肾脏纤维化检查正常值.doc

标本采集：空腹安静状态采血单独一管（促凝管）4ml-5ml参考值：1.血清2-MG（2微球蛋白） 0-3mg/L（0.8-2.0）是反映肾小球滤过功能的较好指标肾小球滤过率（GFR）及肾血流量降低，则血清2-MG升高。尿液2-MG（2微球蛋白）1、是反映近端小管受损的非常灵敏和特异性的指标；2、鉴别上下尿路感染：上尿路感染时，2-MG明显增高，而下尿路感染则正常。2.血清hsCRP（C反应蛋白(CRP) ）0-3mg/L是反应炎症的敏感指标3.血清Cys C （半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白C）肾移植术后肾功能的检测、监测化疗药物对肾功能的损害、诊断肾脏纤维化判断纤维化程度的一个重要指标1-14岁 0.51-0.95mg/L 14-50岁 男0.63-1.25mg/L 女0.54-1.15mg/L 50岁以上 0.60-1.55mg/L4.血清HA （血清透明质酸） 0-110ng/ml血清HA浓度的变化 ,对鉴别急、慢性肾病及对肾病综合征与单部位损害的部位和程度 ,反映肾脏的病情变化有重要意义 ,对肾脏疾病诊断具有重要意义5.血清LN（层粘连蛋白） 0-95ng/ml肝纤维化、肿瘤转移的最新指标6.血清PC（血清型前胶原） 0-90ng/ml联合检测血清型前胶元（）、透明质酸（）、层粘连蛋白（）三项指标升高与肝纤维组织增生呈同步性，显示出良好的正相关（）结论三项指标的联合检测可极大增加临床诊断7.血清C-（血清型胶原） 0-85 ng/ml8.血清TIMP-1（血清组织金属蛋白酶抑制物-1） 53-153pg/ml血清TIMP-1水平反映了慢性肝病肝内炎症和纤维化的一些重要特征，在目前情况下是一种较好的肝脏纤维化无创诊断和随访指标。肾小管三项，包括尿2-MG、尿NAG、尿GGT/尿Cr肾纤维化标记物至少包括ECM成分及其裂解物、ECM代谢相关的酶、纤维化相关细胞因子和其他相关检测等四大类。但实际上，目前尚无真正含义上的血清肾脏纤维化标记物，国内外研究较多的有以下几种，可用作肾脏纤维化的辅助诊断。1.血清2-MG2.血清hsCRP3.血清Cys C4.血清HA5.血清LN6.血清PC7.血清C-lV8.血清TIMP-1 另外，在阻断肾纤维化的过程中，TGF-，PDGF两项化验指标也是精确了解肾脏纤维化受损程度的重要指标。正常表达时能抑制炎症和细胞增生、调节细胞的生长、分化和免疫功能而起正面作用；PDGF能诱导系膜细胞增生(系膜细胞既可产生PDGF，又可被PDGF作用)和肾小管间质纤维化。血清组织金属蛋白酶抑制物-1（tissueinhibitors of metalloproteinases-I,TIMP-1)1.血清2-MG ，2.血清hsCRP，3.血清Cys C，4.血清HA，5.血清LN，6.血清PC，7.血清C-lV，8.血清TIMP-1 及TGF-（转化生长因子）、PDGF（血小板原性生长因子）、补体等相关检查。该几项检查是针对对肾脏纤维化进展程度的特异性检查项目，一般医疗机构尚未开展。显示患者仍有保守治疗的意义。血清：层粘连蛋白（LN） 型胶原（C） 甘胆酸（CG） 透明质酸（HA） 脯氨酸肽酶（PLD）血清型前胶元（）、透明质酸（）、层粘连蛋白（）人血清层粘蛋白（LN）ELISA定量检测1. 试剂：（包被板和标准品需-20保存）；其余4保存。 LN包被板(内有保护液，使用前洗涤2次，剩余-20保存！)8孔12 LN标准品：LNstandard (2000ng/ml) 1管 标准品稀释液：Standard diluents 1瓶 LN酶结合物： LNEnzyme tracer (1.1 ml) 1管 洗涤缓冲液：（10ml），用蒸馏水20倍稀释 1瓶 显色液A / 显色液B（6 ml） 各1瓶 终止液 1瓶 2.操作程序： 步骤内容 操 作 步 骤 条件、时间（试剂配制）按试剂组成说明操作 加样标准曲线H1A1加【标准品稀释液】 100ul，取【LN标准品】100ul 自H1B1依次倍比稀释。A1为空白孔（只含稀释液，不加酶！）。加10 u lLN酶结合物 充分混匀！ 37，45min 待测血清100ul 待测血清 （洗板）PBS（每孔加400ul，摔干）5次（TMB底物）显色液A 、显色液B各1滴（或各55ul），振荡混匀。注意：勿显色过重，最高标准品的OD值低于2.5为佳。 室温，510min（终止反应） 终止液50ul或1滴 20min内测定完毕 3.结果判断：酶标仪A450nm测定。酶标仪定量（设立程序）或电脑软件定量（公司提供软件）。定量范围：15.01000.0 ng/ml，小于15.0时按15.0报告。4.正常参考值：115.717.3ng/ml 5.注意事项：A 包被板在使用前在室温溶解，洗涤2次扣干洗液使用，剩余者于-20保存，下次直接使用。 