37 培养时间为48h左右 加入平皿内的检样稀释液 有时带有检样颗粒 在这种情况下 为了避免与细菌菌落发生混淆 可做一检样稀释液与琼脂混合的平皿 不经培养 于4 环境中放置 以便在计数检样菌落时用作对照 四 菌落总数的检验方法 4 注意事项 检样如为微生物类制剂 则平板计数中应相应地将有关微生物排除 不可并入检样的菌落总数中做报告 平板活菌计数法只能检出生长的活菌 不能检出样品中全部的细菌数 矿泉水和自来水等的检测 一般不稀释 直接取样进行琼脂平板培养 五 细菌菌落总数测定的其他方法 1 平板表面涂布法将营养琼脂制成平板 经50 1 2h或35 18 20h干燥后 于其上滴加检样稀释液0 2mL 用L形棒涂布于整个平板表面 放置约10min 倒置培养于 36 1 温箱内培养 48士2 h 五 细菌菌落总数测定的其他方法 1 平板表面涂布法优点 此法优于倾注法 因菌落生长于表面 便于识别和检查其形态 缺点 取样量较倾注法少 代表性将受到一定影响 五 细菌菌落总数测定的其他方法 2 平板表面点滴法与涂布法相似 所不同者 只是用标定好的微量吸管或注射器针头按滴将检样稀释液滴加于琼脂平板固定的区域 每个区域滴l滴 每个稀释度滴2个区域 滴加后 将平板平置约5 10min 然后倒置培养 五 细菌菌落总数测定的其他方法 2 平板表面点滴法优点 快速 节省人力物力 适于基层单位和食品厂内部测定细菌总数用 缺点 此法取样量少 代表性可能受到影响 亦可因食品中细菌数少于3000个 g mL 而受到限制 六 非常见细菌菌落总数的测定方法 自然界存在的微生物绝大多数是嗜温性好氧菌 生产中的有益微生物 引起人类疾病的微生物和引起食品腐化变质的微生物也基本上是这一类型的 在这里暂且把非嗜温好氧性细菌称为非常见菌 六 非常见细菌菌落总数的测定方法 标准平板培养计数法是国家制定的菌落总数测定方法 能反映多数食品的卫生质量 但对某些食品却不适用 如引起新鲜鱼贝类食品变质的细菌常常是低温细菌 罐装食品中可能存在的细菌一般是嗜热菌 六 非常见细菌菌落总数的测定方法 如果食品中混杂有多种细菌 菌种之间生长的速度就必然存在着差异 这样 就希望尽可能使多种细菌都能在平板上产生菌落 从而才能比较正确地反映出食品的卫生质量 六 非常见细菌菌落总数的测定方法 培养的时间与