无患子的质量标准研究

无患子的质量标准研究摘要:目的无患子为无患子科无患子SapindusmukorossiGaertn的干燥果实，无患子具有清热祛痰、消积杀虫之功效，主治喉痹肿痛、肺热咳喘、疳积、癣疾、肿痛等，民间多用其果实代肥皂用。目前有许多医院和企业都有应用到无患子这种中药制作药物用于治疗疾病。本次研究的目的是建立可靠的无患子质量标准，使在对此药物进行检验的时候有可靠的标准进行参考及操作；方法本次研究采用对粉末显微特征的观察，药材提取物中三萜皂苷的薄层色谱的鉴定，药物水分、灰分、浸出物的标准确立这几个方面对无患子这个中药进行质量标准的研究；结果得出可靠的无患子质量标准的相关实验结果与数据；结论本论文的无患子质量标准研究方法可供以后药物检验参考使用。关键词：无患子；三萜皂苷；显微特征；薄层色谱IStudyonSapindusmukorossiGaertnAbstract:ObjectiveSapindusmukorossiGaertnisbelongtotheSapindaceaeplant.Sapindushavethefunctionofheatingexpectorant,consumerproductinsecticidalefficacy,indicationsHoubithroat,Hyperactivitycough,malnutrition,ringwormdisease,painandsoon.ThisqualitystandardresearchwillstudyonSapindusmukorossiGaertntoestablishstandardsofitself.MethodsThisqualitystandardstudywillusetheMicroscopicidentification,TLCandtheDeterminationofmoisture,ash,extracttoestablishstandardsofPyracanthafortuneana(Maxim.)Li.ResultsObtainreliablestandardquality-relateddataandresults.ConclutionThisqualitystandardresearchmethodsareavailableforfutureuseandreferencedrugtesting.Keywords:SapindusmukorossiGaertn，Microscopicidentificatio，TLC，Determinationofmoisture,ash,extract目录摘要.-1前言.12材料与仪器.22.1材料.22.2仪器.23实验方法.33.1无患子粉末显微特征.33.2无患子薄层色谱鉴别.43.3无患子水分测定.43.4无患子总灰分测定.43.5无患子浸出物测定.44结果.54.1无患子粉末显微特结果.54.2无患子薄层色谱结果.74.3无患子水分测定结果.94.4无患子总灰分测定结果.104.5无患子浸出物测定结果.105讨论.115.1其他薄层板考察情况.115.2酸不溶性灰分考察情况.125.3实验研究总结.13参考文献.15综述.16致谢.2301前言无患子(SapindusmukorossiGaertn)为无患子科无患子属的一种落叶大乔木，其中又患子，油患子，黄目树，洗手果，目琅树，苦患树，油萝树等都是无患子的别名。我国长江流域以南地区及台湾省无患子的主要分布地区，同时无患子在也朝鲜、日本、印度等地区有栽培。同时有研究发现无患子植株能够对二氧化硫有比较好的抵抗能力1。因此在工业城市的生态绿化项目中无患子一般都是优先选用的树种之一。56年是无患子植株一般的成长期，它通常是一年结果一次，并且无患子植株生长速度比其他树种都要快，因此它是属于易以种植养护的树种。无患子属于一种寿命长的数木，以为内它的寿命一般有100200年。无患子在中医中药学中归为寒凉，它的味道比较苦，也具有一点毒性。它具有的药效表现为清除湿热祛除痰脓、帮助消化杀灭寄生虫，因此在治喉咙麻痹肿痛、因肺热引起的咳嗽、皮肤肿毒、癣疾等病症的时候也会使用到无患子。在市场上很多时候都会用无患子果实代替肥皂来使用，而且现在有不少医院和企业都有应用到无患子这种中药制作药物用于治疗咳嗽等疾病。但可惜的是目前还没有确定的无患子质量标准，因此建立可靠的无患子质量标准，有助于对无患子制成的药物或日用品进行检验的时候有可靠的标准进行参考及操作。