【毕业学位论文】（Word原稿）荧光光谱法测定硫酸氢氯吡格雷含量

毕 业 论 文 （本科生） 中文标题 荧光光谱法测定硫酸氢氯吡格雷含量 英文标题 of by 生姓名 李 娟 指导教师 王子宁 学 院 药学院 专 业 药 学 年 级 2008 级 兰州大学教务处 李娟：氯吡格雷的含量测定 诚信责任书 本人郑重声明：本人所呈交的毕业论文（设计），是在导师的指导下独立进行研究所取得的成果。毕业论文（设计） 中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等，均已明确注明出处。 除文中已经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体已经发表或在网上发表的论文。 特此声明。 论文作者签名： 日 期： 李娟：氯吡格雷的含量测定 I 目 录 中文摘要 . 1 . 2 第一节 前言 . 3 一 硫酸氢氯吡格雷 . 3 床应用 . 3 合用药 . 4 景展望 . 4 二 荧光光谱法 . 4 光的产生 . 4 响荧光强度的外部因素 . 4 量分析方法 . 5 光分析新技术 . 6 三 荧光猝灭法测定药物含量 . 7 第二节 实验部分 . 8 1 仪器与试剂 . 8 2 实验方法 . 8 同浓度硫酸氯吡格雷标准品溶液与 用的荧光猝灭试验 . 8 酸氢氯吡格雷对 光猝灭作用的机理研究 . 8 同温度下硫酸氢氯吡格雷标准品溶液与 用的荧光猝灭 . 8 酸氢氯吡格雷对 光猝灭方式 . 8 酸氢氯吡格雷与 表观结合常数 结合位点数 n . 9 酸氢氯吡格雷与 合反应的作用力 . 9 光猝灭法测定硫酸氢氯吡格雷片剂的含量 . 9 光猝灭法测定硫酸氢氯吡格雷的标准曲线绘制 . 9 酸 氢氯吡格雷片及空白片与 用荧光光谱图 . 9 密度试验 . 9 样回收率试验 . 9 酸氢氯 吡格雷片中主药的含量测定 . 10 3 结果与讨论 . 10 李娟：氯吡格雷的含量测定 同浓度硫酸氯吡格雷标准品溶液与 用的荧光猝灭光谱 . 10 酸氢氯吡格雷对 光猝灭作用的机理研究 . 10 同温度下硫酸氢氯吡格雷标准品溶液对 荧光猝灭方式 . 10 酸氢氯吡格雷与 表观结合常数 结合位点数 n 的测定 . 12 酸氢氯吡格雷与 合反应的作用力 . 12 光猝灭法测定硫酸氢氯吡格雷片剂的含量 . 13 光猝灭法测定硫酸氢氯吡格雷的标准曲线绘制 . 13 酸氢氯吡格雷片及空白片与 用荧光光谱图测定 . 13 密度试验 . 14 加样回收率试 验 . 14 酸氢氯吡格雷片中主药的含量测定 . 15 4 结论 . 16 参考文献 . 17 致谢 . 19 李娟：氯吡格雷的含量测定 1 荧光光谱法测定硫酸氢氯吡格雷含量 作者：李娟 指导老师：王子宁 （ 兰州大学 药学院 甘肃 省 兰州 市 730000） 中文 摘要 : 目的 采用荧光光谱技术研究硫酸氢氯吡格雷对牛血清白蛋白 (的荧光猝灭作用，建立硫酸氢氯吡格雷片剂含量测定的荧光分析方法。方法 考察不同温度下硫酸氢氯吡格雷对 荧光 猝灭作用，利用 程及双倒数方程处理实验数据，探讨硫酸氢氯吡格雷与 作用机理。采用间接荧光猝灭法测定硫酸氢氯吡格雷片中主药的含量。 结论 硫酸氢氯吡格雷对 荧光猝灭过程以静态猝灭为主 , 两者主要靠疏水作用力相结合，结合位点数为 1。