mm_fs_cng_0386 植物油脂检验磷脂测定法.doc

此文档收集于网络，如有侵权，请联系网站删除天马行空官方博客：/tmxk_docin ；QQ:1318241189；QQ群：175569632MM_FS_CNG_0386植物油脂 磷脂 分光光度法MM_FS_CNG_0386植物油脂检验磷脂测定法1.适用范围本方法适用于商品植物油脂中磷脂的测定。2.原理概要油脂中磷脂即由甘油、脂肪酸、磷酸和氨基醇等所组成的复杂的化合物。3.钼蓝比色法3.1.主要试剂和仪器3.1.1.主要试剂50氢氧化钾溶液；盐酸、硫酸、氧化锌、滤纸；0.015硫酸联氨溶液；2.5钼酸钠稀硫酸溶液：量取140ml硫酸注入300ml水中，摇匀，冷却至室温，加入12.5g钼酸钠，溶解后加水至500ml，摇匀，静置24h备用；磷标准溶液：称取无水的磷酸二氢钾0.4391g溶于1000ml水中，作为1号液，含磷0.1mgml，吸取1号液10ml，加水稀释至100ml，含磷0.01mgml，作为2号液，比色用。3.1.2.仪器瓷坩埚或石英坩埚；分光光度计或带塞的50ml比色管；移液管：5、10ml；电炉、高温炉；容量瓶：100、500、1000ml；表面皿、烧杯、量筒；恒温水浴锅；漏斗、坩埚钳、试剂瓶等。3.2.样品制备用坩埚称取试样约10g（准确至0.001g），加氧化锌0.5g，先在电炉上加热炭化，然后送入550600的高温炉中灼烧至灰化（白色），灼烧时间约2h，取出坩埚冷却至室温，用热盐酸（11）10ml溶解灰分，并加热微沸5min，将溶解液过滤注入100ml容量瓶中，用热水冲洗坩埚和滤纸，待滤液冷却至室温后，用50氢氧化钾溶液中和至出现混浊，缓慢滴加盐酸使氧化锌沉淀全部溶解后，再滴2滴，最后用水稀释至刻度，摇匀。3.3.过程简述3.3.1.绘制标准曲线：取5只50ml比色管，编成1，2，4，6，8五个号码，按号码顺序分别注入磷标准2号液1，2，4，6，8ml，再按顺序分别加水9，8，6，4，2ml。接着向5只管内各加0.015硫酸联氨溶液8.0ml；各加钼酸钠稀硫酸溶液2.0ml，加塞、摇匀。去塞，将5只管置于正在沸腾的水浴中加热10min，取出冷却至室温，用水稀释至50ml，充分摇匀，经10min后，用分光光度计在波长650nm下，用3cm液槽，用水调整零点，分别测定消化值。以消化值为纵坐标，以磷量（0.01、0.02、0.04、0.06、0.08mg）为横坐标绘制标准曲线。3.3.2.比色：用移液管吸取被测液10ml注入50ml比色管中，加入0.015硫酸联氨8.0ml，加2.0ml钼酸钠稀硫酸溶液，加塞，摇匀。去塞，将比色管置于正在沸腾的水浴中加热10min，取出冷却至室温，用水稀释至50ml，充分摇匀，经10min后，用分光光度计在波长650nm下，用3cm液槽，用水调整零点，测定消光值。3.4.结果计算根据被测液的消光值，从标准曲线查得磷量（P），按公式（1）计算磷脂含量：磷脂（）PV226.31100（1）V1W1000式中：P标准曲线查得的磷量，mg；V2样品灰化后稀释的体积，ml；V1比色时所取的被测液体积，ml；26.31每毫克磷相当于磷脂的毫克数；W试样重量，g。3.5.允许差双试验结果允许差不超过0.04，求其平均数，即为测定结果。测定结果取小数点后第二位。4.重量法4.1.主要试剂和仪器4.1.1.主要试剂丙酮。4.1.2.仪器玻璃漏斗、漏斗架；烧杯：100ml；锥形瓶、滤纸等。4.2.过程简述取混匀的样品约100ml，加热约90时进行过滤。用烧杯称取试样25g，加热至80，加水22.5ml，充分搅拌使之水化，在室温下静置过夜，或进行离心沉淀，倾出上层清液，用已知恒重的滤纸（或用抽气装置抽滤）进行过滤，待滤液全部滤出后，用冷的丙酮把杯内残留的沉淀冲洗入滤纸中，继续用丙酮洗涤滤纸和沉淀，洗至无油迹为止。待滤纸和沉淀上的丙酮挥尽后，送入105烘箱中烘至恒重。4.3.结果计算重量法测定磷脂含量按公式（2）计算：磷脂（）W1100（2）W式中：W1沉淀物重量，g