HBV基因分型和耐药突变基因检测的临床应用.ppt

HBV基因分型和耐药突变基因检测的临床应用 产品介绍 1 2 背景介绍 主要内容 乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒 HBV 引起的肝脏炎性损害 是我国当前流行最广泛 危害最严重的一种传染病 HBV感染呈世界性流行 但不同地区HBV感染的流行强度差异很大 据世界卫生组织报道 全球约20亿人曾感染过HBV 其中3 5亿人为慢性HBV感染者 每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭 肝硬化和原发性肝细胞癌 HCC 1 1 WorldHealthOrganization HepatitisB WorldHealthOrganizationFactSheet204dex RevisedOctober2000 WHOWebsite http www who int mediacentre factsheets fs204 en inhtml 流行病学 流行病学 ClinicalandEpidemiologicCorrelationsinHBVInfection LokAS McMahonBJ ChronichepatitisB Hepatology2007 45 507 39 Erratum Hepatology2007 45 1347 流行病学 2006年全国乙型肝炎流行病学调查结果表明 我国1 59岁人群乙肝表面抗原携带率为7 18 据此推算 我国现有的慢性HBV感染者约9300万人 其中慢性乙型肝炎患者约2000万例 2 2 慢性乙型肝炎防治指南 2010年版 中华医学会肝病学会 中华医学会感染病学分会 2010年12月10日 病原学 HBV hepatitisBvirus 乙型肝炎病毒 属嗜肝病毒科 基因组长约3 2Kb 为部分双链环状DNA HBV已发现有A I9个基因型 在我国以C型和B型为主 包膜 HBsAg糖蛋白细胞脂肪核心 HBV DNADNA PolymeraseHBcAg 病原学 HBV侵入肝细胞后 部分双链环状HBVDNA在细胞核内以负链DNA为模板延长正链以修补正链中的裂隙区 形成共价闭合环状DNA cccDNA 然后以cccDNA为模板 转录成几种不同长度的mRNA 分别作为前基因组RNA和编码HBV的各种抗原 cccDNA半寿 衰 期较长 很难从体内彻底清除 HBV感染和发展的结局图 HBV感染可有不同的发展和结局 这是由病毒和宿主双方因素决定的 病毒方面 感染的数量和毒株的异质性 以及传播的方式 宿主方面 免疫状态 以及决定免疫状态的年龄 遗传素质 基础健康状况和并存的疾病 自然史 诊断 临床诊断既往有乙型肝炎病史或HBsAg阳性超过6个月 现HBsAg和 或 HBVDNA仍为阳性者 可诊断为慢性HBV感染 可分为 慢性乙型肝炎 乙型肝炎肝硬化 携带者 隐匿性慢性乙型肝炎 实验室诊断 生物化学检查 ALT AST 血清白蛋白 PT 胆碱酯酶 AFP 血清学检查 HBVDNA 基因型和变异检测 定量检测 分型和耐药突变检测 影像学诊断 病理学诊断 治疗 慢性乙型肝炎治疗的总体目标最大限度地长期抑制HBV 减轻肝细胞炎症坏死及肝纤维化 延缓和减少肝脏失代偿 肝硬化 HCC及其并发症的发生 从而改善生活质量和延长存活时间 慢性乙型肝炎治疗抗病毒 免疫调节 抗炎和抗氧化 抗纤维化和对症治疗 抗病毒治疗是关键 只要有适应证 且条件允许 就应进行规范的抗病毒治疗 干扰素 直接抗病毒作用和免疫调节作用清除病毒 我国已批准普通IFN 2 2b和1b 和聚乙二醇干扰素 2 和2b 用于治疗慢性乙型肝炎 HBV基因型与疾病进展和干扰素 治疗效果有关 与C基因型感染者相比 B基因型感染者较早出现HBeAg血清学转换 较少进展为慢性肝炎 肝硬化和原发性肝细胞癌 HBeAg阳性患者对干扰素 治疗的应答率 B基因型高于C基因型 A基因型患者高于D基因型 治疗 治疗 核苷 酸 类药物 