发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响.doc

发酵乳杆菌和凝结芽孢杆菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响 中国畜牧兽医2019!46 (10)2927-2936China AnimalHusbandry&Veterinary Medicine杆结杆菌对感染肉鸡生长性道的丨夏亿1,张元可1,徐晶云1,郭双双1!，丁斌鹰1!（1.武汉轻工大学，农副产品蛋白质饲料资源教育部工程研究中心，武汉430023；2.武汉轻工大学，动物营养与饲料科学湖北省重点实验室，武汉430023）摘要试验以产气荚膜梭菌感染肉仔鸡建立坏死性肠炎模型，研究发酵乳杆菌和凝结芽抱杆菌对感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响。 将336只1日龄爱拔益加肉仔鸡随机分成4个处理组，每个处理6个重复&4个处理组分别为对照组、感染组、感染+LF组（日粮添加1X109CFU/kg发酵乳杆菌）、感染+BC组（日粮添加1X1010CFU/kg凝结芽抱杆菌）&所有感染肉鸡在14*21d经口接种A型产气荚膜梭菌&试验期为28d&结果显示与对照组相比，灌服产气荚膜梭菌显著降低22*28d肉鸡的日均采食量（P&0.05）,显著增加28d十二指肠和空肠损伤评分（P&0.05）,显著提高21d肉鸡盲肠的产气荚膜梭菌和大肠杆菌数量，显著降低28d回肠产气荚膜梭菌数量（P&0.05）与感染组相比，日粮添加发酵乳杆菌显著提高21d肉鸡回肠的乳杆菌属数量（P&0.05）,显著降低21d盲肠大肠杆菌的数量（P&0.05）；日粮添加凝结芽抱杆菌显著降低28d肉鸡十二指肠损伤评分（?0.05）,显著降低21d十二指肠隐窝深度（P&0.05），显著提高21d空肠绒毛高度与隐窝深度的比值（P&0.05），显著降低21d肉鸡回肠和盲肠的大肠杆菌数量（P&0.05）,显著提高28d肉鸡回肠乳杆菌属数量（P&0.05）综上所述，日粮中添加发酵乳杆菌或凝结芽抱杆菌均对感染肉鸡的肠道微生物具有调控作用；其中添加凝结芽抱杆菌有利于肠道绒毛发育，缓解肠道损伤，一定程度上提高了肉鸡的生长性能，而发酵乳杆菌没有缓解肠道损伤的作用&关键词产气荚膜梭菌；肉鸡；发酵乳杆菌;凝结芽抱杆菌;肠道健康2019-02-23基金项目国家自然科学基金 （31702130）；湖北省重点科技创新计划（2018ABA110）；湖北省技术创新专项（重大专项）（xxABA121）作者简介夏亿（1992-），男，湖北黄冈人，硕士生，研究方向营养生化与代谢调控,E-mail736535663qq.*通信作者郭双双,E-mail:guolshuangshuang163.丁斌鹰,E-mail:dbying7471126.S816.7ADoi10.16431/j.ki1671-7236.2019.10.013开放科学（资源服务）标识码（OSID）:Effects ofLactobacillus fermentum and Bacillus coagulanson theGrowth Performanceand GutHealth ofBroilers Challenged with Clostridium perfringensXIA Yi1,ZHANG Yuanke1,XU Jingyun1,GUO Shuangshuang1，,DING Binying1，*(1.Engineering ResearchCenter onFeed ProteinResources ofAgricultural By-product,Ministry ofEducation,Wuhan PolytechnicUniversity,Wuhan430023,China；2.Hubei KeyLaboratory of Animal Nutrition and FeedScience,Wuhan PolytechnicUniversity,Wuhan430023!China)AbstractInthepresentstudythenecroticenteritisofbroilerchickenswasinducedwiththechal-lenge of Clostridium perfringens,and theeffects ofLactobacillus fermentumand Bacilluscoag ulanson the growth performance and intestinalhealth ofthe infected birds wereinvestigated.A2928中国畜牧兽医46total of3361-day-oldArbor Acreschickswere randomlyassignedinto4groupswith6replicates pergroup,the controlgroup,challenge group(infected