叶绿素含量的测定

植物生理学实验叶绿体色素含量的测定 -分光光度法 姓名 学号 系别 班级 实验日期 同组姓名 摘要:叶绿体色素溶液各组成成分在可见光谱中具有不同的特征吸收峰。因此，应用分光光度计在某一特定波长下所测定的吸光度。叶绿体色素的提取常用丙酮和乙醇有机溶剂。叶绿体色素95 乙醇提取液中叶绿素 a 和 b 及类胡萝卜素分别在 665nm ,649nm 和 470nm 波长下具有最大吸收峰，据此所测得的吸光度值代人不同的经验公式（见结果计算），计算出叶绿体色素乙醇提取液中叶绿素 a 和 b 的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的总浓度，并依据所使用的单位植物组织（鲜重、干重或面积），求算出色素的含量。一、 实验原理与实验目的实验原理：利用95%乙醇提取叶绿体色素，叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素最大吸收峰的波长分别是665nm、649nm和470nm。 根据分光光度计测定的吸光度值，可以计算出乙醇提取液中叶绿体色素含量。实验目的：掌握分光光度法对叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总浓度和类胡萝卜素总浓度测定和计算的方法。二、 实验材料和方法植物材料：菠菜叶片 、番茄幼苗叶片实验用具：分光光度计、天平、研钵、漏斗、剪刀、容量瓶、烧杯、滤纸、滴管等 实验试剂：95%乙醇、石英砂和碳酸钙试验方法：分光光度法三、 实验步骤1、 叶绿体色素的提取取新鲜菠菜叶片（或番茄幼苗叶片）0.5克,擦干,去中脉,剪碎放入研钵;加入少许石英砂和CaCO3,再加入95%乙醇3ml,研磨成匀浆,再加95%乙醇10ml,静置10分钟;用漏斗滤去残渣,用丙酮反复冲洗研钵、残渣至无色;用容量瓶定容至50ml 。2、吸光度的测定取光径1cm比色杯，注入上述叶绿素提取液,以95%乙醇注入另一同样的比色杯内作为空白对照,在波长665、649和470nm下测定吸光度。3、结果计算依据下列丙酮提取液中色素浓度计算公式,分别计算出叶绿素a、b的浓度及其叶绿素总浓度和类胡萝卜素的浓度。附录：722分光光度计的使用1、选择灵敏度旋纽至3；将波长调节到600nm，打开样品室盖，打开电源开关预热20min。 2、打开样品室盖，将测定旋纽调至T（透光度），用调节旋纽0调0；盖上样品室盖，用调节旋纽100调100。 3、将空白样品放入样品槽，按上述方法调0和调100。 4、将测定旋纽调至A（吸光度），用Abs旋纽调0，测定待测样品的光密度。计算公式 ：95%乙醇提取液中色素浓度的计算 Ca（叶绿素a）=13.95A665 6.8A649 Cb（叶绿素b）=24.96A649 7.32A665 CT（叶绿素）=Ca+Cb=18.16A649 + 6.63A665 Cx.c（类胡萝卜素）=(1000A470 2.05Ca-114.8Cb)/248叶绿体色素含量=四、 实验结果与讨论1、菠菜叶片不同波长下的吸光度(0.42g)波长（nm）吸光度平均值6650.7020.6830.7550.71336490.3280.3260.3400.33134700.8230.8270.8610.8370Ca（叶绿素a）=13.95*0.7133 6.8*0.3313= 7.6977mg/LCb（叶绿素b）=24.96*0.3313 7.32*0.7133=3.0479mg/LCT（叶绿素）=Ca+Cb=18.16*0.3313 + 6.63*0.7133= 10.7456mg/LCx.c（类胡萝卜素）=(1000A470 2.05Ca-114.8Cb)/248=1.8995mg/LCa（叶绿素a）含量=7.6977mg/L*0.05L*1/0.42g=91.64mg/gCb（叶绿素b）含量= 3.0479mg/L*0.05L*1/0.42g=36.28mg/gCx.c（类胡萝卜素）含量=1.8995mg/L*0.05L*1/0.42g=22.61mg/g2、1#番茄幼苗叶片不同波长下的吸光度(0.34g)波长（nm）吸光度平均值6650.4630.4520.4530.45606490.2030.2640.2750.24734700.4920.4640.4790.4783Ca（叶绿素a）=13.95*0.4560 6.8*0.2473= 4.6796mg/LCb（叶绿素b）=24.96*0.2473 7.32*0.4560=2.8347mg/LCT（叶绿素）=Ca+Cb=18.16*0.2473 + 6.63*0.4560=7.5142mg/L Cx.c（类胡萝卜素）=(1000 A470 2.05Ca-114.8Cb)/248=0.5778mg/LCa（叶绿素a）含量=4.6796mg/L*0.05L*1/0.34g=68.82mg/gCb（叶绿素b）含量=2.8347mg/L*0.05L*1/0.34g=41.69mg/g Cx.c（类胡萝卜素）含量=0.5778mg/L*0.05L*1/0.34g=8.50mg/g3、4#番茄幼苗叶片不同波长下的吸光度(0.2g)波长（nm）吸光度平均值6650.2190.2250.2310.22506490.1130.1170.1240.11804700.2530.2590.2680.2600Ca（叶绿素a）=13.95*0.2250 6.8*0.1180= 2.33636mg/LCb（叶绿素b）=24.96*0.1180 7.32*0.2250=1.29828mg/LCT（叶绿素）=Ca+Cb=18.16*0.1180 + 6.63*0.2250=3.6353mg/L Cx.c（类胡萝卜素）=(1000* A470 2.05Ca-114.8Cb)/248=0.4300mg/LCa（叶绿素a）含量=2.33636mg/L*0.05L*1/0.2g=58.409mg/gCb（叶绿素b）含量= 1.29828mg/L*0.05L*1/0.2g=32.457mg/gCx.c（类胡萝卜素）含量=0.43mg/L*0.05L*1/0.2g=10.75mg/g讨论：叶绿素a、b在蓝色区也有吸收峰，能否用这一吸收峰波长进行叶绿素的定量分析？