化妆中限制用物质检测手段.doc

化妆品限用禁用物质检测方法的研究上海市食品药品检验所 一 研究目标 随着食品化妆品监督功能的转移，化妆品中药物非法添加（限用禁用物质）受到越来越多的关注。本课题在我国传统的化妆品安全卫生化学检测方法基础上，加入现代化的仪器分析手段来提高分析方法的灵敏度、选择性和准确性。初步建立化妆品中限用禁用物质的检测方法体系，为化妆品中限用禁用物质的快速检验和定性定量分析、标准方法的制定提供技术支持。(1)我国现行化妆品标准规范目前有GB7916 - 1987化妆品卫生标准、GB7917 - 1987化妆品卫生化学标准检验方法、GB7918 - 1987化妆品卫生微生物标准检验方法、GB7919 -1987化妆品安全性评价程序和方法等化妆品国家标准42个。卫生部出台了化妆品卫生规范（2002年版）和卫生部化妆品检验规定2个。新版的化妆品卫生规范（2007年版）于2007年7月1日正式执行。(2)化妆品卫生安全问题及隐患我国化妆品卫生规范2002年版制定的化学指标分析方法只有22个标准仅涉及57项,新版的化妆品卫生规范（2007年版）参考了欧盟对化妆品原料要求的有关规范，明显增加了禁用化学物质的种类和数量，化学类禁用物质1208项、植物类禁用物质78项、限用物质73 项、 限用防腐剂56项、限用防晒剂28项、限用着色剂157项。但其中明确有卫生化学检验方法的只有76项，总的方法覆盖率仅为4.8%。二 研究结果参照欧美同行化妆品执行标准,根据不同类别化妆品中禁用限用物质的性质，大力开展检测标准方法的研制, 研究并扩大检验方法中禁限用物质的检测技术，加快检验方法的标准化进程。1 美白祛斑产品中过氧苯甲酰非法添加的分离测定（HPLC-DAD）过氧苯甲酰作为药品可用于寻常痤疮的局部治疗，有报道称某些不法生产厂商为谋取利益在化妆品中非法添加此类物质。我们采用二元梯度洗脱方式对其进行分离测定进行研究，有效地避免化妆品基质和其他活性成分的干扰。采用C18色谱柱，乙腈-水-36%醋酸（70:30:0.1）为流动相，在238nm处，取过氧化苯甲酰对照品（从冰箱中取出后在室温下放置约1小时）约480mg，精密称定，置100ml量瓶中，加溶剂乙腈-水（70:30）40ml，超声助溶，放冷用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液（对照品储备液要在使用当天新配）精密量取对照品储备液适量，用溶剂稀释100倍，作为对照品溶液。取化妆品约1.0g，精密称定，精密加入乙腈10ml，超声助溶，放冷，冷冻，离心，滤过，取续滤液作为供试品溶液。过氧苯甲酰在0.5-65g/ml浓度范围内呈良好线性，相关系数为0.99996，加样检出浓度为0.28g/g,回收率为91%。采用此方法对百余批样品进行了检测，分离良好，结果满意。2 化妆品中抗生素及甲硝唑的快速高效液相色谱测定法研究建立了祛痘除螨类化妆品中8种抗生素及甲硝唑同时测定的快速高效液相色谱分析方法。以Agielent 1200快速高效液相色谱，采用SB和XDB-C18（1.8m,4.6 mm i.d.50mm）色谱柱，0.1mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH为2.5）-乙腈为流动相进行梯度洗脱，在7分钟内首次实现了8种抗生素及甲硝唑的同时分离测定，常规液相色谱分离至少需要30分钟才能完成一次分析。在4100g/ mL 线性范围内，9种物质的线性相关系数均0.9999，最低检出限为0.251.4ng。在低中高三个添加水平，9种物质的平均回收率为92.2%103.2%，相对标准偏差为0.04%4.5%。并考察了不同状态的化妆品样品的提取方式。该法操作简便、准确、快速，能够检测祛痘除螨类化妆品中8种抗生素以及甲硝唑的含量。文献查阅及市场调查表明，抗生素类及某些激素因对痤疮有一定的治疗效果而常用于外用药中，如甲硝唑、氯霉素、林可霉素等。我国化妆品卫生规范、欧盟化妆品规程（CoucilDirective76 /768/EEC） 规定抗生素类物质禁止在化妆品中使用。