硫酸氢氯吡格雷的浓度 在 0的范围内 与 荧光强度呈良好的 线性关系 ， 相关系数 关键词 ：硫酸氢氯吡格雷，牛血清白蛋白， 荧光光谱 李娟：氯吡格雷的含量测定 2 of by i of 30000.) To by SA to of SA to SA is is on is a SA in a 0-5 0(r=( . 娟：氯吡格雷的含量测定 3 第一节 前言 药物对于人身健康有十分重要的意义。药物分析则是整个药学领域中重要组成部分。药品质量的优劣，直接关系到人身体健康，乃至生命安全。因此，在药品的研制、生产和临床使用的过程中都应该执行严格、科学的管理制度，并需采用各种有效的分析方法，进行严格的药品分析检测，从而对药品的各个环节进行全面的监控，以确保药品的质量。 药物分析方法主要有 光度法、质谱法、 高效液相色谱法等。光度法 的优点是 准确度高，精密度较好， 且设备简单 ，成为常规的药物分析方法。其中，荧光分析法具有高选择性、高灵敏度、取药量少、操作方法简便等优点，使其逐渐成为测定和鉴定药物的重要手段，在药物分析领域中会有良好的发展前途。 一 硫酸氢氯吡格雷 硫酸氢氯吡格雷适用于心肌梗塞、中风等心脑血管疾病，国产与进口产品疗 效相似 1。硫酸氢氯吡格雷属于噻吩吡啶类衍生物，是血小板聚集抑制剂，能选择性地抑制 后抑制激活 b/ 而抑制血小板聚集，也可以抑制非 不影响磷酸二酯酶的活性。通过不可逆改变血小板血小板寿命受到影响。 床应用 肌梗死 经罗心平等 2的研究，证实负荷剂量的氯吡格雷在直接支架术的急性心肌梗死的治疗中有良好的效果，不良反应的发生少于噻氯匹定。 心病 柳要伟等 3考察冠心病患者分别应用氯吡格雷与阿司匹林的疗效及安全性。实验表明，应用氯吡格雷或阿司匹林均能起到抗血小板聚集的效果，且氯吡格雷效果优于阿司匹林。 风 杨卉等 4研究了氯吡格雷对进展型缺血性脑卒中的疗效，实验结果表明，氯吡格雷组的全血黏度及血浆黏度的下降程度大于阿司匹林组，无严重不良反应，此类患者使用氯吡格雷有效且安全。 周动脉性疾病 沈宗泉等 5考察了氯吡格雷对颈动脉斑块的影响，结果病人颈动脉粥样硬化斑块面积缩小或消失，动脉管腔直径增加、内 中膜厚度变薄，治疗前后有显著性差异，与对照组相比，有显著性差异。氯吡格雷对颈动脉斑块有明显逆转用。 李娟：氯吡格雷的含量测定 4 合用药 王欢等 6将 88例不稳定型心绞痛患者随机分为治疗组 (47例 )和对照组 (41例 )，对照组使用阿司匹林、硝酸酯类、 离子拮抗剂及他汀类药物治疗；治疗组在对照组基础上加用氯吡格雷。 3个月后，治疗组总有效率为 对照组总有效率 这说明氯吡格雷对不稳定型心绞痛的治疗安全且有效。 王塑华等 7用中西医结合疗法治疗急性脑梗死。实验结果为：治疗组（氯吡格雷口服，疏血通静 注）总有效率为 对照组（仅氯吡格雷口服）总有效率为 两组疗效有显著性差异。治疗组的全血黏度、血浆黏度、纤维蛋白原指数均下降明显，无特殊不良反应。氯吡格雷与疏血通联合治疗能够提高临床疗效，改善血液流变学，降低血液黏稠度，优于纯西药治疗。 此外 ， 氯吡格雷还可与曲美他嗪 8及阿托伐他汀联合，用于治疗不稳定型心绞痛；氯吡格雷与低分子肝素 9联合，可治疗短暂性脑缺血发作等。 