生物实验报告-ABO血型鉴定

生物实验报告生物实验报告 姓名姓名 班级班级 日期日期 同组者同组者 实验序号实验序号 实验题目实验题目 ABO 血型鉴定 实验目的实验目的 1 掌握血涂片的制作 了解各种血细胞的结构特点 2 掌握 ABO 血型的鉴定方法 实验原理实验原理 人类的 ABO 血型遗传是由基因决定的 很多時间 一个基因只包含两个等位基因 但是 控制血型的 基因 I 则有三个不同等位基因 即同一时间内 一 个位点可以有其中任何两个等位基因出现 等位基因 A 使红血球产生抗原 A 等位基因 B 使红血球产生抗原 B 等位基因 O 使红血球不产生抗原 等位基因 A 和 B 为等显性 O 对 A 和 B 均为隐性 血型鉴定的原理是根据红细胞上有或无 抗 原和 抗原或 AB 抗原 将血型分为 型 型 型及 型四种 本实验采用红细胞凝集试验 用已知抗 和抗 单克隆抗体来测定红细胞上有无 相应的 抗原或 抗原或 AB 抗原来确定 ABO 血型 抗原抗体反应 在 ABO 血型系统中 红细胞膜上 抗原分 A 和 B 两种抗原 而血清抗体分抗 A 和抗 B 两种抗体 A 抗原加抗 A 单克隆抗体或 B 抗原加抗 B 单克隆抗体 则产生凝集现象 从而测知受试者红 细胞膜上有无 A 或 和 B 抗原 判断血型 抗体在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭桥形成 肉眼可见的颗粒状凝集团块 实验对象实验对象 血液 实验器材实验器材 受检者血液 抗 A 抗 B 单克隆抗体 载玻片 脱脂棉 针 酒精棉球 生物显微镜 冰 箱等 实验方法及步骤实验方法及步骤 1 血涂片的制作血涂片的制作 用酒精棉球擦拭消毒指尖 用采血针刺破指尖或耳垂 从 采血针眼处挤出绿豆大小血滴 用清洁玻片面的一端轻轻 接触血滴 使血滴附于玻片面上 注意勿触及皮肤 否则 血在玻片上就不能成滴 以左手拿该片的两端 迅速用右手拿住另一载玻片的一端 在左手载玻片上由前向后接触血滴 使两载玻片约成 45 角 轻轻移动 使血滴成一直线 然后由前向后推为一均 匀的薄片 涂片在空气中干燥后置于染色架上 滴加瑞氏染色液 使 涂片被染色液覆盖 染 1 分钟后 再加等量的缓冲液于染色液上 浸染约 5 8 分钟此时涂片表面呈现一层古铜色 用蒸馏水迅速冲洗 见涂片呈粉红色后 自然晾干 2 血细胞观察血细胞观察 制作良好的血涂片厚薄适宜 血膜分布均匀 呈粉红色 选一厚薄适宜部位置显微镜下观察 先用低倍镜观察全片 了 解涂片染色 细胞分布情况 再用高倍镜观察 红细胞红细胞 数量最多 体积小而圆 均匀分布 呈红色的圆 盘状 边缘厚 着色较深 中央薄 着色较浅 无细胞核 细胞器 胞质内充满血红蛋白 白细胞白细胞 白细胞数量较红细胞数量少 但胞体大 细胞核 明显 极易与红细胞区别开 嗜中性粒细胞嗜中性粒细胞 是白细胞中较多的一种 约占白细胞总数 50 70 体积比红细胞大 主要的特征是胞质中的特殊颗 粒细小 分布均匀 着淡紫红色 胞核着深紫红色 一般 分 3 5 叶 叶间以染色质丝相连 核分叶的多少与该细 胞年龄有关 如核为杆状 则为嗜中性粒细胞的幼稚型 嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞 比中性粒细胞略大 数量少 约占 7 以 下 核常分两叶 着紫蓝色 主要特点是胞质内充满粗大 圆形的颗粒 色鲜红或桔红 嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞 数量很少 约占 1 以下 在一般血涂片 上不易找到 体积比上述 2 种白细胞稍小 胞质中分散着 许多大小不一的深紫蓝色颗粒 胞核形状不定 圆形或分叶 也染成紫色 但染色略浅 一般都被颗粒遮盖 形状不清 淋巴细胞淋巴细胞 数量较多 约占 20 40 可见中 小型 淋 巴细胞 其中小淋巴细胞最多 略大于红细胞 核大而圆 几乎占据整个细胞 染成深蓝紫色 胞质极少 仅在核的 一侧出现一线状天蓝色或淡蓝色的胞质 中淋巴细胞比红 细胞大 胞质较小淋巴细胞的稍多 着色较浅 核圆形或 卵圆形 位于细胞中部 也染成深蓝紫色 单核细胞单核细胞 数量少 约占 2 8 是细胞中体积最大的一 种 胞核呈肾形 马蹄形 常在细胞一侧 着色比淋巴细 胞浅 血小板血小板 为形状不规则的细胞小体 其周围部分为浅蓝色 中央有细小的紫色颗粒 常聚集成群 分布于红细胞之间 高倍镜下一般只能看到成堆的紫色颗粒 在油镜下才能看 到颗粒周围的浅色胞质部分 3 血型鉴定血型鉴定 标记凹载玻片 左上角写 A 右上角写 B 分别吸取抗 A 抗 B 单克隆抗体各 1 滴滴于双凹载玻片左 端和右端 采血针刺破左手无名指尖或耳垂 待血液出来后 用 2 支 毛细滴管吸取或消毒后的牙签挑取血液 分别加入到玻片 左 右两侧的单克隆抗体试剂内 并用牙签搅拌 使单克 隆抗体试剂与血液混匀 切勿混用毛细滴管和牙签 然后置室温下 5min 后观察结果 肉眼观察 如果外观略呈花边状或锯齿状 看上去有沉淀 则多为凝集 如果血滴呈均匀状态 边缘整齐 则多为不 凝集 进一步在低倍镜下观察 在低倍镜下 如果观察到红细胞 凝集成团 或尚有少数游离细胞 则为凝集现象 如果红 细胞均为游离状态 则为不凝集 根据镜下所见有无凝集 现象判定血型 判断血型 根据被试者红细胞是否被 A B 型标准血清所 凝集 判断其血型 注意事项 注意事项 玻片 试管都要标记 A 及 B 标准血清 抗 A 抗 B 单克隆抗体绝对不能相混 不要依靠用染料颜色标记血清 工 作中要形成自己的习惯 所用玻片 试管实验前必须清洗干净 以免出现假凝集现象 红细胞悬液滴管头不能接触标准血清液面 竹签一端去混匀 一侧就不能去接触另一侧 一般先加血清 然后再加红细胞悬液 便于核实是否漏加血 清 离心时间 速度严格要求 以防假阳性或假阴性结果 要在光亮的背景下观察凝集 可使用光镜检查小的凝集 同时