with Clostridium perfringens)#challenge!LF andchallenge+BC groups(infectedbirdsfed dietssupplemented withLactobacillus fermentum(1X109CFU/kg diet)and Bacillus coagulans(1X1010CFU/kg diet),respectively).All thein fectedbroilers wereinoculated with Clostridium perfringenstype Aduring14-21d,and theex periment lasted for28d.Compared withthe controlgroup,the pathogenchallenge significantly decreased thedaily feedintake during22-28d(P V0.05),increased the duodenal andjejunal lesion scoresat28d(P V0.05),as wellas thececal contents ofClostridium perfringens andEsch erichia.coli at21d(P V0.05),and decreasedileal Clostridium perfringens at28d(P V0.05).Comp6redwiththech6l engegroup,diet6rysupplement6tion withLa5toba5i l usfermentum significantly increased the ilealcontentsofLactobacillus spp.at21d(P V0.05),a nddecreased cecalcontent ofEscherichia coliat21d(P V0.05).Dietary supplementationof Bacillus coagulans significantlydecreasedtheduodenallesion scoreat28d andduodenal crypt depth at21d(P V0.05),increasedthejejunal ratioof villusheight tocryptdepthat21d(P V0.05),reduced Esch-erichia.coli contentintheileumandcecumat21d(P V0.05),andincreased Lactobaci l us spp.in theileumat28d(P V0.05).Insummary,dietarysupplementationof Lactobaci l usfermentumandBacil uscoagulanshad modulatorye fects onintestinal microflorain Clostridiumperfrin-gens-infectedbroilers.Morever,the Bacil uscoagulansbenefitedthedevelopmentofintestinalvil-li,a leviatedtheintestinalinjury,andimprovedthegrowthperformanceofbroilerstosomeex-tent,while Lactobacil usfermentumdidnotexhibita leviativee fects.Key wordsClostridium perfringens%broiler；Lactobacillus fermentum；Bacillus coagulans；gut health坏死性肠炎又称肠毒血症，是主要由产气荚膜梭菌引起的肠道传染病。 产气荚膜梭菌是一种广泛存在于动物肠道中的革兰氏阳性菌，属于肠道的固有菌群。 当肉鸡受到外源性产气荚膜梭菌感染后,产气荚膜梭菌能在肠道快速繁殖，通过分解肌肉组织中的糖产生大量气体,导致组织肿胀，影响血液循环,造成组织大面积坏死，而病原菌侵入机体快速繁殖并产生大量的外毒素a毒素和NetB毒素，这些毒素是导致鸡死亡的直接原因*12+&急性坏死性肠炎可直接导致鸡群大量死亡，慢性坏死性肠炎导致肉鸡肠道消化吸收功能降低，严重影响生产效益发酵乳杆菌为革兰氏阳性乳酸杆菌，是肠道固有菌群之一，发酵可产酸，降低肠道pH,为肠道有益菌的增殖创造有利环境，同时具有较强的黏附性和耐受性，易在肠道定植。 凝结芽抱杆菌为同型乳酸发酵菌能能产抱子，且有较强的抗逆性能能适应胃部环境而到达肠道发挥益生作用，可产生L-乳酸和多种消化酶有助于肠道消化吸收，分泌益菌素等生物活性物质抑制有害菌的生长，同时代谢产生氨基酸、维生素、短链脂肪酸等营养物质供宿主利用目前，有关凝结芽抱杆菌在促生长，改善肠道菌群环境,促进肠道发育，缓解禽畜应激等方面的益生作用均有报道，而关于发酵乳杆菌在禽畜饲料中应用的报道相对较少，且多集中在其黏附性和对免疫的影响。 