人教版选修1 DNA的粗提取与鉴定 课件(18张).ppt

5 1dna的粗提取与鉴定 一 基础知识 一 提取dna的方法 1 提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法 分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 2 提取dna的基本思路 根据dna 蛋白质 rna等生物大分子理化性质的差异 提取dna 去除其他成分 dna的溶解性 dna和蛋白质等成分在不同浓度的nacl溶液中溶解度不同 利用这一特点 选择适当的盐浓度就能使dna充分溶解 而使杂质沉淀 或者让其他成分溶解 dna析出 3 dna等大分子的理化性质 dna不溶于酒精溶液 dna对酶 高温和洗涤剂的耐受性 dna不溶于酒精溶液 但细胞中某些蛋白质则溶于酒精 将dna与蛋白质进一步分离 dna不溶于酒精溶液 dna对酶 高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶 水解蛋白质 对dna没有影响 高温 大多数蛋白质不能忍受60 80 而dna在80 以上才会变性 洗涤剂 溶解细胞膜 去除脂质和蛋白质但对dna没有影响 1 试剂 二 dna的鉴定 条件 二苯胺 沸水浴条件下 dna遇二苯胺被染成蓝色 沸水浴 现象 甲基绿 绿色 想一想必修1还有什么可鉴定dna 一 实验材料的选取 二 破碎细胞 获取含dna的滤液 三 除去滤液中的杂质 纯化 四 dna的析出与鉴定 二 实验设计 一 实验材料的选取 1 材料 鱼卵 猪肝 菜花 香蕉 鸡血 哺乳动物的红细胞 猕猴桃 洋葱 豌豆 菠菜 在液体培养基中培养的大肠杆菌 从中选取2 3种实验材料 2 原则 选用dna含量相对较高 容易提取的生物组织 鸡血 3 合适的材料 实验操作 二 破碎细胞 获取含dna的滤液 1 动物细胞 2 植物细胞 容易破碎 需要溶解细胞膜 鸡血细胞溶液 加入一定量的蒸馏水 同时用玻璃棒搅拌 过滤后收集滤液 想一想 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体 水分大量进入血细胞 使血细胞胀裂 加上搅拌作用 加速鸡血细胞细胞膜 核膜破裂 从而释放出dna 加入一定的洗涤剂和食盐 充分的搅拌和研磨 过滤后收集研磨液 想一想 洗涤剂和食盐的作用分别是什么 洗涤剂 离子去污剂 能溶解细胞膜 利于dna释放食盐 nacl 利于dna的溶解于研磨液中 经研磨可破碎细胞壁 使细胞核内的dna释放 若研磨不充分 会使提取的dna量变少 导致看不到丝状沉淀物 用二苯胺鉴定不显示蓝色等 为了纯化提取的dna需要将滤液作进一步处理 讨论 滤液 研磨液中可能含有哪些成分 答 可能含有核蛋白 多糖和rna等杂质 想一想 研磨的目的是什么 如果研磨不充分 会对实验结果产生怎样的影响 1 dna的溶解性 三 除去滤液中的杂质 方案一 在滤液中加入2mol lnacl 除去不溶的杂质 加入蒸馏水 调节nacl溶液至0 14mol l 析出dna 除去溶液中的杂质 用2mol l的nacl溶液溶解dna 取滤液 为什么反复地溶解与析出dna 能够去除杂质 答 用高盐浓度的溶液溶解dna 能除去在高盐溶液中不能溶解的杂质 用低盐溶液使dna析出 能除去溶解在低盐溶液中的杂质 因此 通过反复溶解与析出dna 就能够除去与dna溶解度不同的多种杂质 讨论 方案二与方案三的原理有什么不同 方案二 利用酶的专一性方案三 蛋白质高温耐受性差 使蛋白质变性 与dna分离 方案二 直接在滤液中加入嫩肉粉 反应10 15分钟 方案三 将滤液放在60 750c的恒温水浴箱中保温10 15分钟 2 dna对酶 高温和洗涤剂的耐受性 四 dna的析出与鉴定 与滤液体积相等的冷却的酒精溶液 体积分数95 静置2 3min 溶液中会出现白色丝状物 粗提取dna用璃棒沿一个方向搅拌 卷起丝状物 并用滤纸吸取上面的水 1 dna的析出 2 dna的鉴定 向两支试管中分别加入2mol lnacl溶液5ml 其中一支试管中加入dna丝状物 各加入二苯胺试剂4ml 混匀后 置于沸水浴中加热5min 待冷却后 比较两只试管中溶液的颜色变化观察现象 溶解丝状物的溶液变为蓝色 制备鸡血细胞液 破碎细胞 释放dna 溶解核内dna 2mol l盐溶液 dna析出 0 14mol l盐溶液 除去细胞质中的大部分物质 dna初步纯化 95 冷酒精 除去核蛋白 rna 多糖等 dna鉴定 实验操作小结 四 课题成果评价 五 课题延伸 2 实验中nacl的物质的量浓度为2mol l和0 14mol l对dna有何影响 1 在dna的粗提取实验过程中 两次向烧杯中加入蒸馏水的作用