无患子的种仁含有丰富的油脂，可以作为一种制备生物柴油的新型原料2。无患子皂苷是无患子果皮化学成分中主要组成部分，它的总含量一般约为533J3。电喷雾串联质谱法、高效液相色谱一质谱联用法是李锐等研究对无患子总皂苷中不同成分进行分析的时候采用的方法，三萜皂苷是经过研究最后确定为无患子中主要成分，同时存在倍半萜皂苷，四环三萜皂苷类大戟烷型，五环三萜皂苷类的齐墩果酸型和达玛烷型等物质4。后来一种以前没被发现的的无环倍半萜在SUN等5的研究从无患子果皮中分离得到了。再后来sapinmusaponinsA，B,C,D,E共五种新的没被发现的达玛烷型三萜皂苷也同时在KUO等的研究中从无患子果实中分离得到，同时研究也发现对肿瘤细胞具有细胞毒性并且起到抑制肿瘤细胞作用的为其中的A、C、D、E这四种达玛烷型三萜皂苷6。K，L，M,N等4种新的齐墩果酸型三萜皂苷、sapinmusaponins1F,G,H,I,J共5种新的大戟烷型的三萜皂苷、O，P2种新的达玛烷型的三萜皂苷叶都在HUANG等的研究中从无患子果实中分离出来了，其中对肿瘤细胞具有细胞毒性并且起到抑制肿瘤细胞作用的是以常春藤皂苷元为苷元的10种齐墩果酸型的三萜皂苷，同时在研究发现具有抗血小板聚集效果等药理学作用的是大戟烷型三萜皂苷7。目前市场上尚未有关于检查无患子质量的明确的标准，这往往使市场上的用无患子制作的医药产品出现质量参差不齐，轻则影响疗效，重则可能会对服用药物的人造成不良的健康问题。故建立可靠有效的无患子质量标准是十分迫切及必须的。一旦建立起可靠的无患子质量标准，就可以有助于对市场上此类产品的质量标准进行规范及监督。2材料与仪器2.1材料无患子的果实是类球形的，它的直径一般为2-2.5厘米。无患子外果皮颜色呈棕褐色，在晒干后果皮会皱缩同时出现蜡状的光泽；柔韧的肉质，甚至黏稠如胶一般是无患子的中果皮的特点；在质地为膜质，不完全透光的内果皮的表面种子着生的地方有着白色的绒毛。无患子种子较为光滑，表面黑色，种皮为骨质，没有假种皮，种子呈线形种脐。种子有两枚肥厚，叠生的子叶，颜色为黄色，背面较大的一枚半抱腹面的另外一枚；种子的稍弯曲而且粗短8。根据收集到的样品5批，性状按实际样品进行描述，描述特征如正文。表2-1样品表序列号药材名称药材批号出产地方样品采样时间1无患子20140516广东2014年2无患子20140610广东2014年3无患子20140225广东2014年4无患子20140630广东2014年5无患子20140311广东2014年2.2仪器粉末显微特征鉴别用仪器：生物显微镜（型号：C020172)薄层色谱所用的2仪器：普通硅胶G预制板（德国默克有限公司制作，批号：604115，规格：100*200mm），普通硅胶G预制板（青岛海洋化工厂分厂制作，批号：20081211，规格：100*200mm），人工手铺普通硅胶G板（规格：100*200mm），佳能照相机，半自动点样器（型号：Linmat5），层析缸；水分，灰分等质量标准所用仪器：电热恒温干燥箱（型号：DG20-02），METTLERTOLEDO电子天平，马弗炉（型号：TM0910），坩埚若干,扁形称量瓶若干；3实验方法3.1无患子粉末显微特征收集到的样品5批进行实验，并用采集无患子对照药材进行比对与实验。根据收集到的样品5批进行粉末的显微鉴别特征进行描述。3.2无患子薄层色谱鉴别本次标准研究的薄层鉴别是三萜类进行研究9，硅胶G板为实验用薄层板，点样时供试品溶液与对照品药材溶液点样量为5l，以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）的展开比例混合后将溶液在温度为10以下的条件下静置再拿下层溶液作为展开剂使用，显色剂是10%硫酸乙醇溶液，在温度为105下烘五分钟至斑点显色清晰，在日光下观察。实验如下：3.2.1供试品溶液的制备取无患子粉碎后过四号筛的粉末1g，加入10ml乙醇，在常温下超声提取30分钟，过滤后取滤液，滤液水浴蒸干，用2ml的乙醇溶解残渣，作为供试品溶液。3.2.2对照品溶液制备称取无患子果对照药材1g，按照上面提取的方法制成无患子对照药材溶液。33.2.3薄层色谱点样量考察取供试品溶液，分别以2、5、10、15、20l的点样量进行实验，再用显色剂10%硫酸乙醇溶液喷板，然后在105下烘5分钟至斑点显色清晰检视。3.2.4薄层色谱湿度考察取供试品溶液和对照品溶液点样于同一薄层板，分别在用硫酸调节相对湿度18和88的条件下展开，再用显色剂10%硫酸乙醇溶液喷板，然后在105下烘5分钟至斑点显色清晰检视。