目前，我国化妆品卫生规范（2007 年版）已于2007年8月1日正式执行，其中首次提出了化妆品中五种四环素类抗生素及甲硝唑、氯霉素的标准检测方法。原永芳等采用高效液相色谱法测定了护肤粉刺霜中的甲硝唑、氯霉素、地塞米松磷酸钠及维甲酸等成分。王蕾等采用高效液相色谱法测定了药品中的四环素类抗生素。本文建立了化妆品中8种抗生素，即盐酸米诺环素、盐酸土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸多西环素、氯霉素、林可霉素、克林霉素和甲硝唑9种禁用物质的快速高效液相色谱检测方法，并采用此方法对市场上的祛痘除螨类产品进行了测定。1）实验部分（1）仪器与试药Agilent 1200高效液相色谱仪，包括真空脱气机(G1379B)、二元梯度泵(G1312B)、二极管阵列检测器(G1315C)、自动进样器(G1367C)、柱温箱(G1316B)、Agilent Chem化学工作站。Fresco17 高速冷冻离心机（Thermo Electron 公司），Kudos超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司），Vortex -genie涡旋振荡器（Scientific Industries），Sartorius pH计。Milli-Q Advantage A10(锋锐型)超纯水系统（密理博中国有限公司）磷酸二氢钾为分析纯、磷酸为优级纯（上海化学试剂公司），水为蒸馏水，乙腈为色谱纯(Merck公司)。盐酸米诺环素、盐酸土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸多西环素、氯霉素、甲硝唑和林可霉素、克林霉素由中国药品生物制品检定所提供。化妆品有各种祛痘洁面乳，激白抗痘骨胶原精华面膜，抗痘美白洁面乳，粉刺王精华等。（2）色谱条件及实验方法 采用XDB C18色谱柱(50mm4.6mm i.d., 1.8m)，以0.1mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH为2.5）-乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min，采用二极管阵列检测器，检测波长为268nm（在210nm波长处检测克林霉素和林可霉素），柱温为26 ; 进样量:5L。（3）标准溶液的制备 分别准确称取盐酸米诺环素、土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸多西环素、氯霉素、甲硝唑、林可霉素和克林霉素，置50mL容量瓶中，用0.1mol/L磷酸二氢钾溶液（pH2.5）溶解并稀释至刻度，摇匀，配成各组分质量浓度为0.4mg/mL的混合标准储备液。标准曲线：准确移取不同体积的混合标准溶液，用流动相稀释成各组分质量浓度为0、4、8、20、40和100g/mL的系列标准溶液。在设定色谱条件下，分别取5L进样。以系列标准溶液质量浓度为纵坐标，峰面积为横坐标，绘制标准曲线。图1 8种抗生素和甲硝唑的标准色谱图(210nm) 1：甲硝唑 2：林可霉素 3：盐酸米诺环素 4：土霉素 5：盐酸四环素 6：盐酸金霉素；7：克林霉素 8：盐酸多西环素 9:氯霉素。快速液相色谱，XDB C18色谱柱(50mm4.6mm i.d., 1.8m)，以0.1mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH为2.5）-乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min，柱温为26 ；进样量:5L图2 8种抗生素和甲硝唑的标准色谱图(268nm) 图3常规液相色谱上6种抗生素和甲硝唑的标准色谱图(268nm)C18色谱柱(250mm4.6mm i.d., 5m)，以0.01mol/L草酸盐溶液（pH为2.0）-乙腈为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min，柱温为30 ; 进样量:10L。