景展望 硫酸氢氯吡格雷是一种能高效的抑制血小板聚集的药物，与其他抗血小板药物相比，其优点是副作用小、疗效强、费 用低，在临床上有独特的优势 ，且有 广阔市场和临床应用前景。根据硫酸氢吡氯格雷的晶型等物理性质，已经开发成胶囊剂，在生产工艺上或许比片剂会更具优势。 二 荧光光谱法 10 物质吸收光子能量而被激发，然后从激发态的最低振动能级回到基态时所发射出的光称为荧光。根据物质的荧光谱线位置及其强度鉴定物质并测定物质含量的方法称为荧光分析法。 光的产生 处于激发态的分子不稳定，可能要通过辐射跃迁和非辐射跃迁等分子内的去活化过程释放多余的能量而返回基态。发射荧光是其中的一条途径，其他的途径还有振动弛豫、内部能量转换 、外部能量转换、体系间跨越和磷光发射。荧光是分子外层价电子从第一电子激发态的最低振动能级，以辐射形式发射光回到基态的任一振动能级，此时分子发射的光即为荧光。 响荧光强度的外部因素 度 温度对于溶液的荧光强度有着显著的影响。在一般情况下，随着温度的升高，荧光物李娟：氯吡格雷的含量测定 5 质溶液的荧光强度和荧光效率将降低。这是因为，当温度升高时，分子运动速度加快，分子间碰撞概率增加，使无辐射跃迁增加，从而降低了荧光效率。 剂 同一物质在不同溶剂中，其荧光光谱的位置和强度都有差别。一般情况下，荧 光波长随着溶剂极性的增加而长移，荧光强度也有增加。这是因为在极性溶剂中， 跃迁所需要的能量差小，而且跃迁概率增加，使紫外吸收和荧光波长均向长移，强度也增强。溶剂粘度减小时，可以增加分子间碰撞机会，使无辐射跃迁增加而荧光减弱。故荧光强度随溶剂黏度的减小而减弱。由于温度对溶剂的粘度有影响，一般是温度升高，溶剂粘度变小，因此温度上升荧光强度下降。 当荧光物质本身是弱酸或弱碱时，该溶液的 主要是因为弱酸弱碱和它们的离子结构有所不同，在不同的酸度中 ，分子和离子间的平衡改变，因此荧光强度也有差异。每一种荧光物质都有其适宜的发射荧光的存在形式，也就有相应的 保持荧光物质和溶剂之间的离解平衡。 光熄灭的影响 荧光熄灭又称为荧光猝灭，是指荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子的相互作用，引起荧光强度降低或荧光强度与浓度偏离线性关系的现象。引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂。常见的熄灭剂有卤素离子、重金属离子、氧分子以及硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物。 荧光熄灭在荧光分析中会产生测定误差，但是如果一种荧光物质在加入某种熄灭剂后，荧光强度 的减小和荧光熄灭剂的浓度呈线性关系，则可以利用这一性质测定荧光熄灭剂的含量。这种方法称为荧光熄灭法。当荧光物质的浓度超过 1g/于荧光物质分子间碰撞的概率增加，产生荧光自熄灭现象。溶液浓度越高，这种现象越严重。 射光的干扰 当一束平行光照射在液体样品上大部分光线透过溶液，小部分光线由于光子和物质分子相碰撞，使光子的运动方向发生改变而向不同角度散射，这种光称为散射光。散射光对荧光测定有干扰。尤其是波长比入射波长长的拉曼光，因其波长与荧光波长接近，对荧光测定的干扰更大，必须采取措施消除。 