3.2.5薄层色谱温度考察取供试品溶液和对照品溶液点样于同一薄层板，分别在温度为5和19的条件下展开，再用显色剂10%硫酸乙醇溶液喷板，然后在105下烘5分钟至斑点显色清晰检视。3.2.6薄层色谱薄层板考察取供试品溶液和对照品溶液点样于不同牌子的普通硅胶G板，再用显色剂10%硫酸乙醇溶液喷板，然后在105下烘5分钟至斑点显色清晰检视。3.3无患子水分测定2010板中国药典一部中水分测定的第一法是本次实验选用来测定无患子水分的方法，取无患子供试品2g左右,在干燥至恒重的扁形称量瓶中平铺为厚度不超过5mm的薄层,再在电子天平中精密称定扁形称量瓶与粉末的总重量，然后在105条件打开瓶盖干燥5小时，在取出前将扁形称量瓶的瓶盖盖好，并迅速将其移置干燥器中，再干燥器中冷却30分钟后，迅速把装有样品的瓶子取出置于电子天平中精密称定。再在温度为105条件干燥1小时，待冷却后如上述的方法称重，直到连续两次称重的差异不超5mg为止。根据瓶加样品称重的结果与恒重的扁形称量瓶的质量相减得出减失的重量，用减失的重量除于粉末的质量最后计算出供试品中水分的含量（）1043.4无患子总灰分测定2010板中国药典一部中总灰分测定的方法是本次实验选用来测定无患子总灰分的方法，取粉碎后能通过二号筛的无患子粉末，取混合均匀的无患子供试品3g左右，将粉末放入已经做恒重处理的坩埚之中，在电子天平中称量粉末与坩埚的总质量，再将其置于马弗炉内缓缓炽热，同时注意避免粉末在坩埚中燃烧起来，直到粉末被灼伤至完全碳化之后，再逐渐升高马弗炉温度到600，灼烧6小时使无患子样品得到完全灰化，再测量残渣与坩埚的重量。再在温度为600的马弗炉中灼烧6小时，待冷却后如上述的方法称重，直到连续两次称重的差异不超5mg为止。根据残渣重量与坩埚的重量减去坩埚恒重的质量，得出的差值除与供试品粉末的质量用于计算无患子总灰分的含量（）113.5无患子浸出物测定2010板中国药典一部中浸出物含量测定中的热浸法是本次实验选用来测定无患子浸出物含量的方法，取供试品粉末约2g左右，在电子天平上精密称定粉末的质量，再将粉末放入250ml的磨口锥形瓶里面，用吸量管精密取稀乙醇100ml并加入进磨口锥形瓶之中，用塞子塞好，在电子天平中称定它的重量，常温下静置大约一个小时后，将其连接到回流冷凝管上，用电热套加热至液面沸腾，调节电热套使锥形瓶中的液体并保持微沸状态一个小时左右。一小时后关闭电热套使瓶内液体放冷，待用液体冷却后取下锥形瓶，用塞子塞好，再在电子天平中称定重量，用胶头滴管吸取稀乙醇加入瓶内补足加热时所失去的乙醇重量，充分摇匀后在干燥滤器过滤，用25ml的移液管精密量取滤液25ml，再将移取的滤液加入干燥至恒重的蒸发皿里，在水浴锅中蒸干，蒸干后再于105的恒温箱中干燥3小时，最后取出蒸发皿将其放入干燥器中冷却30分钟，之后迅速它的重量。除非另外做规定，一般是用干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量（）124结果54.1无患子粉末显微特征结果取本品干燥果，粉碎后，过四号筛，取粉末制作水合氯醛透化片，放在光学显微镜下观察，粉末颜色为棕色，极粘稠内果皮细胞狭长，在长轴方向上内果皮细胞嵌列在不同细胞层中，同时镶嵌着方晶，宽约10m左右；外果皮细胞的细胞壁比较厚，形状呈不规则圆形，细胞内含有棕色物质，直径2025m；石细胞，单个散在，细胞壁较厚，形状为类圆形或不规则型，直径为832m；螺纹导管单个散在或者成群存在；草酸钙簇晶大多单个散在，它的直径1235m。结果见附图4-14-12:图4-1：内果皮细胞（40）图4-2：内果皮细胞（40）图4-14-4。内果皮细胞狭长，在长轴方向上内果皮细胞嵌列在不同细胞层中，同时镶嵌着方晶，宽约10m左右。图4-3：外果皮细胞（40）图4-4：外果皮细胞（40）图4-34-4。外果皮细胞的细胞壁比较厚，形状呈不规则圆形，细胞内含有棕色物质，直径2025m。6图4-5：石细胞（40）图4-6：石细胞（40）图4-54-6。石细胞，单个散在，细胞壁较厚，形状为类圆形或不规则型，直径为832m。图4-7：螺纹导管（40）图4-8：螺纹导管（40）图4-94-10。为螺纹导管单个散在或者成群存在。图4-11：草酸钙簇晶（40）图4-12：草酸钙簇晶（40）图4-114-12。草酸钙簇晶大多单个散在，它的直径1235m。