本试验在日粮中添加发酵乳杆菌和凝结芽抱杆菌，探究其对产气荚膜感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响，为益生菌在实际生产中的应用提供理论依据&1材料和方法1.1材料A型荚菌(Clostridium perfringensCVCC2030)购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心；发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum1.2029)购自中国普通微生物菌种保藏中心，由实验室发酵后，经白炭黑吸附制成，活菌数为1X109CFU/g；凝结芽抱杆菌(Baci(uscoa gu(ans)技术有限公司提供，活菌数为1X10CFU/g。 1.2试验动物及日粮试验采用单因素设计，将336只1日龄爱拔益加肉仔鸡随机分成4个处理组，每个处理6个重复,每个重复14只鸡，公、母各半&4个处理组分别为10夏亿等发酵乳杆菌和凝结芽抱杆菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响2929对照组、产气荚膜梭菌感染组、感染+LF组、感染+他所有感染肉鸡从14*21日龄连续经口接种培养BC组，对照组和感染组肉鸡均饲喂基础日粮，感染16h的A型产气荚膜梭菌新鲜菌液（1X+LF组日粮在基础日粮中添加1C109CFU/kg发108CFU/mL），每只鸡每天接种1mL。 !对酵乳杆菌日粮，感染+BC组日粮在基础日粮中添加组肉鸡灌喂1mL不含产气荚膜梭菌的肉汤培养1X1010CFU/kg凝结芽抱杆菌。 产气荚膜梭菌的感基&试验期为28d。 基础日粮的配制参照中国鸡饲染方式参考Du等*建立的方法，除对照组以外，其养标准 （xx），日粮组成和营养水平见表1&表1基础日粮组成和营养水平（风干基础）Table1Composition andnutrient levelof basaldiet(air-dried basis)%料含量Contents营养水平含ContentsIngredients0*21d22*28d Nutrientponents0*21d22*28dBarley26.0010.00代谢能ME/(MJ/Kg)12.3513.19豆粕Soybean meal33.7929.80粗蛋白CP21.5019.50玉米Corn25.0044.44氨酸Lys1.211.09Soybeanoil6.287.49蛋氨酸Met0.590.43鱼排粉Fish spareribmeal5.005.00Ca1.000.90磷酸氢钙Dicalcium phosphate1190.55有效磷AP0.450.35石粉Limestone1.141.30食Sodiumchloride0.350.35DL-蛋氨酸DL-Methionine0.250.1250%氯化胆碱50%Choline Chloride0.250.20微量元素预混料Trace mineral premix0.200.20维生素预混料Vitamin premix?0.050.05沸石粉Zeolite powder0.500.50微量元素预混料为每千克日粮提供:猛100mg；锌75mg；铁80mg；铜8mg；碘0.35mg；硒0.15mg&维生素预混料为每千克日粮提供维生素A12500IU潍生素D32500IU；维生素E30IU；维生素K a2.65mg；维生素B】2mg；维生素B26mg；维生素Bi?0.025mg；生物素0.0325mg；叶酸1.25mg；烟酸12mg；尼克酸50mgThe tracemineralpremixprovided thefollowing forper kgof dietMn100mg；Zn75mg；Fe80mg；Cu8mg；I0.35mg；Se0.15mg.Vitamin premixprovided thefollowing forper kgof dietVA12500IU；VD32500IU；VE30IU；VK32.65mg；VB12mg；VB26mg；VB120.025mg；Biotin0.0325mg；Folicacid1.25mg；Niacin12mg；Nicotinicacid50mg1.3饲养管理肉鸡采用网上平养，每笼14只&试验前将鸡舍、鸡栏、料槽、饮水器等彻底清洗消毒，并对鸡舍整体进行熏蒸消毒&肉鸡自由采食和饮水，24h光照；定期打扫并消毒。 试验第1周鸡舍温度控制在32*34，第2周在30*32，第3周至试验结束鸡舍温度控制在25左右。 鸡舍湿度为50%*60%&1.4样品采集在试验第21和28天，从每个重复随机抽取1只公鸡和1只母鸡，颈动脉放血致死后在无菌条件下打开腹腔，取十二指肠、空肠、回肠中段各1cm于预冷的4%多聚甲醛中固定&固定肠道组织样送往武汉博士德公司生物工程有限公司制作HE染色切片。 