林蛙皮中多糖提取的方法比较-答辩稿

林蛙皮中多糖提取的方法比较,目录,一、研究意义,中国林蛙，俗称哈什蟆，主要分布在中国东北山区，是国家二级保护动物。林蛙具有极高的医、药用价值，是集食补、美 容、药用等多种功能功效于一体的珍稀两栖类动物。,目前国内外研究林蛙多糖的比较少，林蛙多糖在抗肿瘤、抗衰老这些方面保健效果明显，具有重要的应用价值及极大的开发潜力 。倘若将林蛙皮中多糖的进一步研究必将拓宽中国林蛙开发与利用的新途径，丰富东北地区“北药”的资源。,二、研究内容,多糖提取方法 热水提取法 酶提取法 碱提取法 多糖提取方法的优化 单因素试验 正交试验,三、实验部分 苯酚-硫酸法测定多糖含量,在490nm处测吸光值，以含糖量（g/mL）为横坐标，吸光值吸光度平均值为纵坐标，得标准曲线方程Y=0.0700X-0.0065，R2=0.9996。结果表明标准品的浓度在012ug/mL的范围内与吸光值有良好的线性关系。,公式计算,式中：C为由吸光度值在标准曲线查得的相应的多糖含量（g/mL）； V为样品稀释后的体积（mL）； m为多糖粗提物的质量(g); M为实验前所用林蛙皮的质量(g);,热水提取法,将林蛙皮用粉碎机粉碎，过40目筛，料液比1:8加入蒸馏水，在50水浴加热12h，用离心机离心取上清液。加入等量体积95%乙醇，静置24h，用离心机离心取沉淀物，用95%乙醇洗涤脱水，在50鼓风干燥箱内干燥至恒重。,单因素试验,图1,图2,图3,图1：单因素提取时间实验图2：单因素料液比实验图3：单因素温度实验,热水法正交试验结果表,经分析可知，对热水法提取多糖影响最大的是提取时间，其次是提取温度、料液比。最佳的提取工艺为：提取时间11h，提取温度45，料液比1:8。对选定的最佳工艺条件进行重复实验，获得的林蛙皮中多糖颜色为黄棕色，多糖的提取率为0.47%。,将林蛙皮用粉碎机粉碎，过40目筛，料液比1:8加入蒸馏水，匀浆，用冰醋酸调节pH至2-3，加2%胃蛋白酶，在50水浴加热6h酶解，在用5%KOH调节pH至8-9，加2%的胰蛋白酶，在50水浴加热6h酶解，用离心机离心取上清液。加入等量体积95%乙醇，静置24h，用离心机离心取沉淀物，用95%乙醇洗涤脱水，在50鼓风干燥箱内干燥至恒重。,酶法,单因素实验,图1：单因素温度实验图2：单因素酶比实验图3：单因素提取时间实验,图1,图2,图3,酶法正交试验结果表,经分析可知，对提取率影响最大的是酶比，其次是温度、提取时间。最佳的提取工艺为：胃蛋白酶与胰蛋白酶2:1，提取温度50，提取时间7h。对选定的最佳工艺条件进行重复实验，获得的林蛙皮中多糖颜色为黄棕色，多糖的提取率为0.91%。,提取工艺：粉碎林蛙皮，过40目筛，然后加5%KOH5倍，在50水浴锅上搅拌提取2h,用冰醋酸调节pH至7.0，离心取沉淀，沉淀用95乙醇洗涤脱水，沉淀用鼓风干燥机干燥至恒重。,碱提取法,单因素试验,图1,图2,图3,图1：单因素料液比实验图2：单因素浸提液浓度实验图3：单因素提取时间实验,碱提取法正交试验表,经分析可知，对碱法提取多糖影响最大的是提取时间，其次是浸提液浓度、料液比。最佳的提取工艺为：提取时间3h，浸提液浓度5%，料液比1:5。对选定的最佳工艺条件进行重复实验，获得的林蛙皮中多糖颜色为黄棕色，多糖的提取率为0.42%。,3、实验结论,本论文对林蛙皮中多糖的不同提取方法进行了比较，分别利用热水法、碱法、酶法对林蛙皮中的多糖进行了提取，通过使用等量林蛙皮，等量浸提液，经试验表明酶法为最佳提取方法。最后在单因素的基础上，经正交试验确定了提取多糖提取的最佳工艺条件：酶比2:1，提取温度50，提取时间7h。并根据葡萄糖标准曲线确定了多糖的提取率为0.91%。,四、致谢,感谢邱芳