蛋白酶K市场初步分析.doc

此文档收集于网络，如有侵权，请联系网站删除蛋白酶K市场初步分析l 简介蛋白酶K，是以丝氨酸为活性中心的蛋白分解酶，分解蛋白质的活性较强。具有广泛的底物特异性，特别优先分解与疏水性氨基酸、含硫氨基酸、芳香族氨基酸的C末端邻接的酯键和肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广泛。作为生化试剂，蛋白酶K一般以冻干粉或者酶溶液两种形式提供产品。高端产品除了有较高的比活外还要求极高的纯度并通过多种纯度检验、底物专一性检验等分析，以满足高精度实验的要求。普通实验一般要求电泳纯和较高的蛋白水解活性。如果直接提供带有蛋白酶成分的粗溶液作为产品则一般价格较低，可用于比较粗放需求量又较大的实验中。l 应用蛋白酶K的应用主要在实验室，在生物学实验中应用广泛。例如应用于：（1） Particularly suitable for the proteolytic inactivation of nucleases during the isolation of DNA and RNA. 尤其适用于DNA、RNA 提取过程中抑制核酸酶； （2） Used to treat tissue sections to ensure efficient probe infiltration during in situ hybridization.用于原位杂交，处理组织碎片以保证高效的探针筛选；（3） Used for the determination of enzyme localization on membranes by modifying proteins and glycoproteins on cell surfaces. 通过修饰细胞膜上的蛋白质和糖蛋白以确定蛋白质在膜上的位置；（4） Used to remove cellular debris during the preparation of colony lifts, 准备菌落转移时除去细胞碎屑；（5） The enzyme also promotes cell lysis by activating a bacterial autolytic factor. 通过激活细菌自溶因子促进细胞溶解；（6） Preparation of DNase free and RNase free samples for RT-PCR, PFGE etc.为脉冲电场凝胶电泳、RT-PCR等准备无DNase、RNase的样品；（7） Useful for the isolation of mitochondria from tissue.有助于从组织中线粒体提取；（8） Digestion of proteins from brain tissue samples for prions in Transmissible Spongiform Encephalopathies (TSE) research.传染性海绵状脑病的研究中用于分解脑组织样品中的蛋白朊病毒；（9） Finger printing指纹印迹。l 用量以细菌中提取质粒DNA为例，一般用量约0.5mg蛋白酶K/mL样品（要求产品比活30U/mg）。l 成本生产蛋白酶K的成本主要包括三大块：菌种保存和培养、产品分离纯化和检测。菌种保存所需成本较小以人力成本为主，培养所需的成本主要为培养基和发酵设备，培养基主要原料为麦芽和奶粉价格低廉，发酵设备则根据生产规模需要选择，10L智能生物发酵罐价格约2.5万元；产品分离纯化方法目前仍在摸索，成本无法精确估算，可能采用的方法包括盐析、离子交换层析柱和分子筛，单套设备成本不超过0.5万元；检测包括活性检测（Folin试剂），纯度检测（AKTA purifier），酶量检测（卡马斯亮蓝染色法）和其它检测等，所用试剂均为常规生化试剂，且随着生产规模的扩大检测费用被均摊相对变小。目前阶段初步估计，本实验室每生产100mg蛋白酶K成本约￥80-150元（不计设备和人力成本）。方法成熟后成本还有下降空间。l 价格各大国际供应商报价比较：Sigma公司的产品报价最高，其高端产品报价在￥2347.02/100mg （中国代理价格￥2100/100mg）。其它公司产品以中端产品为主，如NEB公司报价￥1331/100mg， Amresco公司报价￥541.92/100mg（按照1美元=6.8310人民币换算），Roche公司报价￥711.8/100mg（按照1欧元=9.7711人民币换算）。当然sigma公司也有相应的中端产品，报价￥604.89/100mg。国内有众多生物公司代理销售以上国际知名厂商的产品，以中端产品为主，目前价格约在￥350-450元/100mg之间。1美国Sigma：/catalog/Lookup.do?N5=All&N3=mode+matchpartialmax&N4=proteinase+K&D7=0&D10=proteinase+K&N1=S_ID&ST=RS&N25=0&F=PR2英国New England Biolab (NEB)公司报价：/productdetail.aspx?leibie1=008&cpxh=2593德国Merck（默克）化工，中国代理价格：/Shop/Reagent/Merck/200605/323.html4美国Invitrogen，中国代理价格：5瑞士Roche（罗氏）：/servlet/RCProductDisplay?storeId=10201&catalogId=10201&langId=-3&countryId=de&forCountryId=de&productId=.1.76美国Amresco报价：/PROTEINASE-K-0706.cmsxl 产品研发和定位的建议直接从真菌中提取和基因重组后表达两条途径均值得尝试，从长远发展和大规模生产的角度看还是重组表达的方式更有优势。直接提取所需周期较长，以目前的水平一个完整周期约20天；如果基因重组成功，则生产周期可减少至3-4天。然而基因重组所需的研发周期较长，因而我们首先开发直接提取的方法。目前已直接从真菌中诱导得到蛋白水解活性的培养基，但提取纯化