与快速液相相比，分离所需时间长，基线无快速液相平（4）样品溶液的制备 准确称取1.0g 左右样品于50ml 具塞刻度管中，加入0.1mol/L磷酸二氢钾溶液（pH2.5）10ml，振摇，超声提取30分钟，必要时加入石油醚10mL萃取，取下层离心，经0.45m滤膜过滤，取续滤液作为待测样液备用。在设定色谱条件下，分别取5L进样分析。根据峰面积，于标准曲线得出各组分的质量浓度，并根据稀释倍数计算实际样品中各组分的最终浓度。2）结果与讨论（1）色谱条件的选择 考察了不同流动相对9种物质分离的影响。按照化妆品卫生规范色谱条件采用甲醇-乙腈-0.01mol/L草酸盐(pH2.0) (11:22:67)为流动相，采用多种品牌C18色谱柱(250mm 4.6mm i.d., 5m)进行实验，均未能达到甲硝唑、盐酸米诺环素、土霉素、盐酸金霉素、盐酸四环素、盐酸多西环素、氯霉素的同时有效分离，并且溶解稀释样品用流动相中的草酸盐还会干扰第一个色谱峰的检测。实际工作中必须采用0.01mol/L 草酸盐(pH2.0)与前述流动相进行梯度洗脱，才能实现上述物质及溶剂中草酸盐的有效分离。但该条件下无法检测林可霉素和克林霉素，因为草酸盐在210nm处噪声太大，使得两者淹没在噪声中，无法检测。故考虑采用磷酸盐系统并使用填料颗粒度更小的色谱柱。色谱柱填料颗粒度越小柱效越高,不同的颗粒度有各自最佳柱效的流速；而更小的颗粒度使最高柱效点向更高流速（线速度）方向移动，而且有更宽的线速度范围。所以降低颗粒度不但能提高柱效，同时还能提高分析速度。采用亚二微米的SB C18快速液相色谱柱，使得上述9种物质的同时快速分析成为可能。我们考察了不同比例的甲醇-乙腈-磷酸盐等多种流动相，采用甲醇-乙腈-0.010.05mol/L磷酸盐(11:22:67), 甲硝唑、盐酸米诺环素和林可霉素无法实现有效分离，克林霉素和多西环素亦无法完全分离。选择乙腈-0.1 mol/L磷酸盐(pH2.5)进行梯度洗脱，实现了9种物质的有效分离。前0.8分钟乙腈-0.1 mol/L磷酸盐(pH2.5)为13:87，0.9-4.5分钟乙腈-0.1 mol/L磷酸盐(pH2.5)为20:80，4.5-6分钟乙腈-0.1 mol/L磷酸盐(pH2.5)为13:87。前面乙腈比例较少，流动相极性减小，有利于分离，0.9分钟开始极性较大，使出峰迅速且分离良好。（2）检测波长的选择 氯霉素在278nm波长处有特征吸收, 盐酸四环素、多西环素、盐酸米诺环素、盐酸金霉素、土霉素均有三个较大紫外吸收峰，包括在268nm波长处有特征吸收,甲硝唑在240、320nm波长处有特征吸收,林可霉素和克林霉素选择末端吸收210nm为检测波长。综合考虑，在210nm波长处测定林可霉素和克林霉素，其余物质在268nm波长处测定。（3）样品处理方式不同品种的化妆品的基质各不相同，各种水溶液的化妆品（如化妆水、调理水等）都是最易处理，且回收率结果最好。对于洗面乳、凝胶等，则因为体积不易定容，且样品中表面活性剂太多，有时候表面活性剂起到了离子对试剂的效果，导致加样回收率试验中样品加入的各标准物质的保留时间向后迁移，需要有机相比例较高的流动相洗脱较长时间才能恢复到最初的保留时间。另经多次实验证明，在分离实际样品时，每次进样分析周期完成后，用乙腈-0.1 mol/L磷酸盐(pH2.5)（50：50，V/V）冲洗23分钟，可以保证相同的保留时间。极端情况下，使用一定比例的四氢呋喃可以有效去除柱头残留的基质，降低柱压，较快地恢复到正常的保留时间。实验显示，样品经0.1 mol/L磷酸盐(pH2.5)提取，振摇，超声提取30分钟，加入石油醚10mL萃取，可以去除化妆品中大多数基质的干扰，保持保留时间的恒定以及较高的回收率。（4）线性范围及检出限 在设定色谱条件下，测定不同浓度的混合标准溶液5次，其浓度与峰面积相关。检测下限以噪音的3倍计算。8种抗生素及甲硝唑的回归方程、相关系数、线性范围及方法检出限见表1。