肿瘤的生物治疗.ppt

肿瘤的生物治疗Biotherapyoftumor 中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所张叔人 一 肿瘤生物治疗发展概况二 肿瘤的免疫治疗三 基因治疗四 抗血管生成五 增殖病毒六 抗端粒酶治疗肿瘤七 生物治疗的展望 早期的肿瘤免疫治疗多采用非特异性免疫增强剂 如 卡介苗 BacilliCalmette Gu rin BCG 和小棒状杆菌 C Parvum 菌苗 膀胱癌八十年代初期 Rosenberg应用淋巴因子活化的杀伤细胞 lymphokineactivatedkiller 过继免疫治疗晚期癌症病人获得明显疗效 再次掀起免疫治疗的高潮 TIL CIK九十年代初 比利时ThierryBoon首先应用T细胞克隆的方法找到了人类肿瘤抗原 SEREX法发现了一批肿瘤抗原 DC 肿瘤抗原肽 生物导弹肿瘤的基因治疗 针对阻止肿瘤血管生成治疗肿瘤 一 肿瘤生物治疗发展概况 近几年 随着分子生物学的发展 在肿瘤抗原 抗原递呈和T细胞识别等方面均有了突破性进展 对于肿瘤的免疫效应机制 以及肿瘤逃脱免疫的机理有了深入的认识 众多肿瘤免疫疗法犹如雨后春笋应运而生 肿瘤免疫治疗与手术 放疗和化疗三大常规疗法有明显的互补性 在控制肿瘤的复发和转移方面展示了良好前景 生物治疗 应用组织 细胞 蛋白质 多糖 基因 微生物等生物制剂治疗疾病 肿瘤的生物疗法的策略 调节强化抗肿瘤免疫 直接杀伤或诱导肿瘤凋亡 抑制肿瘤细胞增值 促肿瘤分化 抗肿瘤血管生成 策略 去除免疫抑制 提高免疫原性 增强宿主免疫细胞的反应性以及免疫导向 1 过继免疫治疗 adoptiveimmunotherapy 2 肿瘤疫苗3 基于抗体的免疫治疗4 细胞因子治疗5 其他生物反应调节剂6 对抗免疫抑制7 配体导向治疗 二 肿瘤的免疫治疗 1 过继免疫治疗 adoptiveimmunotherapy 1 LAK LymphokineActivatedKiller 细胞 2 其他非MHC限制性过继免疫治疗粘附MNCA LAK 抗CD3CD3AKLAK MNC IL 2 抗CD3 IFN IL 1CIK MEP TCR V 9 V 2 TMonoethylpospate 3 肿瘤浸润性淋巴细胞 Tumor infiltratinglymphocyte TIL 4 TAK IL 2 抗CD3 Tu Ag TIL和LAK细胞体内抗肿瘤效力的比较 LAK CD3AK CIK细胞活性及增殖数量 李殿俊 NK LAK TIL之间的区别 NationalBiotherapyStudyGroupinterleukin 2Trials CompleteandPartialResponseAccordingtoTreatmentRegimenandTypeofCancer HLA A2 patientswithmetastaticmelanomareceivedimmunodepletingchemotherapywithcyclophosphamideandfludarabinefor7daysbeforetheadoptivetransferofhighlyselectedtumor reactiveTcellsandhigh doseinterleukin 2 IL 2 therapyPR 6 13 46 MixedRespose 4 13 30 patient9patient10 StevenA RosenbergSCIENCE2002 298 850 EngineeredTcellsadoptiveimmunotherapyofcancerT body Fig 4 SchemeforpreparationofdesignerTcellsforpatienttreatment Peripheralbloodmononuclearcellsareharvestedfromthepatient andTcellsareactivatedbyanti CD3antibodytreatmentfor2 3days Subsequently TcellsareinfectedwithIgTCRretroviralsupernatanttoexpresstheIgTCRtransgene AutologouschimericTcellsareexpandedexvivoandinfusedbackintothepatient