另取回肠和盲肠食糜，置于无菌离心管中，液氮速冻后于一80冰箱保存待测&1.5测定指标与方法1.5.1生长性能肉鸡14,21和28日龄清晨，以重复为单位测定肉鸡的空腹体重，记录阶段采食；0* 14、15*21和22*28d肉的日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。 1.5.2肠道损伤评分纵剖十二指肠、空肠和回肠，观察肠道的损伤情况；根据Liu等*描述的0*3分肠道损伤评分标准对小肠黏膜损伤进行评价&0分没有肉眼可见肠道损伤；1分偶见损伤;小面积的糜烂、坏死、出血；2分轻微肉眼可见损伤，小面积充血，或者每5cm有1?2处坏死;3分中等但不致死的损伤，大面积的损伤（每5cm*2930中国畜牧兽医462处坏死)&1.5.3肠道形态的测定肠道组织切片用OLYMPSBX-41TF型光学显微镜观察，在电脑上用HPISA-1000高清晰彩色病理图文报告分析系统进行拍照；每张切片选择10个走向平直且完整的绒毛，测量所选绒毛高度及其对应的隐窝深度并计算绒毛高度与隐窝深度的比值，取10根绒毛数据的平均值作为此切片的最终测量值&1.5.4肠道微生物的测定根据QIAamp?Fast DNAStool MiniKit(QIAGEN,Germany)所述方法提取肉鸡回肠和盲肠食糜的总DNA。 利用NanoDrop2000超微量核酸蛋白测定仪测定所提取DNA浓度及纯度,D260n m/D280n m值为17*1.9表示DNA纯度较好；统一调整回肠食糜DNA为50ng/L,调整盲肠食糜DNA为25ng/L,再采用实时荧光定量PCR方法进行检测&针对16S rDAN基因序列设计引物，参照Du等方法设计实时荧光定量PCR扩增的引物序列(表2)。 PCR反应体系为20LSYBR PremixEx T2iq(Tli RNaseHPlus)(2X)10L,ROX referencedye$(50X)0.4L,DNA2L、上、下游引物(10gmol/L)各0.4L,RNase-free dH2O6.8L。 使用Applied Blosystems7500Real-timePCR进行,个样品3个重复，反应条件为95C预变性30s；95C变性5s,60退火34s,共40个循环。 采用2_#Ct法计算各基因相对表达量，以总菌为内参，各基因的相对表达量通过归一法以相对于对照组的表达量表示。 表2实时荧光定量PCR引物序列信息Table2Primer sequencesinformation forReal-time quantitativePCR项目Items引物序列Primer sequences(53)片段大小Productlength/bp总菌TotalbacteriaFACTCCTACGGGAGGCAGCAGTRGTATTACCGCGGCTGCTGGCAC200产气荚膜梭菌Clostridium perfringensFAAAGATGGCATCATCATTCAACRTACCGTCATTATCTTCCCCAAA279大肠杆菌Escherichia coiiFGTTAATACCTTTGCTCATTGARACCAGGGTATCTAATCCTGT340乳杆菌属Lactobacillus spp.FAGCAGTAGGGAATCTTCCARCACCGCTACACATGGAG3411.6数据分析试验数据采用SPSS21.0进行统计分析，肠道损伤评分的数据采用卡方检验进行分析，其他数据采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)及邓肯氏法进行多重比较，试验结果以平均值士标准差表示，P V0.05为差异显著&2结果2.1益生菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡生长性能的影响由表3可知，在0*14和15?21d,各组肉鸡的生长性能均无显著差异&在感染期间(15*21d),与对照组相比，感染组的平均日增重和平均日采食量分别降低了3.11%和4.17%(P0.05)；与感染组相比，感染+LF组上述指标分别提高了3.21%和2.00%(P0.05),感染+BC组分别提高了2.80%和3.49%(P0.05)。 在试验22?28d,与对组，感组的日食显著降(P V005)。 2.2益生菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡肠道损伤评分的由表4可知，在21d,各组肠道损伤评分均无显著差异&在28d,与对照组相比，感染组的十二指肠和空肠损伤评分均显著提高(P V0.05)；与感染组相比，感染+BC组十二指肠损伤评分显著降低(P V0.05)。 2.3益生菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡肠道形态结的表5，与对组，感组各形态结构均无显著差异&在21d,与感染组相比，感染+BC组的十二指肠隐窝深度显著降低(P V0.05),绒毛高度与隐窝深度比值有增加的趋势(P=0.080)。 与对组!