绵羊日粮可代谢生脂物质（MLS）指标的测定技术规程-编制说明VIP

绵羊日粮可代谢生脂物质（MLS）指标的测定技术规程编制说明一、 工作简况1. 任务来源：内蒙古自治区市场监督管理局关于下达2019年第2批内蒙古自治区地方标准制修订项目的通知内市监标准字2019300号2. 起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院3. 起草人：杜瑞平、卢德勋、高民、凌树礼、马燕芬、胡红莲、王丽芳、羿静。二、 制定标准的必要性和意义能量是动物所需要的最重要营养素之一，是动物生命和生产活动的基础。所有动物都需要能量来维持其机体正常的生长、生产和繁殖。目前的饲养体系中一般将能量视为第一限制性营养要素。动物从饲料中摄取营养物质的同时也获得了能量，主要来源于饲料中的碳水化合物、脂肪和蛋白质。动物只有在能量需要获得满足的前提下，蛋白质、维生素和矿物质等才能发挥其营养生理作用。因此研究不同家畜的营养需要量首先需要研究能量需要量，日粮配制最先要考虑能量的配给平衡。所以能量物质代谢是动物营养学科应用基础性的重要分支,是动物体内物质代谢规律和营养需要量的永恒研究主题。伴随着动物营养学科的发展，传统的能量指标体系最突出的缺陷就是能量与能量载体物质指标相互脱节；还有能量代谢指标与蛋白质代谢缺乏完全整合。如果离开研究能量载体物质的转化和利用，去研究能量利用，就无法真正掌握能量利用的规律；同时，也不可能做到对动物能量利用过程的调节和控制。近年来，在反刍动物方面提出了将能量指标与能量载体指标相结合的发展趋势，美国的CNCPS 体系的重要特点就是除打破瘤胃黑箱之外，还将营养物质消化代谢与能量利用结合起来；另外，当前国际上出现的碳水化合物和纤维物质营养研究的新热点，也是这种发展趋势的反映。Preston和Leng(1987)提出的生葡萄糖能（glucogenic energy）和卢德勋（1996）提出的代谢葡萄糖（MG）都是这方面的可贵尝试，这两个指标为反刍动物的能量调控提供了新的实用性指标。另外，伴随着系统科学思维方式向动物营养学的大力渗透以及动物营养学研究技术的现代化，一系列对动物营养状况整体评价指标应运而生。比如在矿物质营养方面的阴阳离子差（DCAD），蛋白质营养方面的代谢蛋白质（MP）以及代谢葡萄糖（MG）和粗饲料品质评定指数（GI）都是一些整体性营养指标。整体性营养指标的使用将对动物营养检测和优化营养决策技术的发展产生深刻影响。在反刍动物营养发展史中，对饲料的能量营养价值以及动物对能量的需要量评定经历了从最早的干草等价到总可消化营养物质再到消化能、代谢能和净能等几个发展阶段。目前，反刍动物的饲养体系基本上都采用代谢能或净能体系。传统的饲养体系中，一般都将能量作为一个单独的营养指标加以讨论和使用。但在动物体内，能量代谢和物质代谢是一个过程的两个方面。 动物营养系统内部能量的利用效率高低取决于能量载体物质氧化生成ATP的数量和被用于畜产品沉积的状况。能量载体物质（主要指碳水化合物、蛋白质和脂肪）的消化、吸收和利用、合成和分解，必然同时伴随着能量的转化和利用，两者始终相互依存、不可脱离。由于动物体内物质代谢和能量代谢的复杂性，单纯用能量指标只能说明利用率的差别，但很难说清不同能量来源之间的关系及其转化利用的效率，无法有针对性地对能量转化进行调控。 反刍动物的主要能量来自于瘤胃发酵日粮所产生的总挥发性脂肪酸（VFAs），VFA中的三种主要酸即乙酸丙酸和丁酸，由于各自的营养代谢特点不同，乙酸和丁酸作为一个整体即C2+C4能；丙酸和葡萄糖作为C3+C6能，二者相辅相成共同组成反刍动物的主要能量来源。鉴于VFA对反刍动物的巨大能量贡献，定量研究VFA已成为反刍动物能量研究中的重要内容，因此我们必须知道VFA能在瘤胃中产生多少，通过瘤胃壁吸收多少，未被吸收的有多少向后消化道流通，同时吸收入血的VFA又在PDV、MDV和肝脏等组织中如何分布。