竞争性抑制HBVDNA聚合酶 参与新的HBVDNA链合成过程中 终止新链合成 目前已应用于临床的抗HBV核苷 酸 类药物有3类 我国已上市4种 治疗 耐药是核苷酸类药物的共性耐药检测的意义 治疗前检测 有助于临床判断用药是否有效 治疗中每3 6个月检测 有助于观察疗效 及时调整用药 EASLClinicalPracticeGuidelines ManagementofchronichepatitisB EuropeanAssociationfortheStudyoftheLiver JHepatol 2009 50 227 242 HBV基因分型和耐药突变基因检测产品介绍 乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测试剂盒 PCR 反向点杂交法 国食药监械 准 字2011第3401179号 产品用途 在抗病毒治疗前和治疗中对血清 血浆中的HBV进行基因分型和耐药突变基因检测 区分中国和其他亚洲国家常见的HBV B C D基因型检测HBV3类抗病毒药物5个热点突变位点的6种突变类型 HBV耐药突变基因检测的临床意义 1 抗病毒药物治疗前的药物选择在慢性乙肝患者抗病毒药物治疗前 进行耐药突变基因检测 可以指导临床医生合理选择抗病毒药物 真正实现个体化诊治 2 抗病毒药物治疗中的药效监测在慢性乙肝患者抗病毒药物治疗过程中 进行耐药突变基因检测 可以监测抗病毒药物治疗效果并及时调整治疗方案 HBV基因分型的临床意义 1 预测疾病进展与C基因型感染者相比 B基因型感染者较早出现HBeAg血清学转换 较少进展为慢性肝炎 肝硬化和原发性肝细胞癌 2 治疗方案的选择HBeAg阳性患者对干扰素 治疗的应答率 B基因型高于C基因型 A基因型患者高于D基因型3 流行病学调查研究 1 准确性 检测105例临床慢性HBV感染阳性样本 结果与测序比较显示为相同的基因型和耐药突变类型 准确率为100 2 特异性 检测50例临床HBV阴性样本结果全部为阴性 检测非HBV感染性病原体DNA 包括C型肝炎病毒 HCV 乙型脑炎病毒 梅毒螺旋体和HIV 结果均为阴性 3 灵敏度 能稳定检测血清HBV的最低检出限为1 0 103IU mL 4 精密度 检测2 0 103IU mL的血清HBV 批内和批间的一致性好 5 稳定性 产品有效期为6个月 在有效期内产品性能稳定 产品性能指标 产品使用 产品操作流程 产品使用 HBV膜条探针阵列图 rt reversetranscriptase 逆转录酶 以逆转录酶编码氨基酸的顺序命名各检测位点 如 rt180L表示逆转录酶编码氨基酸第180位为亮氨酸 CC为显色控制点 试验成立的条件显色控制点CC正常显色 阳性质控品正常显色同时阴性质控品除CC外其他所有阵列位点不显色 结果判读根据显色 蓝色斑点 出现的阵列位点直接判读HBV的基因型和耐药突变类型 示例 产品使用 产品使用 结果判读示例 交叉耐药突变与核苷类似物药物的关系表 注释 耐药水平分高 中 低三级 以体外实验IC50的变化倍数计算 变化倍数是相比较于野生株而言 IC50指 最大药物抑制浓度的一半 低 IC50 5 中 IC50为5 20 高 IC50 20 MarcChany T JakeLiang DrugtargetsandmolecularmechanismsofdrugresistanceinchronichepatitisB Gastroenterology 2007 132 1574 1585 产品使用 适用人群及科室 适用人群 慢性乙肝患者的用药指导及疗效监测科室 检验科 感染科 消化内科 肝病科等使用原则 慢性乙肝患者抗病毒药物治疗前进行检测 确定HBV基因型和是否发生耐药突变 指导选择敏感的治疗药物 在抗病毒治疗过程中建议3 6个月进行一次检测 实时监控耐药突变的发生 检测后的处理 慢性乙型肝炎防治指南 2010年版 对于接受拉米夫定治疗的患者 一旦检出基因型耐药或HBVDNA开始升高时就加用阿德福韦酯联合治疗 抑制病毒更快 耐