感+BC组的隐窝度显著降低(P V0.05),绒毛高度与隐窝深度比值显著升高(P V0.05)。 两种益生菌对感染肉鸡28d肠道形态均无显著影响(P0.05)。 10夏亿等发酵乳杆菌和凝结芽抱杆菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响2931表3益生菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡生长性能的影响Table3Effect ofprobiotics onthe growth performance of broilers challenged with Clostridium perfringens时间Time/d项目Items对照组Controlgroup感组Cha l engegroup感+LF组Cha l enge+LFgroup感+BC组Cha lenge+BCgroup0*14AW/g43887+22.78429.07+17.14436.68+14.79445.78+16.75平均日增重ADG/(g/d)2836+1.6227.68+1.2128.21+1.0628.84+1.20平均日采食量ADFI/(g/d)35.97+1.5035.38+0.8135.82+0.7536.21+1.75料重比f/g1.27+0.031.28+0.051.27+0.051.26+0.0715*21AW/g881.98+40.23858.23+41.38879.95+22.93887.08+32.96日ADG/(g/d)63.30+4.3461.33+4.9963.30+3.0563.05+3.57日食ADFI/(g/d)85.12+4.7781.57+6.4183.20+3.5784.42+3.71料F/G1.35+0.061.33+0.071.32+0.061.34+0.0322*28AW/g1409.97+55.181360.87+55.521344.48+16.181389.58+45.13日ADG/(g/d)75.43+5.21a71.72+6.13ab66.37+4.86b71.78+3.03ab日食ADFI/(g/d)123.55+5.87a113.07+7.49bc112.12+4.10c119.27+4.42ab料F/G1.64+0.051.58+0.071.69+0.091.66+0.06同行数据肩标不同字母表示差异显著(P V0.05)；肩标相同字母或无字母标注表示差异不显著(P0.05)&下同In the same row,values withdifferent lettersuperscripts meansignificant difference(P V0.05)；While withthesameor nolet tersuperscripts meanno significantdifference(P0.05).The sameas below表4益生菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡肠道损伤评分的影响Table4Effects ofprobiotics onintestinal lesionscore of broilers challenged withClostridium perfringens间项目对组感组感+LF组感+BC组Time/d ItemsControlgroup Cha lengegroupCha lenge+LFgroup Cha lenge+BCgroup21Duodenum1.331.581.001.17空肠Jejunum1.251.331.331.42回肠Ileum1.501.001.080.7528Duodenum0.83b2.08a1.33止0.67bJejunum1.25b2.33a167止1.33止回leum0.921.421.331.00表5益生菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡肠道形态结构的影响Table5Effects ofprobiotics onintestinal morphology of broilerschallenged withClostridium perfringens间Time/d项目Stems对组Controlgroup感组Cha lengegroup感+LF组Cha lenge+LFgroup感+BC组Cha lenge+BCgroup21Duodenum绒毛高度Villus height/m1220.29+108.181129.59+140.281178.06+158.501187.81+90.46隐窝深度Crypt depth/m94.75+11.33a94.35+13.32a88.21+10.30ab79.13+13.85b绒毛高度/隐窝深度V/C13.86+1.2112.97+2.9314.13+2.4716.02+3.59Jejunum绒度Vi l