人教版选修1 DNA的粗提取与鉴定 课件(23张).ppt

dna的粗提取与鉴定 基础知识回顾 一 实验材料的选取 实验设计 二 破碎细胞 三 过滤 获取含dna的滤液 四 去除滤液中的杂质 五 析出dna 六 鉴定 完善实验设计 一 实验材料的选取取材原则 凡含有dna的生物材料都可考虑 但选用dna含量相对较高的生物组织 成功率更大 从操作性 成功率等方面综合考虑 以下的实验材料中 你打算选用什么 并说出原因 小组讨论 二 破碎细胞 研磨 实验材料是植物细胞 需先用洗涤剂溶解细胞膜 例如 提取洋葱的dna时 在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐 进行充分搅拌和研磨 小组讨论 1 加入洗涤剂和食盐的目的是什么 2 如果研磨不充分 会对实验结果产生怎样的影响 三 过滤 研磨后用3 4层纱布对溶液进行过滤 去除颗粒较大的杂质 四 去除滤液中的杂质 此时滤液中是纯净的dna吗 可能含有哪些细胞成分 思考 核蛋白 多糖和rna等杂质 小组讨论 根据资料 组内讨论除杂方案 资料一 dna的溶解度曲线在nacl溶液浓度低于0 14mol l时 dna的溶解度随nacl溶液浓度的增加而逐渐降低 在0 14mol l时 dna溶解度最小 当nacl溶液浓度继续增加时 dna的溶解度又逐渐增大 资料二 酶的专一性 一种酶仅能作用于一种物质 或一类分子结构相似的物质 因此蛋白酶能水解蛋白质 但对dna没有影响 嫩肉粉中含有木瓜蛋白酶 资料三 dna对高温的耐受性 大多数蛋白质不能忍受60 80 的高温 而dna在80 以上才会变性 方案一 利用dna在不同浓度的nacl溶液中溶解度的不同 通过控制nacl溶液的浓度去除杂质 具体做法 滤液中加入nacl 调节nacl溶液物质的量浓度为2mol l 过滤出去不溶的杂质 调节nacl溶液物质的量浓度为0 14mol l 析出dna 过滤去除溶液中的杂质 用物质的量浓度为2mol l的nacl溶液溶解dna 方案二 直接在滤液中加入嫩肉粉反应10 15min 嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质 方案三 将滤液放在60 75 的恒温水浴箱中保温10 15min 注意严格控制温度范围 五 dna的析出 原理 dna不溶于酒精等有机溶液 而某些蛋白质则溶于酒精 六 dna的鉴定 原理 在沸水浴的条件下 dna与二苯胺反应呈现蓝色 因此 二苯胺可以作为鉴定dna的试剂 思考 除了二苯胺 还有其他的鉴定dna的方法吗 具体实验操作 1 取材秤取实验材料 切碎 取材前预冷酒精 2 研磨将材料放入研钵中 加洗涤剂和食盐充分研磨 3 过滤在漏斗中垫上3 4层纱布 将研磨液过滤到烧杯中 在4 冰箱中放置几分钟后 再取上清液 4 除杂将滤液放在60 75 的恒温水浴锅中保温10 15min 5 析出在滤液中加入与其等体积的冷却酒精 静置2 3min 出现白色丝状物 粗提取的dna 玻璃棒搅拌 卷起丝状物 用滤纸吸去上面的水分 提取分离 选择鸡血细胞做材料两个原因 1 鸡血细胞核的dna含量丰富 2 鸡血细胞极易吸水胀破 而用动物肝脏细胞作为实验材料需匀浆和离心 对设备要求较高 历时长 思考 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂 具体实验操作 取两支20ml的试管 各加入物质的量浓度为2mol l的nacl溶液5ml 将丝状物放入其中一支试管中 用玻璃棒搅拌 使丝状物溶解 然后向两支试管中各加入4ml二苯胺试剂 混合均匀后 将试管置于沸水中加热5min 待试管冷却后 比较两支试管溶液颜色的变化 鉴定 结果分析与评价 1 你选用了什么实验材料 采用了怎样的方法步骤 2 你提取出白色丝状物了吗 3 与其他同学提取的dna进行比较 看看实验结果有什么不同 分析产生差异的原因 课题延伸 1 本课题使用的洗涤剂是多组分的混合物 在严格的科学实验