4.2无患子薄层色谱结果4.2.1薄层色谱点样量考察结果点样量考察：取1g的无患子按实验方案中的制备方法制备供试品，分别点样2、5、10、15、20l，结果如图4-13所示，故确定1g的取样5l的点样量为本法的取样量。74.2.2薄层色谱湿度考察结果结果表实验设计的方法在湿度18%和88%的条件下进行薄层色谱鉴别试验，对鉴别无显著区别。（见图4-14图4-15）。4.2.2薄层色谱温度考察结果结果表明实验设计的方法在温度为5和19的条件下试验，对鉴别无显著区别。（见图4-16图4-17）。溶剂前沿供试品20140516供试品20140630供试品20140311无患子对照药材T：19普通硅胶G预制板（默克）点样量：5l溶剂前沿供试品20140516供试品20140516供试品20140516供试品20140516供试品20140516T：21RH：62%手铺普通硅胶G板点样量依次为：2、5、10、15、20l1234图4-14日光下检视RH=88%1234图4-15日光下检视RH=18%12345图4-14日光下检视RH=88%84.2.3薄层色谱薄层板考察结果取供试品溶液和对照品溶液点样于不同牌子的普通硅胶G板，在供试品色谱中，对应对照药材色谱相应的位置上，都出现了相同颜色的斑点（见图4-18图4-20），因此实验结果表明在不同品牌的普通薄层板对实验鉴别无明显影响。溶剂前沿供试品20140516供试品20140610供试品20140225供试品20140630供试品20140311T：19RH：59%手铺普通硅胶G板点样量：5l溶剂前沿供试品20140516供试品20140630供试品20140311无患子对照药材T：19RH：59%默克硅胶G预制板点样量：5l溶剂前沿供试品20140516供试品20140630供试品20140311无患子对照材RH：39%普通硅胶G预制板（默克）点样量：5l1234图4-16日光下检视T=51234图4-17日光下检视T=1912345图4-18手铺普通硅胶G板日光下检视1234图4-16默克硅胶G预制板日光下检视94.3无患子水分测定结果根据2010版中国药典一部附录IXH第一法中水分测定法进行测定。实测样品5批，结果为9.11%9.62%，平均值9.396%（见表4-1）。根据中国药典一部附录IIB要求，规定本品水分不得过13.0%，如正文。表4-1：无患子水分序列号药材批号出产地方取样量（g）水分平均值120140516广东2.00312.02089.62%9.53%9.57%220140610广东2.00412.00639.54%9.56%9.55%320140225广东2.00912.00239.11%9.18%9.14%420140630广东2.00322.00429.37%9.30%9.33%520140311广东2.00692.00489.43%9.36%9.39%平均值（%）9.396%溶剂前沿供试品20140516供试品20140630供试品20140311无患子对照药材T：19RH：59%青岛海洋硅胶G预制板点样量：5l1234图4-16青岛海洋硅胶G预制板日光下检视104.4无患子总灰分测定结果根据2010版中国药典一部附录IXK第一法中总灰分测定法进行测定。实测样品5批，结果为3.30%3.65%，平均值3.492%（见表4-2）。根据最大值上浮20%，规定本品总灰分不得超过4.38%，如正文。表4-2：无患子总灰分序列号药材批号出产地方取样量（g）总灰分平均值120140516广东3.00933.00563.64%3.30%3.47%220140610广东3.01093.00683.32%3.34%3.33%320140225广东3.00973.00673.52%3.54%3.53%420140630广东3.00963.00983.64%3.65%3.65%520140311广东3.00803.00813.47%3.48%3.48%平均值（%）3.492%4.5无患子浸出物测定结果根据2010版中国药典一部附录XA第一法中醇溶性浸出物项下的热浸法测定，用稀乙醇作溶剂，实测样品5批，结果为39.81%45.57%，平均值41.95%（见表4-3）。根据最小值下浮20%，规定本品醇溶性浸出物不得少于31.85%,如正文。