量分析方法 光强度与荧光物质浓度的关系 李娟：氯吡格雷的含量测定 6 溶液的荧光强度与该溶液吸收光能的程度以及溶液中荧光物质的荧光效率有关。荧光分析法定量的依据是荧光强度与浓度的线性关系，所测定的是荧光强度 F。只要增加检测器的灵敏度，使极微弱的的荧光也能检测到，就可以测定很稀的溶液浓度。因此，荧光分析法的灵敏度很高。 量分析法 (1) 标准曲线法 荧光 光谱 分析一般采用 的是 标准曲线法，即标准物质和试样 经过相同的处理之后，配一系列标准溶液，测定荧光强度，以 标准溶液的浓度为横坐标， 荧光 强度为纵坐标绘制标准曲线。然后在同样 的 条件下 ， 测定试样溶液的荧光强度， 再 从标准曲线 中 求出试样中荧光物质的含量。 (2) 比例法 如果荧光 物质 的标准曲线 经 原点， 那么可以在 其线性范围内，用比例法 测定。取已知量 对照品，配制 浓度在线性范围之间的 标准溶液，测定荧光强度 ， 然后在 相同 条件下测定试样溶液的荧光强度。由标准溶液的浓度和两个溶液的荧光强度比， 可求 试样中荧光物质的含量。 光分析新技术 随着仪器分析的日趋发展，分子荧光分析法的新技术发展也很迅速。荧光仪器使用了单色性极好、强度更大的激光作为光源，提高了 荧光分析法的灵敏度和选择性。 间分辨荧光分析 由于分子荧光的寿命不同，可在激发和检测之间延缓一段时间，使具有不同荧光寿命的物质达到分别检测的目的。这就是时间分辨荧光分析。时间分辨荧光分析采用脉冲激光作为光源。该法在测定混合物中某一组分时的选择性比用化学法处理样品时更好，而且省去前处理的麻烦。目前已将时间分辨荧光法应用于免疫分析，形成时间分辨荧光免疫分析法。 步荧光分析 同步荧光分析是在荧光物质的激发光谱和荧光光谱中选择一适宜的波长差值，同时扫描荧光发射波长和激发波长，得到 同步荧光光谱。荧光物质浓度与同步荧光峰峰高呈线性关系，故可用于定量分析。 束增敏荧光分析 极性小而难溶于水的荧光物质在胶束溶液中溶解度显著增加。胶束溶液对荧光物质的李娟：氯吡格雷的含量测定 7 增溶作用是因非极性的有机物与胶束的非极性尾部有亲和作用，使荧光分子定位于胶束的亲酯性内核中，这也对荧光分子起了一定的保护作用，减弱了荧光质点之间的碰撞，减少了分子的无辐射跃迁，增加了荧光效率，从而增加了荧光强度。胶束溶液对荧光物质有增溶、增敏和增敏作用可大大提高荧光分析法的灵敏度和选择性。 光分析法 常用 方法是 固体磷光法和胶束溶液室温磷光法。固体磷光法是在薄层色谱板上挥发溶剂 后进行斑点磷光分析；胶束室温磷光法是在样品溶液中加入表面活性剂 形成胶束，可增加其刚性，减少因碰撞引起的能量损失。常用的表面活性剂有十二烷基硫酸盐、环糊精等。 学发光和生物发光分析 化学发光是在没有任何光、热或电场等激发源，而是以化学反应代替光激发物质产生的光辐射；生物发光是指产生于生物体系中的化学发光，萤火虫及其他真菌、原生动物发射的光属于生物发光。这两种发光分析方法都属于分子发射光谱，发光强度和单位时间与被测反应物的浓度变 化相关，可用于定量分析。发光分析法的仪器优点是由反应室、光检测器及信号输出装置组成，灵敏度高，仪器设备简单，线性范围宽，分析速度快。发光分析法在痕量分析、生物医学分析及环境检测中有较多的应用。 