whoisthenobservedforantitumoreffect 2 肿瘤疫苗 1 细胞瘤苗 肿瘤 DC 2 亚细胞瘤苗 exosome 外泌小体 3 分子瘤苗 蛋白 多肽 多糖 糖脂瘤苗 4 基因瘤苗 DNA RNA 肿瘤疫苗作用的检测Invivo DTHInvitro 监测抗原表位特异性CD8 T反应的方法 敏感性评价直接法HLAtetramers1 5000不能显示T细胞对刺激的反应胞内细胞因子表达1 5000不能鉴定表位特异性T细胞ELISPOT1 10000RT PCR1 50000间接法有限稀释法 1 10000增殖试验缺少特异性 ELISPOTassay HLAtetramers Tetramerassay 1 细胞瘤苗 细菌或病毒佐剂瘤苗 BCG NDV转基因细胞瘤苗 细胞因子 IL 2 GM CSF MHC classI II B7 共刺激分子 B7 基于DC的瘤苗 负载多肽 导入肿瘤抗原基因红细胞瘤苗 RBC 唾液酸酶细胞融合瘤苗 肿瘤细胞 B细胞 DC DCVaccinePreparation InVivoTumorLysatePulsedDC StudySchemaforDendriticCellVaccination Day0142856 Tumorlysate KLHpulsedDC 1x106 107 108id Leukapheresis Immuneresponse PatientCharacteristics 14evaluablepatientsMelanoma n 11 Colorectalcancer n 2 Neuroblastoma n 1 Cohorts106 n 5 107 n 6 108 n 3 TumorResponses 2 14patientswithresponse 1partial 1minor bothinmelanomapts 4 14patientsstableafter3vaccines butprogressedafter3more8 14progressedafter3vaccines 增强DC瘤苗的作用 与其他因子协同应用 IL 2 SLC 应用抗原抗体复合物导入协同因子基因4 加入免疫佐剂 2 亚细胞瘤苗 exosome 外泌小体 近期发现DC分泌的exosomes 外泌小体 属于亚细胞结构 具有多种抗原呈递分子和T细胞共刺激分子 肿瘤抗原肽刺激的DC产生的exosomes能够呈递肿瘤抗原 活化CTL 抑制和根除已建立的小鼠肿瘤 所以exosomes瘤苗极具发展潜力 3 分子瘤苗 蛋白 多肽 提取 酸洗脱多肽 合成肿瘤抗原多肽 基因重组蛋白HSP TAP抗idiotype抗体异种蛋白 VEGF PAP 多糖 糖脂 神经节苷脂GM2 GD2 GD3 4 基因瘤苗DNACEA 痘苗V HPV rbB2 neuRNAmRNA 基因重组CEA痘苗病毒载体瘤苗 免疫球蛋白的结构 Immunoglobulin Ig 3 基于抗体的免疫治疗 嵌合抗体 chimericantibody 基因工程抗体 降低HAMA反应 重构抗体 reshapedAb 改型抗体 reshapingAb CDR移植抗体 CDRgraftingAb 人源化抗体 humanizedAb 人源抗体 1 噬菌体库抗体 phageAb 2 人Ig基因组小鼠 XenoMouse 基因敲除法可灭活小鼠胚胎干细胞关键的抗体可变区序列使B细胞不能发育和产生鼠源抗体 如将人Ig全套胚系基因转到此干细胞染色体中 建立转基因动物 经免疫后产生人源抗体 结合杂交瘤技术即可制备人源单抗 人源免疫球蛋白胚系基因大且复杂 有数百个基因组成 主要分布于14号 H 2号 k 22号 l 染色体上 另外 第15 16号染色体上也可检测出人的VH D区片段很难将全部基因引入小鼠基因组中 基因工程抗体的种类和特征 1 激活效应细胞 2 idiotype 抗抗体瘤苗 3 抗肿瘤相关抗原抗体 体内应用 4 抗体导向治疗 基于抗体的临床免疫治疗 1 直接激活效应细胞 TIL 肿瘤组织中分离出的淋巴细胞 IL 2 抗CD3CD3AK 外周血淋巴细胞 IL 2 抗CD3CIK 外周血淋巴细胞 IL 2 抗CD3 IFN 2 idiotype 抗抗体瘤苗 TumorAg Ab1 Ab2 Ab3 anti idiotypeAb CTL idiotypeAb anti anti idiotypeAb Ab1 kenneth foon 