表4-3：无患子浸出物序列号药材批号出产地方取样量（g）浸出物平均值120140516广东2.00652.003943.81%42.06%42.94%220140610广东2.01882.010745.57%42.22%43.90%320140225广东2.01722.022241.23%42.54%41.89%420140630广东2.03612.000541.43%40.45%40.94%520140311广东2.00392.019239.81%40.38%40.10%平均值41.95%115讨论5.1其他薄色谱方法考察情况5.1.1其他方法考察1取无患子粉末（过四号筛）10g，加入90ml乙醇，然后在温度为60的条件下回流提取3个小时，一共提取3次。上述方法提取出来的溶液用做供试品溶液。取无患子果对照药材，按上述的方法制成对照药材溶液。用点样管吸取供试品溶液和对照品药材溶液各5l，分别在同一块硅胶G薄层板上点样，再用展开剂为正丁醇-冰醋酸-水（6：1：3）的溶液中展开，展开后取出，喷三氯话锑氯仿饱和溶液，在温度为105的条件下烘5分钟直到颜色明显。色谱鉴别结果：对照品药材与供试品药材在薄层板色谱对应的位置上，显相同颜色但不明显斑点。结论：此方法得出的斑点不明显，并且分离系统分离度较差，故不予采用。5.1.2其他方法考察2取无患子粉末（过四号筛）10g，加入90ml乙醇，然后在温度为60的条件下回流提取3个小时，一共提取3次。上述方法提取出来的溶液用做供试品溶液。取无患子果对照药材，按上述的方法制成对照药材溶液。用点样管吸取供试品溶液和对照品药材溶液各5l，分别在同一块硅胶G薄层板上点样，再用展开剂为苯-甲酸乙酯-甲醇（4：3：2）的溶液中展开，展开后取出，喷三氯话锑氯仿饱和溶液，在温度为105的条件下烘5分钟直到颜色明显。色谱鉴别结果：对照品药材与供试品药材在薄层板色谱对应的位置上，显相同颜色斑点。结论：分离出斑点较少且不明显，故不予采用。5.1.3其他方法考察3取取无患子粉碎后过四号筛的粉末1g，加入10ml乙醇，在常温下超声提12取30分钟，过滤后取滤液，滤液水浴蒸干，残渣用2ml的乙醇溶解，作为供试品溶液。取无患子果对照药材，用上述相同的方法制备对照药材溶液。用点样管吸取供试品溶液和对照品药材溶液各5l，分别同一硅胶G薄层板上进行点样，再以展开剂为苯-甲酸乙酯-甲醇（5：3：2）的溶液中展开，展开后取出，喷三氯话锑氯仿饱和溶液在温度为105的条件下烘5分钟直到颜色明显。色谱鉴别结果：供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。结论：分离出斑点较少，故考察其他更加有利于分离较多斑点的方法。5.2酸不溶性灰分考察情况讨论按照2010版中国药典一部附录IXK照灰分测定法中酸不溶性灰分测定方法对无患子中的酸不溶性灰分进行测定。在无患子总灰分测定后装有灰分的坩埚中小心加入约10ml的稀盐酸，同时用表面皿盖好坩埚。将加入稀盐酸的坩埚放在水浴锅上水域加热10分钟左右。取出坩埚与表面皿，对它们用5ml热水冲洗，洗过的热水放进坩埚中，再在放有无灰滤纸的漏斗中滤过，用纯水冲洗坩埚内的水浴残渣到无灰滤纸上，并洗涤至洗液用硝酸银检查到无氯化物反应。滤渣连同无灰滤纸仪器放到同一坩埚之中，在干燥器中干燥，再在马弗炉中炽灼至恒重。电子天平称量残渣的质量，再通过计算得出供试品中酸不溶性灰分的含量（%）。实测样品5批，结果为0.11%0.22%，平均值0.15%（见表5-1）。因为值很小，本人建议不设酸不溶性灰分。结果见表5-1：酸不溶性灰分序号批号产地取样（g）酸不溶性灰分平均120140516广东3.00933.00560.13%0.08%0.11%220140610广东3.01093.00680.16%0.08%0.12%320140225广东3.00973.00670.16%0.27%0.22%420140630广东3.00963.00980.16%0.14%0.15%520140311广东3.00803.00810.14%0.18%0.16%平均值0.15%13（%）5.3研究总结根据本次研究内容最终确立无患子的质量标准如下：薄层色谱检验方法根据讨论情况多中方法的薄层色谱研究，发现效果并不太理想。鉴于无患子的有效成分为三铁皂苷，借鉴中国药典中人参的薄层色谱研究方法并予以改进，最终却立的方法为：取无患子粉碎后过四号筛的粉末1g，加入10ml乙醇，在常温下超声提取30分钟，过滤后取滤液，滤液水浴蒸干，残渣用2ml的乙醇溶解，作为供试品溶液。称取无患子果对照药材1g，按照上面提取的方法制成无患子对照药材溶液。