三 荧光猝灭法测定药物含量 许多药物自身的荧光强度与其浓度在一定范围内能够呈现良好的线性关系 , 因此可以根据工作曲线直接进行荧光分析；也有许多药物的荧光强度与其浓度的线性关系较差 , 但可用化学法改变药物分子的部分结构 , 使体系的荧光强度与其浓度之间的线性关系满足测定要求 , 同样可以获得满意的分析结果 ,这种间接荧光分析法在药物荧光分析中占有重要地位 11。 血清白蛋白是人及动物的血清中含量最丰富的蛋白质，各种药物进入人体时首先与血清白蛋白结合，再通过血浆存储和运输，最终到达受体部位而产生药理作用 12研究药物分子与蛋白质间的相互作用，对了解药物作用机制有非常重要的意义 14。荧光光谱法是目前研究生物大分子以及各种小分子、离子间的相互作用最常用的手段之一。 硫酸氢氯吡格雷，分子式 2学名 2 (2氯苯基 ) 2 (6， 7二氢噻吩并 3， 2 c吡啶 5- 基 )乙酸甲酯硫酸氢盐，是一种噻吩并吡啶类化合物，白色或类白色粉末，血小板抑制剂，主要用作治疗心脑血管疾病的药物。目前测定硫酸氢氯吡格雷含量的常用方法有 高效液相色谱法、紫外分光光度法等 15。本实验拟应用一种新的测量硫酸氢氯吡格雷含量的方法，即间接荧光分析法，以使其含量测定快速准确。 李娟：氯吡格雷的含量测定 8 第二节 实验部分 1 仪器与试剂 仪器 光分光光度计； 子分析天平； 酸度计。 试剂 牛血清白蛋白（ 930，分子量 65000）；硫酸氢氯吡格雷原料药 （兰州大学药学院微生物与生物化学研究所提供，含量 98%）； 硫酸氢氯吡格雷对照品（ 中国食品药品检定研究院，含量 ； 硫酸氢氯比格雷片剂（兰州大学药学院微生物与生物化学研究所提供，规格 75号： 20100501） 牛血清白蛋白储备溶液：用万分之一电子分析天平精密称定 血清白蛋白，用蒸馏水定容至 50溶液浓度为 0）； 硫酸氢氯吡咯雷标准品溶液：用万分之一电子分析天平精密称取硫酸氢标准品 适量水超声溶解，定容至 25 溶液浓度为 以上溶液均需进行振荡，充分摇匀并避光保存。实验中的 ，用以维持离子强度。实验所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水，经检测无荧光杂质。 2 实验方法 同浓度硫酸氯吡格雷标准品溶液与 用的荧光猝灭试验 取八个 10量瓶，分别依次加入 0 的 准溶液 液（ ） 2上述溶液中分别加入硫酸氢氯吡咯雷标准品溶液 蒸馏水定容至 10匀后，于 25水浴锅中恒温 10定激发波长为 285描荧光发射光谱。同时测定各溶液荧光强度（ 8540 酸氢氯吡格雷对 光猝灭作用的机理研究 同温度下硫酸氢氯吡格雷标准品溶液与 用的荧光猝灭 同 下方法，制备含有等浓度 系列硫酸氢氯吡格雷标准溶液，用蒸馏水定容至 10匀后，于 35 水浴锅中恒温 10定 85 描荧光发射光谱。同时测定各溶液荧光强度（ 8540 酸氢氯吡格雷对 光猝灭方式 光猝灭作用有动态猝灭和静态猝灭两种方式。根据文献报道方法 16，分别测定未加入硫酸氢氯吡格雷的 光值 荧光值 F，以 值和相应的硫酸氢氯吡格雷标准溶液的浓度 Q作图，求测不同浓度硫酸氯李娟：氯吡格雷的含量测定 9 吡格雷对 光猝灭作用的 态猝灭方程及猝灭常数，以论证猝灭机理。 