低分子量肝素钙.doc

正式名：低分子量肝素钙汉语拼音：Difenziliang标准号：WS-381(X-334)-2000拉丁文或英文：Low-molecular-weight主要活性成分：本品为硫酸氨基葡聚糖的钙盐，其分子量小于8000道尔顿的部分应不少于60%。性状：本品为白色或类白色粉末；有引湿性。本品在水中易溶。鉴别：（1）抗Xa因子活性与抗凝因子活性的比率，按效价测定项下方法测定应为2.55.0。（2）本品的水溶液显钙盐的鉴别反应（中国药典1995年版二部附录III）。中华人民共和国国家药品监督管理局 发布 重庆市药品检验所 审核国家药品监督管理局药品审评委员会 审订 天津红日药业股份有限公司 提出本标准自2000年12月15日起试行，试行期2年。保护期至2001年5月25日，保护期内，其他单位不得仿制。 检查：酸碱度 取本品0.10g，加水10ml溶解后，依法测定（中国药典1995年版二部附录VI H），pH值应为5.57.5。溶液的澄清度与颜色 取本品0.50g，加新沸过的冷水10ml溶解，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液（中国药典1995年版二部附录IX B）比较不得更浓；如显色，与黄色1号标准比色液（中国药典1995年版二部附录IX A第一法）比较，不得更深。总氮量 取本品约0.1g，精密称定，照氮测定法（中国药典1995年版二部附录 D第二法）测定，按干燥品计算，含总氮量应为1.52.5。钙含量 取本品约0.2g，精密称定，加水50ml溶解，加入10mol/L氢氧化钠溶液4ml和钙羧酸指示剂约5mg，用0.05mol/L的乙二胺四乙酸二钠滴定液滴定至颜色由紫红色变为深蓝色。每1ml 0.05mol/L的乙胺四乙酸二钠滴定液相当于2.004mg的Ca。按干燥品计算，含钙（Ca）应为9.511.5。氯化物 取本品80mg，用水溶解成100ml，取25ml作为供试品溶液，依法检查（中国药典1995年版二部附录 A），与标准氯化钠溶液8ml制成的对照溶液比较，不得更浓（0.4）。干燥失重 取本品，在60减压干燥3小时，减失重量不得过10（中国药典1995年版二部附录 L）。炽灼残渣 取本品0.50g，依法检查（中国药典1995年版二部附录 H）。遗留残渣应为28.041.0。重金属 取炽灼残渣项下遗留的残渣，依法检查（中国药典1995年版二部附录 H第二法），含重金属不得过百万分之二十五。砷盐 取本品1g，置凯氏烧瓶中，加硫酸5ml，用小火消化使炭化，炭化完全后，滴加浓过氧化氢溶液，待反应停止后，继续滴加至反应液无色，冷却，加水10ml，蒸发至浓烟发生，以除尽过氧化氢，加盐酸5ml和水适量，依法测定（中国药典1995年版二部附录 J第一法），砷盐不得过百万分之二。细菌内毒素 取本品，依法检查（中国药典1995年版二部附录XI E），每2500抗Xa因子效价单位低分子量肝素钙的细菌内毒素含量应小于20Eu。硫酸根与羧酸根的摩尔比 不得低于1.8。取本品约0.1g，精密称定，加重蒸馏水20ml，溶解，冷至4，取2ml置预先冷却的732型氢型阳离子交换柱(约13cm1cm)中，静置1分钟，缓慢放出（每分钟约为0.4ml）交换后的样品溶液于烧杯中，并用20ml重蒸馏水洗涤交换柱，洗液并入烧杯中，用0.05mol/L氢氧化钠滴定液滴定，每次滴定0.05ml，用电位计指示终点。V1硫酸根与羧酸根的摩尔比 V2V1式中V1第一个突跃体积，即硫酸根消耗的氢氧化钠滴定液体积。V2第二个突跃体积，即硫酸根和羧酸根消耗的氢氧化钠滴定液体积。分子量测定 照高效液相色谱法（中国药典1995年版二部附录V D）测定。色谱条件与系统适用性试验 以微孔硅胶（5m）为填充剂，理论板数应不低于20，000/米，蛋白质分离范围为15，000至100，000；以1.0mol/L硫酸调0.2mol/L硫酸钠溶液pH至5.0，作为流动相；流动相的流速为0.5ml/min;将紫外检测器和示差检测器按顺序串连使用，紫外检测器的检测波长234nm，示差检测器接紫外检测器输出端。测定法 称取低分子量肝素标准品适量，加流动相溶解制成每1ml中含10mg的溶液，量取25l注入液相色谱仪，记录示差和紫外图谱，按下述方法计算：分子量的校正因子（f）在相关范围内，计算UV234曲线下的总面积（UV234）和RI曲线下的总面积（RI）。按下式计算RI响应和UV234响应面积的比值r：r=RI/234因子f与r相乘等于Mna（校准用标准品的已知数均分子量），因子f：f=Mna/rUV234和RI响应值相关联时，按下式计算，得到任意点的分子量（M）：MfRI/UV234供试品溶液的制备与测定 称取低分子量肝素钙样品适量，加流动相溶解制成每1ml含10mg的溶液，取25l注入液相色谱仪，记录示差图谱，按下式计算重均分子量（Mw）：Mw（RIiMi）/RIi其中：RIi在第i部分中被洗脱物质的量（重量）Mi第i部分中相应的分子量另外，根据下式可以计算出分子量小于8000部分的百分比率（P）：n mP（RIj）/（RIi）100j=1 i=1n 其中 RIj指分子量小于8000（Mi 8000）部分对应的RI总和j=1mRIi指所有RI总和i=1【效价测定】 抗Xa因子活性和抗凝因子活性按低分子量肝素钙生物效价测定法测定。作用与用途：抗凝血药。注意：对本品过敏者，急性细菌性心内膜炎，血小板减少症