豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2，4-滴、赤霉素、萘乙酸残留量的测定

ICS67040备案号海南省地方标准DBXX/XX20XX豆芽中4氯苯氧乙酸钠、6苄基腺嘌呤、2，4滴、赤霉素、萘乙酸残留量的测定液相色谱质谱联用法DETERMINATIONOF4CHLORPHENOXYACETICSODIUM,6BENZYLAMINOPURINE,2,4D,GIBBERELLICACIDAND1NAPHTHYLACETICACIDINBEANSPROUTLCMSMSMETHOD（征求意见稿）发布实施海南省卫生和计划生育委员会发布DBI前言本标准按照GB/T112009给出的规则起草。本标准由海南省卫生和计划生育委员会提出。本标准由海南省卫生和计划生育委员会会归口。本标准起草单位农业部热带农产品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人刘春华、李春丽、尹桂豪、阳辛凤、乐渊、张群、吴南村、万瑶、黎舒怀、吴小芳1豆芽中4氯苯氧乙酸钠、6苄基腺嘌呤、2，4滴、赤霉素、萘乙酸残留量的测定液相色谱质谱联用法1范围本标准规定了豆芽中的4氯苯氧乙酸钠、6苄基腺嘌呤、2，4滴、赤霉素、萘乙酸的液相色谱质谱联用测定方法。本标准适用于豆芽中的4氯苯氧乙酸钠、6苄基腺嘌呤、2，4滴、赤霉素、萘乙酸的检测。本标准4氯苯氧乙酸钠、6苄基腺嘌呤、2，4滴、赤霉素、萘乙酸残留的方法定量限均为1000G/KG。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB2763食品中农药最残留限量标准GB/T63791测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分总则与定义（GB/T637912004，ISO572511994，IDT）GB/T63792测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T637922004，ISO572521994，IDT）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。GB/T8855新鲜水果和蔬菜的取样方法（GB/T88552008，ISO8741980，IDT）SN/T3592实验室化学药品和样品处理的标准指南3原理试样用01甲酸乙腈超声提取，液相色谱质谱联用法测定，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认的色谱纯试剂和GB/T6682中规定的一级水。41甲醇。42乙腈。43甲酸44氯化钠分析纯，140烘烤4H。45滤膜，孔径022M，有机相。46提取液01甲酸乙腈，1000ML乙腈加入1ML甲酸混匀。47农药标准品4714氯苯氧乙酸标准物质（4CHLOROPHENOXYACETICACID）C8H7CLO3，CAS122883,纯度990。4726苄基腺嘌呤标准物质（6BENZYLAMINOPURINE）C12H11N5，CAS1214397,纯度2990。473赤霉素标准物质（GIBBERELLICACID）C19H22O6，CAS77065纯度980。4742,4滴（2,4D）标准物质C8H6CL2O3，CAS94757,纯度990。475萘乙酸标准物质（1NAPHTHYLACETICACID）C12H10O2，CAS86873,纯度980。48农药标准溶液配制481单一农药标准储备液分别准确称取一定量（精确至01MG）4氯苯氧乙酸钠、6苄基腺嘌呤、2，4滴、赤霉素、萘乙酸标准品，用甲醇溶解，逐一配制成1000MG/L的单一农药标准储备液，贮于18以下冰箱中，有效期6个月。482混合农药标准储备液逐一吸取一定体积的单个储备液分别注入同一容量瓶中，用乙腈稀释至刻度配制成100MG/L混合农药标准储备溶液，贮于18以下冰箱中，有效期3个月。483基质混合标准工作液吸取一定体积的4氯苯氧乙酸钠、6苄基腺嘌呤、2，4滴、赤霉素、萘乙酸混合标准储备液，用空白样品基质溶液配制成1000G/L、2000G/L、5000G/L、1000G/L、2000G/L和5000G/L浓度的基质混合标准工作液，贮于4以下冰箱中，有效期1周。5仪器与设备51液相色谱串联质谱仪配有电喷雾离子源（ESI）。52超声仪。53涡旋混合器。54电子天平，感量01MG和001G。55离心机。56食品加工器。6分析步骤61试样制备按GB/T8855抽取样品，按SN/T3592和GB2763附录A中规定的方法处理样品。经缩分后，将其切碎，充分混匀放入食品加工器粉碎，制成试样，标明标记，放入分装容器中于18下保存。备用。62试样前处理过程621提取称取试样10G精确至001G于50ML聚四氟乙烯离心管中，加入100ML提取液后，超声10MIN，提取液转移到装有1G3G氯化钠的另外一支带滤纸的50ML聚四氟乙烯离心管中，剧烈震荡2MIN，在室温下静置30MIN，使乙腈相和水相分层。取1ML上清液高速（10000RPM/MIN）离心10MIN，过022M滤膜，待测。