酸氢氯吡格雷与 表观结合常数 结合位点数 n 药物与蛋白质相互作用时，可应用以下公式计算药物与蛋白质的表观结合常数 结合位点数 n:17 ( F) /F = n . 分别将在 25 和 35 条件下测得的不含有硫酸氢氯吡格雷的 光值 列加入硫酸氢氯吡格雷药品后 荧光值 F，以及硫酸氢氯吡格雷标准溶液的浓度值 Q代入该方程，可以求测硫酸氢氯吡格雷药品与 表观结合常数 n。 酸氢氯吡格雷与 合反应的作用力 药物与蛋 白质之间的作用力主要包括疏水相互作用、范德华力、氢键等。可以通过计算不同温度下，硫酸氢氯吡格雷与大分子 用的焓变 变 自由能变断药物与 相互作用力。 光猝灭法测定硫酸氢氯吡格雷片剂的含量 光猝灭法测定硫酸氢氯吡格雷的标准曲线绘制 含有等浓度 硫酸氢氯吡格雷系列标准溶液的配制同 下，以系列硫酸氢氯吡格雷溶液的浓度为横坐标，相应的 光强度（ 8540纵坐标，绘制 25 条件下硫酸氢氯吡格雷含量测定的标准工 作曲线，求出线性方程。 酸氢氯吡格雷片及空白片与 用荧光光谱图 取硫酸氢氯吡格雷空白片 1 片，加水定容至 25瓶中，超声 10 分钟， 膜过滤，弃初滤液，保留续滤液，取该滤液 10量瓶中，加入 备液 液 2蒸馏水定容至 10 285激发波长，扫描 光发射光谱。同时，与上述方法相同，配制硫酸氢氯吡格雷药片的供试品溶液，扫描荧光发射光谱。 密度试验 按 下方法，制备硫酸氢氯吡格雷药片的供试品溶液 ，测定荧光强度（ 8540连续测定 6 次，考察测量结果的精密度。 样回收率试验 按 下方法，制备硫酸氯比格雷片剂浸出滤液，准确量取 9 份该滤液各 于 10量瓶中。准确量取硫酸氢氯吡格雷标准品溶液 于 25量瓶中并定容至刻度，取该液 三份分别置于上述 10量瓶中。依次加入备液 液 蒸馏水定容至刻度，摇匀，测定相对荧光强度，李娟：氯吡格雷的含量测定 10 计算加样回收率。 酸氢氯吡格雷片中主药的含量测定 取同一批号硫酸氢氯吡格雷片剂，制备供试品溶液，测定荧光强度 F 值（ 8540代入标准曲线方程中，计算片剂含量。 3 结果与讨论 同浓度硫酸氯吡格雷标准品溶液与 用的荧光猝灭光谱 由图 1 可见，随着硫酸氢氯比格雷浓度的提高， 340长处的荧光强度逐渐减弱，说明硫酸氢氯吡格雷可以与 互作用，进而导致 荧光猝灭。 荧光猝灭作用随硫酸氢氯吡格雷的浓度增高而相应增强。 图 1 不同浓度硫酸氯吡格雷标准品溶 液与 用的荧光猝灭光谱 酸氢氯吡格雷对 光猝灭作用的机理研究 同温度下硫酸氢氯吡格雷标准品溶液对 荧光猝灭方式 硫酸氢氯吡格雷对 猝灭方式若为动态猝灭，应满足 程：。 25 时，硫酸氢氯吡格雷与 互作用的线见图 2。 35 时，药物与 互作用的 线见图 3。线性方程及相关系数计算见表 1。 李娟：氯吡格雷的含量测定 11 表 1 不同温度下 程及猝灭常数 温度 /K 程 L Ls r 298 =03Q+03 011 308 =03Q+03 011 图 2 硫酸氢氯吡格雷与 互作用的 线（ 25 ） 图 3 硫酸氢氯吡格雷与 互作用的 线（ 35 ） y=2=y=2=娟：氯吡格雷的含量测定 12 一般各类 猝灭剂对生物大分子最大扩散碰撞猝灭常数为 21010(Ls 从表 1 结果看， 数量级为 1011，由此可初步判断加入硫酸氢氯吡格雷导致 光猝灭的过程以静态猝灭为主，而温度升高 程斜率减小，则进一步表明该猝灭过程是以静态猝灭为主。 