按照2010年版中国药典一部附录VIB中薄层色谱法的试验方法，点样时供试品溶液与对照品药材溶液点样量为5l，以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）的展开比例混合后将溶液在温度为10以下的条件下静置再拿下层溶液作为展开剂使用，显色剂是10%硫酸乙醇溶液，在温度为105下烘五分钟至斑点显色清晰，在日光下观察。取本品干燥果，粉碎后，过四号筛，取粉末制作水合氯醛透化片，放在光学显微镜下观察，粉末颜色为棕色，极粘稠内果皮细胞狭长，在长轴方向上内果皮细胞嵌列在不同细胞层中，同时镶嵌着方晶，宽约10m左右；外果皮细胞的细胞壁比较厚，形状呈不规则圆形，细胞内含有棕色物质，直径2025m；石细胞，单个散在，细胞壁较厚，形状为类圆形或不规则型，直径为832m；螺纹导管单个散在或者成群存在；草酸钙簇晶大多单个散在，它的直径1235m。无患子检查项为：水分按照2010年版中国药典一部附录IXH第一法水分测定法的实验测定，确定无患子水分不得过13.0%；总灰分按照2010年版中国药典一部附录IXK中总灰分的测定法的实验测定，得出无患子总灰分不得过5.0%；浸出物按照2010年版中国药典一部附录XA中浸出物的测定法中热浸法进行实验，以稀乙醇作溶剂，不实验结果确定无患子浸出物不得少于32.0%。以上就是本次论文关于无患子质量标准研究的具体成果，检查项目都是参考2010年版中国药典对于大多数中药材的检查项目而制定，希望日后能为官方制定无患子质量标准时提供参考，更希望日后能有更多对无患子的深入研14究为无患子的标准确立提供更准确的依据。参考文献1中科院“中国植物志”编辑委员会中国植物志M上海：上海科学出版社1985，47(1)：0142王建章，吴子斌无患子籽油成分分析与提取工艺研究J农业科学研究2010，31(1)：48503杨志斌，杨柳，李晖无患子有效化学成分的分析研究J湖北林业科技，152010，(5)：32344李锐。周燕，杨永成，等无患子皂苷成分的串联质谱分析J高等学校化学学报，2006，27(1)：52545SUNJR，CHENGKC，PANTY，eta1AnewacyclicsesquiterpeneoligoglycosidefrompericarpsofsapindusmukorossiJChinChemLett，2002，13(5)：5555566KUOYH，HUANGHC，YANGKLM，eta1NewdammaranetypesaponinsfromthegallsofSapindusmukorossiJJAgricFoodChem，2005，53(12)：472247277HUANGHC，WUMD，TSAIWJ，eta1TriterpenoidsaponinsfromthefruitsandgallsofSapindusmukorossiJPhytochemistry，2008，69(7)：160916168国家中医药管理局中国本草编委会.中华本草，第5册M.上海：上海科学技术出版社，1999:1209黄素梅，王敬文，杜孟浩，等.无患子皂甙在不同展开体系中的薄层色谱行为A.应用化工.2009，38（6）：889-89410国家药典委员会中华人民共和国药典2010年版一部M中国医药科技出版社2010，附录H11国家药典委员会中华人民共和国药典2010年版一部M中国医药科技出版社2010，附录K12国家药典委员会中华人民共和国药典2010年版一部M中国医药科技出版社2010，附录X综述关于药材无患子的研究1无患子的概述16无患子(SapindusmukorossiGaertn)为无患子科无患子属的一种落叶大乔木，其中又患子，油患子，黄目树，洗手果，目琅树，苦患树，油萝树等都是无患子的别名。长江流域以南的地区及台湾省无患子的主要分布地区，同时无患子在也亚洲其它多个国家地区也有栽种。同时有研究发现无患子植株能够对二氧化硫有比较好的抵抗能力1。因此在工业城市的生态绿化项目中无患子一般都是优先选用的树种之一。56年是无患子植株一般的成长期，它通常是一年结果一次，并且无患子植株生长速度比其他树种都要快，因此它是属于易以种植养护的树种。无患子属于一种寿命长的数木，以为内它的寿命一般有100200年，。无患子在中医中药学中归为寒凉，它的味道比较苦，也具有一点毒性。它具有的药效表现为清除湿热祛除痰脓、帮助消化杀灭寄生虫，因此在治喉咙麻痹肿痛、因肺热引起的咳嗽、皮肤肿毒、癣疾等病症的时候也会使用到无患子。在市场上很多时候都会用无患子果实代替肥皂来使用，而且现在有不少医院和企业都有应用到无患子这种中药制作药物用于治疗咳嗽等疾病。