usheight/m834.90+140.95838.90+82.29867.64+146.88799.06+91.82隐窝度Cryptdepth/m89.62+22.97a82.16+22.36ab76.91+12.02ab66.64+13.49b绒度/隐窝度V/C10.09+1.42c11.52+1.49bc12.36+1.61ab13.25+2.32a回Sleum绒度Vi lusheight/m542.70+102.49479.11+100.13470.77+73.02524.16+60.50隐窝度Cryptdepth/m87.91+21.9385.19+15.1980.67+21.9589.49+17.28绒度/隐窝度V/C6.55+0.995.88+1.106.23+0.826.29+1.182932中国畜牧兽医46续表时间Time/d项目Items对照组Controlgroup感染组Cha lengegroup感+LF组Cha lenge+LFgroup感+BC组Cha lenge+BCgroup28Duodenum绒毛高度Villus height/m1155.55土159731270.35土136.58125289土11274124078土11124隐窝深度Crypt depth/m9449士11729470土171493.11土17.9482.55土12.45绒毛高度/隐窝深度V/C1369士3551512土4001400土25315.76土290空肠Jejunum绒毛高度Villus height/m916.19士14852895.93土1485378221土10373827.59土14491隐窝深度Crypt depth/m7885土9097712土11488033土13298055土1310绒度/隐窝度V/C12.18土2.231190土1471032土20410.90土178回Ileum绒度Vi lusheight/m545.86土57.3551702土7579512.68土8826494.75土62.15隐窝度Cryptdepth/m8005土8867900土80479.18土13.357864土12.85绒度/隐窝度V/C7.09土1016.58土98665土1006.34土1082.4益生菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡肠道微生物数量的影响由表6可知，在21d,与对照组相比，感染组肉鸡盲肠产气荚膜梭菌和大肠杆菌数量显著增加(P&0.05)；与感染组相比，感染+LF组肉鸡盲肠大肠杆菌数量显著降低(P0.05),回肠的乳杆菌属数量显著提高(P0.05)，感染+BC组肉鸡回肠和盲肠的大肠杆菌数量显著降低(P0.05)。 在28d,与对照组相比，感染组肉鸡回肠产气荚膜梭菌数量显著降低(P0.05),盲肠产气荚膜梭菌数量有提高的趋势(P=0.070)，而大肠杆菌数量有降低的趋势(P=0.080)；与感染组相比，感染+BC组肉鸡回肠乳杆菌属数量显著提高(P&0.05),两个益生菌添加组肉鸡盲肠产气荚膜梭菌数量均有降低的趋势&表6益生菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡肠道微生物数量的影响Table6Effect ofprobiotics onintestinal microfloraofbroilerchallengedwithClostridium perfringens间Time/d项目Items对组Controlgroup感组Cha lengegroup感+LF组Chalenge+LFgroup感+BC组Chalenge+BCgroup21回Ileum荚菌C(ostridiumperfringens1.19土74b2844土4529ab7.78土846b6040土5650a杆菌Escherichiaco(i1.26土101a1.52土102a1.06土105几023土042b杆菌属Lactobaci(us spp116土063ab0.60土115b2.53土178a103土170b盲Caecum荚菌C(ostridiumperfringens177土223b245.98土20846a10490土6465ab243.68土236.98a杆菌Escherichiaco(i162土195b475土283a2.62土150b1.99土110b杆菌属Lactobaci(us spp1.35土81a069土082ab089土066ab024土026b28回Ileum荚菌C(ostridiumperfringens1.52土114a021土006b059土065b028土022b杆菌Escherichiaco(i2.36土2545.91土9721115土18.142390土3520杆菌属Lactobaci(us