神经节苷脂GD2抗独特型抗体 anti idiotypeantibodymimickingdisialogangliosideGD2 TriGem47例晚期黑色素瘤1 8mgTriGem QS 21佐剂 100mg weekx4 100mg month 结果 40 47产生anti anti idiotype Ab3 Ab3 Ab11例CR 12例稳定14 27个月 平均18个月 3 抗肿瘤相关抗原抗体体内直接应用抗肿瘤 Trustuzumab Herceptin anti HER2TB 474tumorxenograft 10mg kgip2times wx4 抗体为导向载体 毒素 药物 放射性核素 酶为弹头优点 使抗肿瘤效应分子具有靶向性 提高肿瘤局部作用 提高疗效 减少效应分子剂量 降低毒副作用 4 抗体导向治疗 生物导弹 毒素分类 双链毒素 Abrin Ricin Modeccin 植物毒素Viscumin单链毒素 PAP SAP Lonin Monoridin 内化毒素Triuchosanthin细菌毒素 Diptheriatoxin DT Pseudomonasexotoxin PE 膜活性毒素 staphylococcal hemolysin HL streptolysinO E coli hemolysin pneumolysin aerolysin perferins eqinatoxins 生物毒素 放射性核素 放射性核素有三种 射线 211At 砹 212Bi 硼 射线 90Y 钇 32P 磷 射线 131I 碘 99Tc 锝 111In 铟 优势 对肿瘤相关抗原阳性及阴性细胞均有杀伤作用 通常核素有50个或更多的细胞杀伤半径 不需要的内化 3 抗体结合放射性同位素 Half life131I8d124I4 2d125I60 2d90Y钇64h111Inh 用131I G250 人鼠嵌合型 治疗肾转移癌 Knox 90Y 钇 抗CD20对非何杰金氏淋巴瘤有效率72 治愈率33 酶 前体药物治疗 antibodydirectedenzymeproducttherapy ADEPT 将酶导向输送到靶细胞 再注入前药 非活化型 酶在靶细胞部位将前药转化为活化型药 提高抗肿瘤疗效 又能降低药物的毒素作用 用于ADEPT系统中的活化酶和前药 4 细胞因子治疗 干扰素 IFN 白细胞介素 IL 肿瘤坏死因子 TNF 血细胞生成因子 NationalBiotherapyStudyGroupinterleukin 2Trials TumorResponseAccordingtoTypeofCancer 白细胞介素12 IL 12 又名cytotoxiclymphocytematurationfactor CLMF naturalkillercellstimulatoryfactor NKSF IL 12由p35和p40两个亚基组成 主要由M 和DC分泌产生 促进活化T细胞和NK细胞的增殖 增强两者的细胞毒效应 增强IFN 产生 抑制血管生成 IL 12临床研究 I期美国遗传研究所主持安全性和耐受性II期另一研究组 肾癌17人中15人出现严重副作用 胃肠道出血 肝毒性和贫血 2人死亡 动物实验表明 第一次单计量注射两周后再多次给药可预防毒性反应 SC代替iv 减少用药次数 未出现毒性反应 改进 IL 12基因 自体纤维母细胞 扩增 注入体内 或与灭活的瘤细胞混合 作为瘤苗 CD4 CD8 细胞浸润 出现大量并指状细胞 对晚期肿瘤有效 临床IL 12基因治疗方案 Interleukin12 IL 12 ThesinglemostsignificantantitumorcytokineevertestedAmazingsimilaritiestoendotoxinintumorrejectionEssentialcytokineforIFN gproductionandTh1development 32 dayMCA207beforetreatment SixweekafterCy IL 12 TherejectioninducedbyIL 12 Cy IL 12isassociatedwithastrongTcellresponse CD4 CD8 before after Day 14experimentallungmetastases AntitumoreffectsofCy IL 12inMCA207i p and