但可惜的是目前还没有确定的无患子质量标准，因此建立可靠的无患子质量标准，有助于对无患子制成的药物或日用品进行检验的时候有可靠的标准进行参考及操作。我国的东部、南部、西南部是无患子的主要生长地区，跨度为温带到热带，因此其分布特点是地域广、跨度大，是一种低山、石灰岩山地及丘陵中经常能见到的树。无患子生长喜好阳光充足的地方同时野能够在稍微荫凉的地方生产，在温暖湿润气候的条件下生长最好，无患子在冬季可以耐受零下15低温，因此它的耐寒力也是相对来说比较强的；无患子对于生长发育的土壤条件要求并不高，可以生长在多种pH值不同的土壤上及含钙质的土壤甚至是废弃建筑残碴地面上。因为无患子的根插进土壤的程度比较深，所以它能够抵御很大的风力吹袭。无患子植株喜好长与干燥的沙壤土之中，但不能长时间长在湿度比较大的土壤。无患子萌芽力是比较弱的(仅89)，而且是不耐修剪的，但健康的无患子寿命可达百年以上2。2无患子的显微特征研究无患子的果实是类球形的，它的直径一般为2-2.5厘米。无患子外果皮颜17色呈棕褐色，在晒干后果皮会皱缩同时出现蜡状的光泽；柔韧的肉质，甚至黏稠如胶一般是无患子的中果皮的特点；在膜质，半透光的的内果皮的表面种子着生的地方有着白色的绒毛。无患子种子较为光滑，表面黑色，种皮为骨质，没有假种皮，种子呈线形种脐。种子有两枚肥厚，叠生的子叶，颜色为黄色，背面较大的一枚半抱腹面的另外一枚；种子的稍弯曲而且粗短3。无患子的粉末是很粘稠的并且颜色为棕色。它的粉末显微特征是：内果皮细胞狭长，在长轴方向上内果皮细胞嵌列在不同细胞层中，同时镶嵌着方晶，宽约10m左右；外果皮细胞的细胞壁比较厚，形状呈不规则圆形，细胞内含有棕色物质，直径2025m；石细胞，单个散在，细胞壁较厚，形状为类圆形或不规则型，直径为832m；螺纹导管单个散在或者成群存在；草酸钙簇晶大多单个散在，它的直径1235m。4。3无患子的化学成分研究无患子皂苷是无患子果皮化学成分中主要组成部分，它的总含量一般约为533J5。电喷雾串联质谱法、高效液相色谱一质谱联用法是李锐等研究对无患子总皂苷中不同成分进行分析的时候采用的方法，三萜皂苷是经过研究最后确定为无患子中主要成分，同时存在倍半萜皂苷，四环三萜皂苷类大戟烷型，五环三萜皂苷类的齐墩果酸型和达玛烷型等物质6。后来一种以前没被发现的的无环倍半萜在SUN等7的研究从无患子果皮中分离得到了。再后来sapinmusaponinsA，B,C,D,E共五种新的没被发现的达玛烷型三萜皂苷也同时在KUO等的研究中从无患子果实中分离得到，同时研究也发现对肿瘤细胞具有细胞毒性并且起到抑制肿瘤细胞作用的为其中的A、C、D、E这四种达玛烷型三萜皂苷8。K，L，M,N等4种新的齐墩果酸型三萜皂苷、sapinmusaponinsF,G,H,I,J共5种新的大戟烷型的三萜皂苷、O，P2种新的达玛烷型的三萜皂苷叶都在HUANG等的研究中从无患子果实中分离出来了，其中对肿瘤细胞具有细胞毒性并且起到抑制肿瘤细胞作用的是以常春藤皂苷元为苷元的10种齐墩果酸型的三萜皂苷，同时在研究发现具有抗血小板聚集效果等药理学作用的是大戟烷型三萜皂苷9。对于无患子果实中三萜皂苷的提取，有研究发现对无患子皂苷的提取有明显提高提取效率的物质是纤维素酶，研究也发现淀粉酶对无患子18皂苷的提取几乎没有任何作用，而若在提取过程中加入果胶酶甚至会产生抑制提取导致降低提取率的效果，研究也发现若同时加入纤维素酶、淀粉酶和果胶酶三种物质在提取的时候并没有起到增强的功能。故研究提出用纤维素酶为催化剂用于提取无患子皂苷，该研究确定的方法为：纤维素酶用量应该为用于提取的样品粉末质量的千分之一，温度条件为50，时间为2.5小时，使用不需要调整pH的溶液。8659为在此种工艺方法下的提取率，同时在此条件下的提取方法的提取率比未加酶处理的提取得到提取率提升幅度1963，这正好确立加入纤维素酶的提取方法确实对无患子皂苷的提取有提升作用10。4无患子的薄层色谱研究一般三氯甲烷-甲醇一水(65：35：10)是在薄层色谱分析检测皂苷类成分经常用到的一种展开体系，但经研究发现无患子的化学成分在三氯甲烷-甲醇-水(50：16：1)展开体系中，各种色谱带之间存在看起来比较模糊的界限。因未得到很好的展开，一些极性大的物质而停留在原点的附近，同时最上方的一条谱带展开距离相对来说过大。因此，此种展开体系并不是实验该用的展开体系。后来有人研究发现使用正丁醇展开体系对大极性的皂甙的展开、分离有较好的效果,可是却对于小极性的皂甙的分离效果并不理想；对小极性皂甙具有较好的分离结果展开体系是苯展开体系,但此种体系对于大极性皂甙展开效果也不太理想11。