spp1.38土110b073土083b2030土2758b56.79土67.52a盲Caecum荚菌C(ostridiumperfringens163土1587.09土10.251.12土991.11土91杆菌Escherichiaco(i1.17土89035土031068土067077土069杆菌属Lactobaci(usspp131土090820土7801148土18931024土176210夏亿等发酵乳杆菌和凝结芽抱杆菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡生长性能和肠道健康的影响29333讨论3.1益生菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡肠道损伤的影响产气荚膜梭菌作为“肉食厌氧菌”，主要通过分解宿主组织来获取自身繁殖所需物质，其中甘氨酸是产气荚膜梭菌生长的一种重要物质，而鱼粉中甘氨酸含量较其他氨基酸高。 大麦可增加日粮黏性,延长食糜在肉鸡肠道中的存留时间89&本试验通过在日粮中添加大麦和鱼粉来促进产气荚膜梭菌在肉鸡肠道中繁殖，诱导亚临床症状坏死性肠炎的发生&已有报道表明，肉鸡在感染产气荚膜梭菌后，在菌群聚集的肠段产生出血、溃烂、化脓，严重时甚至发生穿透等肉眼可见的损伤&其损伤机理主要是产气荚膜梭菌在肠道产生的a-毒素和NetB-毒素侵蚀肠上皮细胞，产生胶原蛋白酶破坏黏膜蛋白结构，产生细菌素抑制同源菌的生长来加速自身繁殖，进而形成对肠道的损伤2&本试验发现，对照组肉鸡的肠道损伤评分也较高，这有可能是因为日粮因素导致肠道固有产气荚膜梭菌的增殖造成&在感染期间(14?21d),灌服产气荚膜梭菌3*6h后，部分灌服肉鸡会出现口吐黏液和死亡的情况，解剖死亡肉鸡可见肠道基本无重度坏死性肠炎模型症状，推测是菌液中细菌所产毒力因子造成死亡&Liu等*10+的研究结果也表明，在结束产气荚膜梭菌灌服的第2天，也未发现严重程度的肠道损伤&在Cao等*11+研究结果中，结束感染1周后，感染组肠道损伤较明显，且显著高于对照组&而本试验在感染结束后(21d),各组间肠道损伤评分没有显著差异，28d时感染组十二指肠和空肠的损伤评分显著升高，这表明产气荚膜梭菌造成的肠道损伤滞后于细菌的定植，且日粮中添加凝结芽抱杆菌能有效修复受损的肠道。 凝结芽抱杆菌可通过分泌多种细菌素、类细菌素物质和乳酸抑制肠道病原菌的生长，促进双歧杆菌和乳杆菌等有益菌的增殖，发挥肠道益生作用1213，还能促进肠道消化，其代谢产生氨基酸、维生素、短链脂肪酸等营养物质为肠道提供良好的营养和微生态环境促进肠道修复&3.2益生菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡肠道形态结的肠道是营养物质消化吸收的主要场所，肠道形态结构与肠道功能紧密相关。 肠道形态结构的发育程度可用绒毛高度、隐窝深度、绒毛高度与隐窝深度比值来衡量，其中绒毛高度越高说明成熟绒毛上皮细胞越多，肠道吸收功能越好%隐窝与肠上皮细胞产生速率有关，正常情况下隐窝基层的细胞不断分化产生新的细胞，这些细胞会向绒毛顶端迁移,形成具有吸收功能的上皮细胞，隐窝深度降低时，产生上皮细胞的速率则会加快，从而影响肠道吸收功能；绒毛高度与隐窝深度的比值反映小肠的功能状态，该值降低表示小肠的肠黏膜受损，吸收功能下降,物质转运受到影响，该值上升表明肠黏膜得到改善,肠道消化吸收功能得到恢复*14&孙焕林等*15+研究发现，凝结芽抱杆菌可有效增加黄羽肉鸡小肠绒毛高度，降低隐窝深度&谢丽曲等*6+发现，凝结芽抱杆菌杆菌对肉鸭十二指肠绒毛发育有促进作用&王政等*17+研究结果表明，凝结芽抱杆菌有助于恢复攻毒后肉鸡空肠形态结构&Hung等研究表明，凝结芽抱杆菌代谢产物能促进肠道健康&本试验结果表明,结芽抱杆菌能感肉21d和形态的发&结芽抱杆菌有抱的能力，在复杂的胃肠道环境中可顺利到达肠道，通过产生抑菌物质、酶和营养物质调节肠道微生态环境，增强肠道消化和吸收功能，缓解损伤保护肠黏膜的完整性，促进肠绒毛的发育&3.3益生菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡肠道微生物数量的影响Liu等*19+研究表明，在感染结束后第1天(21d),肉鸡回肠产气荚膜梭菌数量比感染后第7天(28d)高&宫秀燕等*0+研究证明，产气荚膜梭菌和球虫混合感染显著增加了肉鸡盲肠产气荚膜梭菌和大肠杆菌数量,显著降低盲肠乳酸菌数量;在日粮添加凝结芽抱杆菌后肉鸡盲肠产气荚膜梭菌及大肠杆菌数量显著降低&赵娜等*1+研究表明，凝结芽抱杆菌有降低肉鸡回盲肠食糜大肠杆菌数量，增加凝结芽抱杆菌数量的作用&郭元晟研究表明，饲喂发酵杆菌对肉微有显著影响!提高总厌氧菌和乳酸菌数量，降低大肠杆菌和产气荚膜梭菌的数量&Liu等研究发现，给仔猪饲喂发酵乳杆菌I5007可降低仔猪结肠梭菌数量&本试验结果与上述研究结果基本一致，在产气荚膜梭菌感染后，肉鸡肠道产气荚膜梭菌数量明显增加，表明通过灌喂的方法达到了建立坏死性肠炎模型的目的&日粮添发酵杆菌在一定度上制21d回肠和盲肠产气荚膜梭菌的增殖，而凝结芽抱杆菌抑制了21d回肠和盲肠大肠杆菌的数量，增加了28d回肠乳杆菌属的数量，两种益生菌都有降低28d盲肠产气荚膜梭菌数量的趋势&发酵乳杆菌是2934中国畜牧兽医46肠道固有益生菌的重要组成*4+，可能在感染期间通过竞争抑制了产气荚膜梭菌的定植，而凝结芽抱杆菌在肠道上皮细胞黏附性较弱，只能在肠道内短暂定植，一次性口服凝结芽抱杆菌后,4*7h后便会随着排便消失*5+,因此在感染初期对产气荚膜梭菌的抑制作用不如发酵乳杆菌。 