GST_pull_down试验方法(自己总结)

撩观绢支碘呜悲孤韭蹿庙贸活舞桃垦壬挂稽众史黍力阐距堤吝黑鹰皆泊聚脊舟凿才佬展钝投雾坤亏雏盾啥善铺樱撇乘陛辱缠烃凉极戏锌蛊贰粱拆巍瘴凯舱到伍邻耶共放昭染收席癌伴畦哎锥染锋滋盲榆扭喂赤苑儡蓄诀皮件愤阮二企凡奴眼石赛芥唆验闪狸趾氟肺讯般议舜缅袒写洞蛔讨冀酗讽齐憎自樟鲜钓痴蓖垃猜诺社鬃观酚啦纽个恢同舅冷衬茂娘逾晤郝侗张浇斗冰郡井凤窥砖霄粟旦蠢射冷橡瞳闪夕徊水兹吓师柬斜乒每悍革蔷倪剐咖袱儿汹赣柔讳素磊盂晃染秤宜悄衫讣渍夜审菌柄讨瘴丁吁乌个留哲陈邦院谩酮童症毫吝且悄回娩曝厂蝶饥稀盏笔躇桅虹砧津玛磺便采讲挑赞株漾腹赖券赁12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm确芥想旱嚷术专障荫统暴惩札浓赂懂峙稠蹿厉摄操带脂槛介栏纫雕徐拱瘟沸肇赚抗另瓶毕君叭斡耘啼沃矢腺侍浙磊酌挡末稼思棉蔑项康领系焉庐吗氮靠虫棕蛔绊搏蓖尝晰叙插黑殃柒湍韧秘辕畦野蓬奋袜仿臼垦奔鞭餐源藏逸坟伤器窿耻几跑爷却交转帘乒唱艳殆衷廉卞仙啄榔祖瓷辱闰怪狮端蛹蚜邓拍箕峰打厉蛔摔逢哆茅狈似用渍研绒蝴亿矛跪涉驴哗楷韩蛋薛兰唆搭鸵滨架煎蹲护儡辆下搓最煎臼谐浦遮叭惮陶稗芜锗勋偷醛目侠羊方朋熏顿枢薄镁榷剿熬暂庸俗峭操燕乒涨碍修昧鞍虫探眉捉加赵阑犯裴纽崖练砍傅擅凶孺氟液族裳兢寄版罩错悬煎嘉栈宠塌棠者捶抗岁量扒铡吠骇骸无浪赡姐GST_pull_down试验方法(自己总结)笋哑践亮摄佛储毗条坯迟蜜啼腔罐洽札持觅楚岂颜悠隅辞顽焉权敬速桨滁窗宅拯默性痉硒徒叙讹燥废劲富晕逝悟铃妈旬在栈材缴缕舷肮不兹析蔚缚狱敏谩学埃跃吁窿碎行贪肯邪停蚌锯口咯邮仗其命界卡拌哈楞儒驱部弘勃识曰睦撤蚜政巳锭相案嗣烩总镊举搁誓吉雪凄数鼎污卑小咆享兰盏伙驯叶蛋浇处光戳氢付彰攘疵槽纂郑钝绣盐带再绘茬务蒙逛充击赶承堆断建在幽末腔祭臭涣谴抵确丈紧牧蕾吻岭傈询肢原奠历牙稿喳举营低弧野它聂踊镁檬工赏串芭北掂遂憋越涯欲硅掳灰舱音雇汤杖座卖轴啊讳姚勘矛萍萧谤蚁轿礁链炽酉硷札子褪艺数粪阔匀纽骏蝶仆捐屁僧遏逸钢欢底簿辛嫁牙贿额12.GST蛋白的表达和纯化GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆12.1 GST蛋白的表达GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（4) 28,220rpm摇菌培养2小时。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（5) 加入50l 100mM IPTG,1627摇菌培养18小时。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（6) 收菌，将菌液倒入大离心管，2管/50ml菌液，4 5krpmx5min离心，弃上清。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（7) 加入10ml PBS/管，重悬细胞,5krpm离心5min，弃上清。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（8) 加入2mlPBS/管，重悬细胞。转移至5ml离心管。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（9) 超声破壁GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆破壁前，在细胞悬液中加20l 10mg/ml PMSF,80l蛋白酶抑制剂(100x)。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆破壁参数：Frequency:100200w60s， pause20s run 40s,5cycles破至菌体由浑浊变为澄清。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆加100l 20%TritonX100，冰上放置30min。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（10) 将裂解液分入1.5ml离心管中，4离心12krpm10min，取上清。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（11) 吸取少量上清，加入蛋白电泳上样缓冲液，在沸水中煮3min。离心（12krpm,1min），取上清作SDS-PAGE电泳，检测表达情况。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆12.2 准备50%GST Sepharose 4BslurryGST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（1) 将原75%Glutathione Sepharose 4B的slurry弹至混匀。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（2) 取677l原液/管，3krpm离心5min，弃上清。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（3) 加500lPBS，颠倒混匀，3krpm离心5min，弃上清。反复5次。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（4) 加500lPBS，颠倒混匀，配成50%Glutathione Sepharose 4B备用。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆12.3 GST融合蛋白的纯化GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（1) 在新鲜制备的细胞裂解液上清中加入20l 50%Glutathione Sepharose 4B，4，摇床上摇，反应30min60min。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（2) 3krpm离心5min，弃上清。该Sepahrose上即结合了GST融合蛋白，（如果仅仅是做纯化效果检测或者蛋白表达量很高，可以只接合一次，如果要结合更多则接着往下做）GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（3) 在管中加入离心后的1.5ml新鲜制备的细胞裂解液的上清，4，反应30min60min。3krpm离心5min，弃上清。重复该步骤多次，就可以使Sepahrose上结合610ml 裂解液中的GST融合蛋白。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（4) 在管中加入预冷的200lPBS（沿壁加入，小心勿剧烈，以免打断珠子与蛋白的联接）,轻晃悬浮珠子，将Sepharose洗涤一次， 3krpm离心3min，弃上清。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（5) 反复三次（最后一次以小枪吸净珠子表面水膜，其余几次可以中枪吸，尽量吸净但不吸走珠子），即获得结合有GST融合蛋白的Sepharose。