表19种成分的回归方程、 线性范围、相关系数及最低检测量化合物回归方程Y=a+bX线性范围/mg/mL相关系数最低检测量/ng 甲硝唑Y=2481.10X+ 0.070.0040.0971.000 00.38米诺环素Y=5940.97X-0.530.0040.0881.000 00.70土霉素Y=6668.80X+0.150.0040.0901.000 00.28盐酸四环素Y=6030.07X-0.210.0040.0981.000 00.25盐酸金霉素Y=3812.90X-1.910.0040.0970.999 90.77多西环素Y=3517.02X -1.730.0030.0861.000 01.38氯霉素Y=4137.53X-0.160.0040.0921.000 00.74林可霉素Y=1298.91X+0.030.00360.0891.000 01.42克林霉素Y=1227.81X-0.030.0040.0890.999 91.42 最低检测量 (S/ N = 3)（5）准确度及精密度 取浓度为0.02mg/mL的混合标准溶液在设定色谱条件下，连续测定6次，进行精密度试验。向3种不含待测9种物质的祛痘除螨类样品中分别加入高、中、低3种浓度的混合标准溶液，按上述样品分析方法处理样品，进行加样回收实验。9 种抗生素的精密度及加样回收率结果见表2。表29种成分的精密度及加样回收率化合物精密度(n=6)加标4g/mL(n=3)加标20g/mL(n=3)加标100g/mL(n=3)RSD(%)回收率（%）RSD（%）回收率（%）RSD（%）回收率（%）RSD（%）甲硝唑0.27100.90.3101.20.1100.40.2米诺环素0.3395.81.899.61.2101.90.6土霉素0.13103.03.3103.23.3102.93.2盐酸四环素0.4699.291.294.50.5102.21.4盐酸金霉素1.2998.70.895.80.5101.40.1多西环素0.96101.23.596.91.8100.61.2氯霉素0.3797.21.199.20.0498.80.8林可霉素0.26101.43.899.81.2100.90.2克林霉素1.4194.24.592.23.798.61.7（6）样品测定采用HPLC法，对市售30余种祛痘类化妆品进行了测定。结果表明，1种产品检出甲硝唑，含量为0.8g/g（见图3、4），1种产品检出氯霉素，含量为0.6g/g，其余产品中均未检出9种禁用物质。图3 实际样品色谱图（268nm）1.甲硝唑图4 实际样品色谱图（210nm）1.甲硝唑210nm处得到的样品色谱图中6.1分钟的色谱峰在268nm处无吸收，进一步通过DAD二极管阵列检测器进行紫外光谱图的匹配，证明该样品不含氯霉素，避免假阳性结果。说明在进行化妆品样品中抗生素确认中，使用二极管阵列检测器进行光谱匹配是非常重要的，可以获得某一特定保留时间处的紫外可见吸收光谱图，与标准谱图比较就很容易得出结论。对于林可霉素和克林霉素，由于它们只有末端吸收，除了采用保留时间和光谱匹配双重手段判断，必要时采用LC-MS进行确证。对于保留时间与林可霉素和克林霉素接近的色谱峰，如经DAD紫外光谱判断也为末端吸收，则采用LC-MS分析其分子离子峰。选择m/z为407、126、359的碎片离子进行定性，选择ESI(+)模式，碎片电压为250mV，以pH4.1的醋酸铵(40mmol/L)-甲醇（3:7）为流动相，在0.2ml/min的流速下，根据丰度比进行定性测定。通过LC-MS，我们成功地剔除了数件林可霉素为假阳性的样品，确证了含甲硝唑(采用ESI(+)模式)和氯霉素(采用ESI(-)模式的产品。3）小结快速高效液相色谱法同时测定祛痘除螨类化妆品中8种抗生素、甲硝唑，样品前处理操作简便，回收率高，色谱峰重现性好，分离速度快，能较好地应用于化妆品的监督检测工作。我们已经采用该方法进行了50余件检品的测定，结果令人满意。主要检出项为甲硝唑和氯霉素，说明该类物质需要严格加以控制和监测。三 化妆品中糖皮质激素的快速高效液相色谱测定法研究我们开展了美白祛斑产品中7种糖皮质激素（包括地塞米松磷酸钠、氢化可的松、地塞米松、醋酸氢化可的松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、丁酸氢化可的松）非法添加的分离测定（HPLC-DAD）研究。