相较于感染初期(21d),28d肠道产气荚膜梭菌的数量明显减少，凝结芽抱杆菌的作用效果优于发酵乳杆菌，这与凝结芽抱杆菌缓解28d肠道损伤的结果相符&3.4益生菌对产气荚膜梭菌感染肉鸡生长性能的影响益生菌作为一种新型的饲料添加剂，可改善肠道环境，促进动物生长，提高禽畜饲养的经济效益&Hung等*18研究发现，日粮添加凝结芽抱杆菌ATCC7050可有效提高肉鸡饲料转化率。 本试验结果表明，在灌服产气荚膜梭菌期间，添加凝结芽抱杆菌和发酵乳杆菌对日增重和采食量均有所提高(没有达到差异显著的水平)，这与Wu等*6+研究结果相同&在本试验的第3阶段(22*28d),添加凝结芽抱杆菌有增加采食量的趋势，这可能是肠道损伤被逐渐修复引起的。 但添加发酵乳杆菌肉鸡的生长性能没有改善，甚至比感染组更差，这表明发酵乳杆菌对坏死性肠炎模型肉鸡的肠道损伤修复作用较差。 目前国内外有关发酵乳杆菌的研究报道主要集中在发酵乳杆菌在肠道黏附性、抑菌效果及免疫方面的作用，针对禽畜生长性能影响的研究较少&Capcarova等*门在饮水中添加发酵乳杆菌发现，该处理能提高肉鸡生长后期(39d)增重，但对前期生长无影响。 付果花研究表明，一定添加量的发酵乳杆菌可以提高肉鸡生长性能，但过高或过低的添加量会导致增重效果减弱&也有研究表明乳杆菌对肉鸡生长没有促进作用*9+。 试验结果的差异可能与益生菌添加剂的添加剂量、添加方式及菌株的选择有关。 肠道受损必然影响机体对营养物质的吸收，而损伤的肠道需要细胞的增殖和迁移来修复伤口30，有报道指出，肠内营养支持对应激情况下肠道屏障功能的防护至关重要31&发酵乳杆菌主要利用碳水化合物发酵产酸32，对肠道的修复作用不佳可能与发酵乳杆菌大量增殖改变肠内营养组成有关&4结论日粮中添加发酵乳杆菌和凝结芽抱杆菌均对产气荚膜梭菌感染肉鸡的肠道微生物具有调控作用&但添加凝结芽抱杆菌有利于肠道绒毛发育，缓解肠道损伤，在一定程度上提高了肉鸡的生长性能，而发酵乳杆菌没有表现出缓解肠道损伤的作用&参考文献(References):1+TIMBERMONT L,LANCKRIET A，PASMANS.F，et al.Intra-species growth-inhibition by Clostridiumperfringens,is apossible virulencetrait innecrotic enteritis in broilersJ.Veterinary Microbiology,xx,137 (3):388-391.:2+王佰魁，徐歆，毛予龙，等?禽类坏死性肠炎发病机理的研究进展*+中国畜牧杂志,016,2 (23):103-107.WANG BK,YU X,MAO YL,et lResearch progress onthe pathogenesisof aviannecrotic enteritis*.Chinese Journal of Animal Science,xx?52 (23)103-107$(inChinese)3+KALDHUSDAL M,HOFSHAGEN M.Barley inclu-sionandavoparcinsupplementationinbroilerdiets:2$Clinical，pathological，andbacteriologicalfindingsina mildform ofnecrotic enteritisJ.Poultry Science,1992，71 (7):1145-1153$4+GU SB,ZHAO LN,WU Y,tlPotential probioticattributes ofa newstrain of Bacillus coagulansCG-MCC9951isolated fromhealthy pigletfecesJ.World Journal of Microbiologyand Biotechnology,xx，31 (6):851-863.5KH A,SHEKARFOROUSH SS,SAJEDIANFARD J,etal.Thee f ectsofprobiotic，prebioticandsynbiotic dietscontaining Bacillus coagulans andinulin onrat intestinalmicrobiota.J.Iranian Journal of Veterinary Research,xx,16 (3)267-273.6DU E,GAN L,LI Z,et alIn vitroantibacterial activ-ityofthymolandcarvacrolandtheire 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