B 为保证检测质量，标准品若不能在1月内使用完，请直接保存在-20，反复冻融对不影响实验结果。 C自用户收到试剂开始，酶结合物在4保存2月内质量稳定，使用周期长者可于-20分装保存。 6.临床意义：肝纤维化、肿瘤转移的最新指标层粘连蛋白（LN） o层粘连蛋白（laminin, LN）是细胞外间质（ECM）中的非胶原糖蛋白，广泛分布于基底膜的透明层，紧贴细胞基底部，与IV型胶原结合形成基底膜的骨架，影响细胞的粘附、运动，调节细胞的生长和分化，并与肝纤维化发生、肿瘤的浸润、转移等有关。肝纤维化时，LN基因过度表达，窦周间质细胞及胆管上皮细胞中的mRNA增加3倍左右，Disse间隙中LN含量增加10倍。因此血清LN含量是反应肝脏纤维组织增生的良好指标。此外，LN合成和沉积大大增加，形成特殊改变“肝窦毛细血管化”，与慢性肝病门脉高压发生有关。癌症转移首先要突破基底膜，因而LN与肿瘤浸润转移有关。 o正常人血清LN为115.717.3微克/毫升，慢肝（中度）140微克/毫升，肝硬化160微克/毫升。正常人血清中LN浓度较低，肝纤维化时，血清中LN浓度明显升高。其升高程度与慢性肝病肝纤维化程度一致，同时它也反映了肝窦毛细血管化的程度。因为在正常肝组织中，肝窦无LN，但在肝纤维化时，LN和IV型胶原相结合，陈招灾Disse间隙，形成内皮基底膜，从而使肝窦毛细血管化，此既妨碍了肝细胞与肝窦间各种营养物质的交换，又产生门脉高压。所以血清中LN升高程度与门静脉高压程度也是一致的。 o综上所述，LN血清浓度升高程度不同，反映了肝纤维化的不同程度，当其显著增高时，常提示肝硬化的形成和门脉高压的存在。但血清层粘连蛋白在其他非肝纤维化病人亦有升高，如肝癌、胰腺癌、肾病、糖尿病等，分析时应引起重视。肝纤维化四项定量 (ELISA一步法)：人血清透明质酸（HA）人血清三型前胶原（PcIII）人血清四型胶原（IV.C）人血清层粘蛋白（LN）CKD的分期：分期 GFR ml(min 173m2 ) -1症状期 正常;GFR90,伴有其他慢性肾功能损伤的证据 出现高血压危险性增加期 轻度异常; GFR 6089 ,伴有其他慢性肾损伤证据 通常有高血压;甲状旁腺素(PTH)轻度升高期 中度异常;GFR 3059常见高血压,钙吸收减少,磷排出少, 甲状旁腺素升高更显著,脂蛋白代谢发生改变,自发性蛋白摄入减少,肾性贫血,左心室肥厚期 重度异常; GFR 1529述症状更为显著,并出现代谢性酸中毒,高血钾,性欲减退期 已确定有肾功能衰竭;GFR 15或正在接受透析 出现上述所有症状(更加严重),并出现因显著心功能衰竭导致的水钠潴留,食欲减退,呕吐,皮肤瘙痒(没有皮肤病而出现瘙痒) 肾小管三项，包括尿2-MG、尿NAG、尿GGT/尿Cr尿2-MG、尿液2-MG（2微球蛋白）1、是反映近端小管受损的非常灵敏和特异性的指标；2、鉴别上下尿路感染：上尿路感染时，2-MG明显增高，而下尿路感染则正常。尿NAG尿路感染进行N乙酰BD氨基葡萄糖苷酶(NAG)值的测定,上尿路感染的临床符合率为88,下尿路感染的临床符合率为90,认为尿NAG酶可作为上、下尿路感染定位诊断的一项指标。尿路感染的诊断,单凭临床症状及中段尿培养细菌计数每毫升尿在10万以上,只能说明是尿路感染,但不能说明是上尿路感染(肾盂肾炎),还是下尿路感染(膀胱炎)。N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.30，N-acetyl-D-glucosaminidase,NAG)是一种位于溶酶体内的酸性水解酶，相对分子量约有140000。存在于所有组织中，以前列腺和肾近曲小管溶酶体含量最高。NAG有多种同工酶，大多数组织有A和B型同工酶，少数组织含有微量的I、S、P型同工酶1。按等电点由大到小的顺序依次为B、I、P、A和S型同工酶。肾组织有A、B、I等3种同工酶，肾组织损伤时主要是尿NAG-B同工酶升高。NAG同工酶由2种亚基组成，和。NAG-S由2个亚基构成，NAG-A由和亚基组成，而NAG-B、I、P都只含有亚基24。尿中NAG主要来源于肾脏本身，而不是来自血液。糖尿病患者由于存在持续高血糖使非酶糖酰化速率加快，导致组织缺氧，血液粘滞度增高1，同时内皮细胞释放内皮素、P-选择素等血管活性物质2，使肾小球毛细血管张力变化，引起肾血流动力学改变，使肾小球处于高滤过状态引起肾损害。本文通过定量检测尿中微量蛋白包括白蛋白(mAlb),IgG,N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)，探讨其在糖尿病肾损害中的临床价值。 1 材料与方法 1.1 检测对象 (1)临床确诊的糖尿病患者152例，其中男85例，女67例，平均年龄43.215.5岁。(2)对照组65例，健康献血员。 1.2 尿微量蛋白测定尿微量白蛋白及IgG采用酶免疫法(ELISA)测定，NAG采用终点比色法，试剂盒均由福建太阳生物技术公司提供