规范中其为禁用物质，但是却没有卫生化学检验方法。文献报道中有6种糖皮质激素或糖皮质激素与其他激素成份的同时测定，但系统的研究和方法的制定还需开展。第一阶段我们采用HPLC-DAD,以梯度洗脱的方式成功地分离测定了7种物质。第二阶段我们采用快速液相色谱(RPLC)-DAD在10分钟内实现了7种物质的快速分离分析。色谱条件和系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（使用C18预柱），以0.025mol/L磷酸二氢钾（含0.25%的三乙胺，磷酸调pH至3.4）-甲醇（47：32）为流动相A，以乙腈为流动相B，检测波长为240nm。分离度应大于1.5。Time(min)B(%) 0124124.1256506.112812色谱条件2：以0.025mol/L磷酸二氢钾（含0.25%的三乙胺，磷酸调pH至3.4）-甲醇（47：32）为流动相A，以乙腈为流动相B，检测波长为240nm。 Time(min)B(%)024.52740混合标准储备溶液：分别准确称取地塞米松磷酸钠、氢化可的松、地塞米松、醋酸氢化可的松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、丁酸氢化可的松各50.00mg，至50ml量瓶中，用适量甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成各组分质量浓度为1.00mg/mL的混合标准溶液。标准曲线的制备：准确移取不同体积的混合标准溶液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。在设定色谱条件下，分别取10mL进行分析。以标准系列质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备：准确称取样品约1g于20mL量瓶中，加甲醇适量，振摇，超声提取20min30min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀。经0.45mm滤膜过滤，滤液作为待测溶液备用。测定法 分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，按标准曲线法以峰面积计算。图5 7种糖皮质激素标准色谱图（快速液相方法）图6 样品色谱图（快速液相方法）图7 7种糖皮质激素标准色谱图（常规液相方法）由图可见，快速液相色谱方法比常规液相色谱方法节约了分析时间，基线更加平稳，灵敏度更高。取L3标准溶液，连续进样5针，地塞米松磷酸钠峰面积标准偏差为0.2%，氢化可的松峰面积标准偏差为0.2%，地塞米松峰面积标准偏差为0.7%，醋酸氢化可的松峰面积标准偏差为0.7%，醋酸可的松峰面积标准偏差为1.0%，醋酸地塞米松峰面积标准偏差为0.5%，丁酸氢化可的松峰面积标准偏差为0.5%(n=5)。地塞米松磷酸钠检出浓度为2.1mg/g，氢化可的松检出浓度为2.0mg/g，地塞米松检出浓度为2.0mg/g，醋酸氢化可的松检出浓度为4.0mg/g，醋酸可的松检出浓度为3.9mg/g，醋酸地塞米松检出浓度为2.0mg/g，丁酸氢化可的松检出浓度为2.0mg/g。地塞米松磷酸钠回收率为100.2%，氢化可的松回收率为98.8%，地塞米松回收率为为99.2%，醋酸氢化可的松回收率为为93.4%，醋酸可的松回收率为为97.0%，醋酸地塞米松回收率为94.3%，丁酸氢化可的松回收率为94.1%(n=3)。小结快速高效液相色谱法同时测定7种糖皮质激素，样品前处理操作简便，回收率高，色谱峰重现性好，分离速度快，能较好地应用于化妆品的监督检测工作。我们已经采用该方法进行了100余件检品的测定，结果令人满意。四 化妆品中11种磺胺类化合物残留量的快速高效液相色谱测定法研究1 仪器与试药Agilent 1200高效液相色谱仪，电子天平，超声仪，涡旋振荡器。磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异噁唑、磺胺-6-甲氧嘧啶、磺胺多辛、磺胺二甲氧嘧啶对照品（来源均为SIGMA-ALDRICH和Dr.Ehrenstorfer GmbH），甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯。2 样品来源化妆品共67批，来自市场抽验。3 色谱条件色谱柱：Agilent SBC18（1.8m，4.6mm50mm），Agilent Technologies；柱温：50。流动相A：甲醇冰醋酸溶液（0.25100）（15：85），流动相B：甲醇，梯度洗脱：06min，流动相A为100%；69 min，流动相A为40%。流速：1.5mLmin-1；检测波长：270nm；进样量：10L。4 线性关系试验分别称取一定量的磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异噁唑、磺胺-6-甲氧嘧啶、磺胺多辛、磺胺二甲氧嘧啶对照品，用流动相A溶解并配制成100gmL-1的溶液，作为标准储备液。吸取标准储备液适量，用流动相A稀释制成浓度分别为0.1、0.3、1.0、4.0、10.0、30.0、80.0、100.0gmL-1系列浓度的工作溶液。按上述色谱条件用高效液相色谱仪测定，以测得峰面积Y为纵座标，标准品溶液浓度X为横座标进行线性回归，色谱峰面积与浓度呈良好线性关系。磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异噁唑、磺胺-6-甲氧嘧啶、磺胺多辛、磺胺二甲氧嘧啶的相关系数均为1.000。5 加样回收率试验取未测出上述11种磺胺的化妆品作为空白样品，混匀后取样1.00g，分别向样品中添加一定量11种磺胺的标准储备液，加流动相A同样品处理，离心后取上清液过滤即得。结果平均回收率均为93%104%之间，RSD在0.3%2.4%之间。结果表明，该残留检测方法可靠，重现性好，精密度和准确度均能达到残留分析的要求。6 实际样品分析称取1.00g样品，加适量流动相A混匀，超声处理20分钟，高速离心。转移上清液过滤，进样测定。所得色谱图见图8。在67批样品中均未检测出11种磺胺。AB图8 标准溶液（A）、空白样品（B） （快速液相色谱法） 磺胺嘧啶；2. 磺胺噻唑； 磺胺吡啶； 磺胺甲基嘧啶； 磺胺甲噻二唑； 磺胺甲氧哒嗪；磺胺氯哒嗪； 磺胺甲基异噁唑； 磺胺-6-甲氧嘧啶； 磺胺多辛；磺胺二甲氧嘧啶图9 标准溶液色谱图（常规液相色谱法，分析时间长）7 最低检测限度试验将标准储备液分别加入空白样品中，按样品处理方法处理后检测，磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异噁唑、磺胺-6-甲氧嘧啶、磺胺多辛、磺胺二甲氧嘧啶的最小检测浓度分别为1.0gg-1，1.0gg-1，1.1gg-1，1.1gg-1，2.7gg-1，2.6gg-1，2.5gg-1，2.5gg-1，2.5gg-1，5.10gg-1，1.1gg-1。以上化妆品中四大类系物质的快速液相测定法完善和填补了化妆品卫生规范（2007年版）只有限度没有方法的空白，而且是针对市场监测的需求有的放矢进行的方法研究。另外我们还进行了化妆品中丙烯酰胺残留的LC/MS/MS的研究，化妆品中限用禁用物质的研究是一个系统工程，我们将在已完成工作基础上这项研究持续进行下去。参考文献1 谭庆梅. 全线阻击青春痘J. 中国化妆品，2004,4:88-91.2 王 蕾,张孝松,徐智秀,等.反相高效液相色谱法测定四环素类抗生素J. 色谱，2002,20(1):49-51.3 原永芳,石力夫,郑晓梅,等.HPLC同时测定护肤粉刺霜中4种有效成分的含量J. 中国药学杂志，1998,33(1):42-44.4 杨艳伟，朱 英，张卫强,等.化妆品中7 种抗生素及地塞米松磷酸钠和水杨酸的高效液相色谱测定法J. 环境与健康杂志,2006,23(3):264-266.5 化妆品卫生规范（2007年版）. 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