此定量研究对于我们更清楚地认识反刍动物能量供应机制，更好地调控反刍动物能量代谢有重要意义。因此，卢德勋（2004）在传统能量评定指标基础上继代谢葡萄糖（MG）之后针对代谢能（ME）中的C2+C4能提出了可代谢生脂物质（MLS）的概念。这一指标克服了传统营养指标体系能量与能量载体相脱节的缺陷，成为反刍动物物质代谢和能量代谢之间联系的桥梁，为能量代谢和物质代谢整体调控创造了条件，为反刍动物能量调控提供了有力的理论依据，具有重要的生产实践指导意义。三、 主要起草过程1. 前期准备本标准是由内蒙古自治区农牧业科学院动物营养与饲料研究所科研团队在传统能量评定指标基础上继代谢葡萄糖（MG）之后针对代谢能（ME）中的C2+C4能提出的可代谢生脂物质（MLS）概念基础上，以内蒙古半细毛生长羯羊为研究对象，利用非同位素标记乙酸、丁酸的启动连续灌注及模拟连续饲喂技术，借助瘤胃十二指肠瘘管技术，在获得瘤胃稳态条件下，通过测定基础日粮条件下绵羊瘤胃乙酸丁酸的产生吸收和利用速率和流量从而计算出可代谢生脂物质（MLS）的日供应量。同时查阅国内外相关资料及标准，最终制定出绵羊日粮可代谢生脂物质（MLS）指标的测定技术规程这一标准。2. 形成过程目前国际上广泛应用的测定VFA产生速率的方法是同位素稀释技术，但因为该方法中连续灌注标记酸的稀释速率并不能特别准确反映VFAs产生速率，而且测定结果的准确性还取决于与瘤胃液中VFAs浓度成正比的VFAs的吸收速率，同时同位素技术本身要求较严苛，所以本团队查阅了国内外大量相关文献并结合前期研究基础，确定采用模拟连续饲喂和非标记的启动-连续灌注技术测定VFA基本产生速率，但应用此方法的前提是必须获得瘤胃稳态。标准起草小组召开了多次讨论会，对相关试验技术细节进行了认真讨论，取得了共识。为了进一步验证其准确性、科学性，起草小组制定了验证试验方案，开展了验证试验。从测定结果看，这种方法是可行的，稳态规定指标的变异系数在前人规定的范围之内。在获得瘤胃稳态基础上，又通过启动连续灌注非标记酸溶液测定了瘤胃VFA的产生、吸收、流通及代谢规律并计算出了MLS值，完成了绵羊日粮可代谢生脂物质（MLS）指标的技术测定。在前期技术资料收集、调研、验证试验和经验总结基础上，标准起草小组按GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写编写要求，在讨论稿基础上，对标准草案进行编写、修改和完善，于2019年3月完成了标准建议书，于2019年5月完成了标准征求意见稿和编制说明，在专家送审意见收集和修改基础上于2020年1月完成了征求意见稿修改稿。本标准由内蒙古农牧业科学院提出和申报，内蒙古农牧业科学院作为本标准第一起草单位，工作组成员具体分工见下表：成员主要工作杜瑞平负责技术方案确定、验证试验实施、标准起草和说明以及项目整体协调工作卢德勋技术方案指导高民参与技术方案确定凌树礼参与验证试验实施，指标测定马燕芬参与验证试验实施胡红莲参与验证试验实施王丽芳参与文献检索、收集等羿静指导标准编写四、 制定标准的原则和依据（一） 标准编制原则本标准格式、结构和编写规则严格按照GB/T 1.1-2009标准化工作导则第一部分：标准的结构和编写规则的要求进行编写。（二） 主要技术内容确定的依据本标准是根据项目组所在研究基地-内蒙古自治区农牧业科学院动物营养与饲料研究所反刍动物营养试验基地多年来在可代谢葡萄糖（MG）和可代谢生脂物质（MLS）理论指导下在反刍动物能量代谢调控方面特别是在VFA产生与流通规律及模型建立、可代谢葡萄糖、可代谢生脂物质及其生产实践应用方面开展的一系列研究成果进行编制的，主要依据以下技术成果：1.