针对以上研究，故本人设计以下薄层色谱方法针对三萜类进行研究：取无患子粉碎后过四号筛的粉末1g，加入10ml乙醇，在常温下超声提取30分钟，过滤后取滤液，滤液水浴蒸干，残渣用2ml的乙醇溶解，作为供试品溶液。称取无患子果对照药材1g，按照上面提取的方法制成无患子对照药材溶液。按照2010年版中国药典一部附录VIB中薄层色谱法的试验方法，点样时供试品溶液与对照品药材溶液点样量为5l，以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）的展开比例混合后将溶液在温度为10以下的条件下静置再拿下层溶液作为展开剂使用，显色剂是10%硫酸乙醇溶液，在温度为105下烘五分钟至斑点显色清晰，在日光下观察。5无患子的药理研究19无患子皂苷具有清除湿热、止咳祛痰、消除积满、杀灭寄生虫的药理功效，可以用于治疗咽喉肿痛、咳嗽有痰、饮食过多引起的积滞等疾病。其主要的药用价值有：（1）抗肿瘤作用日本学者长尾常敦研究发现，一些对小鼠黑素瘤、人胃癌细胞增殖具有抑制作用的物质存在于无患子的提取物当中，单皂苷组分是它起抑制作用的活性成分，而它的双皂苷组分几乎没有任何的活性12。（2）降压作用王维胜等13研究中发现，无患子皂苷能降低血管紧张肽、内皮素，升高一氧化氮，因此对肾性高血压大鼠有降压效果。龙子江等14实验也表明对原发性高血压大鼠有降压效果的有效物质是无患子皂苷，其作用的机制可能是因为皂苷的作用下使肾素-血管的紧张肽系统、血管内皮功能的变化。（3）抗菌作用英国学者TAMURA等研究发现了无患子提取物中皂苷成分的抗皮肤真菌活性及皂苷构效之间的关系，发现其中70和85无患子甲醇洗脱液混合后得到的皂苷混合物具有明显的抗皮肤真菌作用，其中抑制作用相对其他来说比较强的是单链皂苷。另外，虽然Sp-Mix对酵母菌的抑制作用强，但在真菌中除微小的毛真菌外的真菌没有效果；虽然SpMix对革兰阴性菌没有任何抑制消除作用，但它对革兰阳性菌有中等程度的抑制消除作用15。（4）抗炎抗溃疡作用MEYER等16实验证明了具有抗炎和抗溃疡的作用的物质存在于无患子的提取物之中。IBRAHIM等17实验也发现有对抑制幽门螺杆菌的效果的物质存在于无患子的乙醇提取物，并且作用的时候几乎没有任何的抗药性。（5）同时有关药酒无患子皂苷还具有保护肝脏、防止心肌缺血、防血栓生成、杀灭精子抑制精子生成等药理的作用。因此,无患子在开发心血管疾病治疗及肿瘤治疗方面具有非常大的研究价值。6无患子的其他用途因为无患子皂甙具有比较强的去除污渍能力，因此它是一种优良的天然表面活性剂并常常用于丝质和毛质的洗涤剂及洗发水的组成配方之中。周仁等人曾经研究了用于清除人体表面金属毒物的效果的洗涤剂，他们发现了无患子水提取液。为了验证无患子的洗涤效果他们设计的实验是用5的无患子水溶液与1的肥皂水和3的硝酸水溶液进行对比它们对金属毒物的不同洗脱效果。实验结果显示无患子水提液对铅的洗脱率明显高于肥皂水对铅的洗脱率，洗脱20效果甚至接近硝酸水溶液。实验研究发现无患子制成的洗涤剂对几种经常见到的金属毒物的洗脱率高达90%以上，证明了其洗脱效果非常不错。KOMMALAPATIRR，ValsarajKT，ConstantWD，等人也曾经做过关于洗脱污染土壤中的HCB(六氯苯)的试验，采用无患子果皮中的水提取物制备的植物基质表面活性剂作为洗脱机，并用SDS(十二烷基硫酸钠）和天然植物基质制成的表面活性剂对HCB的洗脱效果与无患子水提溶液进行比较，从实验结果可以看出在浓度为25无患子水提取液的作用下HCB在水中溶解度提高近几百倍，在被污染的土壤中最终洗脱出来的HCB回收率高达90以上。因为无患子洗脱机是一种天然表面活性剂，它的生物降解性好同时也不会造成对土壤的二次污染，所以无患子作为洗脱机是具有十分好的应用前景。在上海白猫有限公司孙沽如，陈孔常等人也研究了用正丁醇提取的无患子的三萜皂苷和倍半萜糖苷的混合物，经过风干后得一种黄色的粉末。实验结果表明此粉末混合物是一种表面活性非常强的非离子表面活性剂，在与不同种类的铵盐各自混合制备后的实验，结果都发现有不同程度的增加起洗涤功效的作用，与K12铵盐复配后的效果是这么多种盐复配效果中最好。这可以看到如果在洗发香波或洗涤剂中加入无患子皂苷提取物，将会具有更好的洗涤效果。亚油酸、油酸、花生酸、顺一11一二十碳一烯酸和棕榈酸是无患子种仁油脂肪酸的主要组成部分，其中占92以上的都是碳链长度C16一C22的脂肪酸，因此无