63液相色谱质谱联用测定631液相色谱和质谱参考条件A色谱柱C18柱，100MM21MM，17M；3B流动相A为含1MMOL/L乙酸铵01甲酸水溶液；B为甲醇；（梯度洗脱条件见表1）C柱温35；D进样体积5L；E离子源类型ESI；F扫描方式正、负离子扫描；G检测方式多反应监测；H毛细管电压28KV；I离子源温度110；J去溶剂气温度350；K去溶剂气流量900L/HR；L锥孔反吹气流量50L/HR；M碰撞气（HE）流速021ML/MIN；N监测离子对、碰撞气能量和去簇电压见表A1。表1梯度洗脱条件时间（MIN）流速（ML/MIN）流动相A流动相B0000259010060025554520002540603500253070360025554537002590105000259010632定性测定在相同条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰保留时间与标准品相一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致（相对丰度50，允许20偏差；相对丰度2050，允许25偏差；相对丰度1020，允许30偏差；相对丰度10，允许50偏差），即可判断为检出。633定量测定采用外标法标准曲线法定量测定，为减少基质对定量测定的影响，定量应采用基质混合标准溶液绘制标准曲线，并且保证所测样品中农药的响应值均在仪器的线性范围内。4氯苯氧乙酸钠、6苄基腺嘌呤、2，4滴、赤霉素、萘乙酸多反应监测（MRM）色谱图参见图B1。634平行试验按以上步骤对同一试样进行平行试验。635空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。7结果计算采用标准曲线法定量，结果按公式（1）计算；1231MVCXII4式中XI试样中被测组分含量，单位为毫克每千克（G/KG）表示；CI标准溶液中各组分的质量浓度，单位为毫克每升（G/L）；V1提取溶液总体积，单位为毫升（ML）；V2吸取出用于检测用的提取溶液的体积，单位为毫升（ML）；V3试样溶液定容体积，单位为毫升（ML）；M试样的质量，单位为克（G）。计算结果保留两位有效数字，当结果大于1G/KG时保留三位有效数字。8精密度按GB/T63792的规定确定精密度，获得重复性和再现性的值以95的可信度来计算，精密度数据参见表C1。5附录A（资料性附录）表A15种农药监测离子对、碰撞气能量、去簇电压和保留时间序号中文名称英文名称ESI保留时间MIN定量离子M/Z定性离子M/Z去簇电压V碰撞能量V14氯苯氧乙酸4CHLORPHENOXYACETICESI2521850/12711850/1271；1870/12902015；1526苄基腺嘌呤6BENZYLAMINOPURINEESI2912263/14812263/1481；2263/9122036；213赤霉素GIBBERELLICACIDESI2023639/32923639/3292；3639/23912020；1542，4滴2,4DESI2072190/16102190/1610；2209/162520；1610；185萘乙酸1NAPHTHYLACETICACIDESI2721850/14111850/14111010注释带为定量离子4氯苯氧乙酸钠以4氯苯氧乙酸表示附录B（资料性附录）图B1标准物质（浓度100NG/ML）多反应监测（MRM）色谱图14氯苯氧乙酸26苄基腺嘌呤（4CHLORPHENOXYACETIC）（6BENZYLAMINOPURINE）63赤霉素42，4滴（GIBBERELLICACID）（2,4D）5萘乙酸（1NAPHTHYLACETICACID）7附录C（资料性附录）表C15种农药精密度数据表（绿豆芽中）单位为微克每千克序号农药名称质量浓度G/KG重复性限R重现性限R质量浓度G/KG重复性限R重现性限R质量浓度G/KG重复性限R重现性限R14氯苯氧乙酸10000009000820000002000210000002000726苄基腺嘌呤1000001000092000000200021000000600063赤霉素10000001000120000001000110000005000642，4滴1000000100012000000100011000000100025萘乙酸100000010001200000010002100000060007表C25种农药精密度数据表（黄豆芽中）单位为微克每千克序号农药名称质量浓度G/KG重复性限R重现性限R质量浓度G/KG重复性限R重现性限R质量浓度G/KG重复性限R重现性限R14氯苯氧乙酸10000002000120000002000210000006001026苄基腺嘌呤1000000100012000000200021000000600063赤霉素10000001000120000002000210000008000842，4滴1000000100012000000200021000000600065萘乙酸100000010001200000020002100000070008表C15种农药精密度数据表（黑豆芽中）单位为微克每千克序号农药名称质量浓度G/KG重复性限R重现性限R质量浓度G/KG重复性限R重现性限R质量浓