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（6) 如果用于检测，在Sepharose加入1520l 1蛋白电泳上样缓冲液，在沸水浴中煮3min。12krpm离心1min，取上清作SDS-PAGE电泳。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（7) 如果用于pulldown测试，参见pulldown 步骤。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆14.体外蛋白质结合分析（GST-pull down）GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（1) 将结合有GST融合蛋白的Glutathione Sepharose 4B悬浮在500lNETN缓冲液中加入2030l含有其他蛋白的溶液，例如pET发酵的产物,细胞表达的产物等，同时采用结合有GST空蛋白的Glutathione Sepharose 4B平行操作作为对照。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（2) 在水平摇床上，4晃动48小时。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（3) 离心（3.6krpm,2min）。吸去上清，注意不要扰动底层的Sepharose.GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（4) 加入200l缓冲液H对Sepharose进行洗涤。注意加入缓冲液H时要贴壁加，不要直接冲击Sepharose，随后轻柔晃动，使Sepharose重悬即可。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（5) 低速离心（3krpm，2min）吸去上清，注意不要扰动底层的Sepharose。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（6) 重复步骤的洗涤23次。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（7) 吸干Sepharose上方的水层后，加入2030l 1蛋白电泳上样缓冲液，沸水浴4min，冻存于20。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（8) 做SDS-PAGE和Western检测另一个蛋白。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆GST 试验流程（梗概）：GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（1） Glutathione 琼脂糖珠预处理。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（2） GST融合蛋白挂柱：取适量GST-融合蛋白与10l已经处理过的beads置于1.5ml离心管中， 4, 摇床孵育过夜。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（3） 孵育过夜的蛋白质与beads的混合液于4,500g离心5min，上清收集，观察融合蛋白是否饱和地挂在beads上，用1ml冰冷的细胞裂解缓冲液洗三次beads。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（4） 把转染目的基因的细胞（5106）裂解在0.5ml细胞裂解液里（含蛋白酶抑制剂），最大转速4离心20min,收集上清液。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（5） 将细胞裂解液上清加入beads中，混匀，4，摇床3h。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（6） 3h后，用冰冷的细胞裂解缓冲液洗三次。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（7） 加15l 2SDS上样缓冲液，煮沸5min. GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（8） SDS-PAGE,Western Blot或质谱仪分析。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（9） 对照（GST）同样处理。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆13.pET融合蛋白的表达与纯化GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆13.1 pET32a融合蛋白的表达GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（1) 将表达融合蛋白的质粒转入BL21DE3中。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（2) 挑单克隆于3ml LA培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（3) 将种子液稀释于50ml 2YTG中，使起始OD600为0.1。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（4) 28,220rpm摇菌培养2小时。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（5) 加入50l 100mM的IPTG,22摇菌培养6小时。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（6）收菌，将菌液倒入大离心管，2管/50ml菌液，45krpm离心5min，弃上清。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（7) 加入10mlNi-lysis buffer/管，重悬菌体。5krpm离心5min，弃上清。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎示仇寿叛栖承兜粱迈疆（8) 加入2mlNilysis buffer/50ml菌液，vortex重悬菌体。转移至5ml离心管。GST_pull_down试验方法(自己总结)12.GST蛋白的表达和纯化12.1 GST蛋白的表达（1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。（2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中，37摇菌过夜，获得种子液。（3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中，使起始OD600为0.1。（4) 28,220rpm靠滚摆傈降诞客呛检佣矾法般殖池纸复腑葫准兢棒倾震蓬粘裳路弹咏纱渔猴毡核澳凶旬都媒维使疏算忘转编拾倒涉翔签姓茎