熊本海（1998）：生长肥育羊瘤胃内VFA产生、吸收规律及模型参数研究中国农业科学院博士论文。2.孙海洲（1999）：生长肥育羊葡萄糖营养整体优化规律的研究内蒙古农业大学博士论文。3.苏鹏程（2003）：不同代谢葡萄糖水平日粮条件下白绒山羊体内蛋白质(氨基酸)分配规律的研究内蒙古农业大学博士论文。4.韩飞（2002）：反刍动物常用饲料丙酸产量和吸收率的测定及其模型化研究 内蒙古农业大学硕士论文。5.王玲（2003）：内蒙古白绒山羊适宜代谢葡萄糖水平的研究内蒙古农业大学硕士论文。6. 张红瑞（2006）：生长育肥绵羊日粮代谢葡萄糖内部POEG与BSEG适宜比例的研究内蒙古农业大学硕士论文。7.杜瑞平（2006）：绵羊瘤胃乙酸和丁酸的产生、吸收规律及可代谢生脂物质（MLS）的测定”内蒙古农业大学硕士论文。五、 主要条款的说明本标准的主要内容由三个部分组成，即1.范围；2.名字术语解释；3.测定方法，下面重点予以说明。1、 范围的描述本标准规定了以绵羊为代表的反刍动物可代谢生脂物质（MLS）指标的定义和测定方法。本标准适用于牛、羊等反刍动物可代谢生脂物质（MLS）指标的测定。2、 名词术语解释的描述主要对反刍动物、挥发性脂肪酸、可代谢生脂物质、VFA瘤胃产生、流通和吸收速率等进行了名词术语解释，以便标准阅读者有更清晰的定位和理解。3、测定方法的描述（主要技术指标、参数、试验验证的论述）本标准规定了稳态下瘤胃VFA基本产生速率的确定原理，与瘤胃液相稀释、流通和VFA的产生、流通、吸收相关的浓度、体积、速率及吸收率的计算公式以及最终的MLS计算公式，Co-EDTA标记物的制备、投放与乙酸、丁酸的灌注方法，瘤胃液样品处理方法，Co和VFA测定分析方法等具体测定步骤，目的使其更具有实用性和可操作性。六、 重大意见分歧的处理依据和结果项目组暂无重大意见分歧。七、 采用国际标准或国外先进标准的，说明采标程度，以及国内外同类标准水平的对比情况；目前，国际或国外还没有形成与此指标及测定技术相关的同类标准，自治区内也没有相关院校及科研单位提出同类指标及开展相关测定研究。八、 其他应说明的事项本标准在经相关部门批准发布实施后，需要行政部门的监督执行，保证“标准”制定的目的。“标准”在执行的过程中还需要不断的完善和健全。九、 外审专家意见及修改补充情况一览表所在位置专家意见是否采纳作何修改补充或对专家问题的解释3.2挥发性脂肪酸的定义是原文易产生歧义，已修正。5试验动物和日粮的范围问题是同意两位专家的意见，原有的动物和日粮是验证试验所采用的动物和日粮，此处搬来并不合适，已进行了修改。题目建议改为“绵羊日粮可代谢生脂物质指标的测定技术规程”是已修改。7.3单位问题是已补充。3.4建议删去是已删除。4,6,7.1.4标点符号问题是已梳理并修改。3.7,3.8建议删去掉字是已删除。3名词术语的解释存在错误、语句不通、表述不清等现象是已对所有名词术语均进行了梳理和修正。7需进一步凝练是已进行了修改。前言前言中技术标委会后面加“（SAM/TC 19）”是已添加。2规范性引用文件中“GB/T 6682 分析实验室用水规格为一级水”修改为“GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法”；“GB/T 6432-1994 饲料中粗蛋白测定方法”修改为“GB/T 6432-2018 饲料中粗蛋白测定 凯氏定氮法”；“GB/T 6436-2002”修改为“GB/T 6436-2018”或者“GB/T 6436”；“GB/T 6437-2002”修改为“GB/T 6437-2018”或者“GB/T 6437”；“GB/T 13884-2003饲料中钴的测定 原子吸收光谱法”作废。以上文件未在本规程里引用，建议删掉。是已修改。3术语和定义中