酸氢氯吡格雷与 表观结合常数 结合位点数 n 的测定 根据方程 ( F) /F = n ，计算硫酸氢氯吡格雷药品与 表观结合常数 结合位点数 n，结果见表 2。 表 2 氯吡格雷与 表观结合常数 结合位点数 n 温度 /K 线性方程 r L n 298 F=+03 08 F=+03 表 2 可以看出，在接近人体生理条件下氯吡格雷与 合位点 n 接近于 1，结合常数 数量级为 103,这说明了氯吡格雷可与 成 1 个结合位点 并且有较强的结合作用，即可被蛋白质运输和储存。 酸氢氯吡格雷与 合反应的作用力 由热力学公式 (1)= )/R K T 计算不同温度下氯吡格雷与 用的熵变 变 由能变 表 3。 表 3 氯吡格雷与 热力学参数 温度 /K kJ kJ kJ 298 308 由表 3 可知，硫酸氢氯吡格雷与 热力学参数 和 ，根据 判断小分子与生物大分子结合力性质的热力学规律 18， 推断出氯吡格雷与 间以疏水作用力为主。 李娟：氯吡格雷的含量测定 13 光猝灭法测定硫酸氢氯吡格雷片剂的含量 光猝灭法测定硫酸氢氯吡格雷的标准曲线绘制 根据静态猝灭方程 F=，作出硫酸氢氯吡格雷含量测定标准曲线。25 时，标准曲线方程为 F=，相关系数 r=0。工作曲线图谱见图 4。 y = 4 3F图 4 硫酸氢氯吡格雷荧光测定工作曲线 酸氢氯吡格雷片及空白片与 用荧光光谱图测定 硫酸氢氯吡格雷空白片与含药片剂供试品溶液与 用的荧光发射光谱图见图 5。由图 5 可知，空白片供试品溶液对 荧光激发光谱基本不产生干扰，而含药片剂溶液可使 光猝灭。因此可以用荧光猝灭法测定硫酸氢氯吡格雷片剂中药物的含量。李娟：氯吡格雷的含量测定 14 图 5 硫酸氢氯吡格雷片及空白片 与 用荧光光谱图 密度试验 精密度试验结果见表 4。 表 4 精密度试验结果 由表 4 可知，同一份硫酸氢氯比格雷片剂的供试品溶液 6 次测定结果 )说明该方法精密度好。 样回收率试验 加样回收率试验结果见表 5。由表 5 可知，用荧光猝灭法测定硫酸氢氯吡格雷片剂的加样回收率，平均加样回收率为 %）为 结果表明，采用荧光猝灭法测定硫酸氢氯吡格雷片剂中主药的含量，灵敏度高，准确性好，可以作为硫酸氢氯比格雷片剂的含量测定方法。 1 2 3 4 5 6 F（ 8540 %） 娟：氯吡格雷的含量测定 15 表 5 硫酸氢氯吡咯雷回收率测定结果 酸氢氯吡格雷片中主药的含量测定 取同一批号硫酸氢氯吡格雷片剂，按含量测定方法，测定主药含量，并折算为标示量百分含量，结果见表 6。标示量百分含量的平均值为 %）为 编号 储液加入量 /单次测定荧光强度 平均值 理论加入量 ( 实际加入量 (回收率/% 平均回收率 /% % 1 娟：氯吡格雷的含量测定 16 表 6 同一批号硫酸氢氯吡格雷片剂中主药含量测定结果（ %， n=6）（批号： 20100501） 测定次数 1 2 3 4 5 6 平均 F 值 曲方程 F=+示量百分含量 % 平均百分含量 % 结论 荧光分析法主要的优点是测定灵敏度高和选择性好。一般紫外 0荧光分析法的检出限可达到 10至 10本实验通过荧光光谱方法研究了 硫 酸氢氯吡格雷与牛血清白蛋白（ 的相互作用，探讨了硫酸氢氯吡格雷与 光猝灭常数，以及结合