原料药物ACTD格式.doc

目目 录录 3 2 S 1 基本信息基本信息 3 3 2 S 1 1 药品名称 3 3 2 S 1 2 结构 3 3 2 S 1 3 理化性质 3 3 2 S 2 生产信息生产信息 4 3 2 S 2 1 生产商 4 3 2 S 2 2 生产工艺和过程控制 5 3 2 S 2 3 物料控制 20 3 2 S 2 4 关键步骤和中间体的控制 41 3 2 S 2 5 工艺验证和评价 60 3 2 S 2 6 生产工艺的开发 67 3 2 S 3 特性鉴定特性鉴定 97 3 2 S 3 1 结构和理化性质 97 3 2 S 3 2 杂质 104 3 2 S 4 原料药的质量控制原料药的质量控制 115 3 2 S 4 1 质量标准 116 3 2 S 4 2 分析方法 116 3 2 S 4 3 分析方法的验证 130 3 2 S 4 4 批检验报告 210 3 2 S 4 5 质量标准制定依据 211 3 2 S 5 对照品对照品 223 3 2 S 6 包装材料和容器包装材料和容器 228 3 2 S 7 稳定性稳定性 229 3 2 S 7 1 稳定性总结 229 3 2 S 7 2 上市后稳定性承诺和稳定性方案 230 3 2 S 7 3 稳定性数据 231 药物药物 A 药学研究资料药学研究资料 3 2 S 1 基本信息基本信息 3 2 S 1 1 药品名称药品名称 通用名称 英文名称 化学名称 英文化学名 汉语拼音 CAS 登录号 3 2 S 1 2 结构结构 结构式 分子式 分子量 结构说明 晶型 无水合物为单一晶型 另外还存在水合物 我们开发的为水合物晶型 3 2 S 1 3 理化性质理化性质 相关理化性质表述及来源见表 3 2 S 1 3 1 表 3 2 S 1 3 1药物 A理化性质表述及来源 项目名称性质来源 性状白色至浅黄色结晶性粉末多批供试品的检测结果 引湿性无引湿性多批供试品的检测结果 熔点多批供试品的检测结果 溶解度 在二甲基亚砜中易溶 在甲醇或无水醋 酸中微溶 在水中几乎不溶 多批供试品的检测结果 晶型单一晶型 国内外文献报道 多批供试品检测结果 粒度 制剂工艺要求 多批供试品的 检测结果 分配系数 无相关报道 解离常数 无相关报道 3 2 S 2 生产信息生产信息 3 2 S 2 1 生产商生产商 生产商 地址 电话 传真 邮编 生产场所 电话 3 2 S 2 2 生产工艺和过程控制生产工艺和过程控制 本工艺包括四步反应 两次精制 第一步 XX 为起始原料 以三氯甲烷为溶剂 二甲基甲酰胺为催化剂 使用酰 氯进行氯代得到药物 A氯代物 过渡中间体 第二步 药物 A氯代物在异丙醇溶剂中与苯胺进行芳胺的亲核取代得到药物 A氨 化物 中间体 C 第三步 药物 A氨化物在甲醇溶剂中与氢氧化钠发生水解反应 脱保护基得到药 物 A水解物 中间体 D 第四步 药物 A水解物在溶剂甲基甲酰胺中与吗啡啉 碘化钾作用进行醚化反应 得到药物 A粗品 一次精制 首先药物 A粗品在醋酸溶液中成盐 然后在水中用碳酸钠水溶液回碱 得到药物 A一次精制物 二次精制 药物 A一次精制物经过醋酸重结晶得到药物 A产品 3 2 S 2 2 1 工艺流程图 工艺流程图 1 化学反应流程图 化学反应流程图 N N O O N O H3C HN F Cl N NH O O H3C O N N HO O HN F Cl H3C N O Cl N N O O HN F Cl H3C CH3O N N O O Cl H3C CH3O OCH3 一 一 一 DMF 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 DMF 一 一 一 一 一 一 N N O O N O H3C HN F Cl 一 一 一 一 1 H2N F Cl 一 一 2C11H9ClN2O3 Mol Wt 252 65 C6H5ClFN Mol Wt 145 56 C17H13ClFN3O3 Mol Wt 361 75 C15H11ClFN3O2 Mol Wt 319 72 C7H14ClNO Mol Wt 163 65 C22H24ClFN4O3 Mol Wt 446 9 C11H10N2O4 Mol Wt 234 21 一 一 3 一 一 4 一 一 一 一 一 一 一 NaHCO3一 一 一 一 一 一 6 一 一 一 一 4 一 7 一 一 一 一 一 一 4 一 3 一 4 一 一 一 一 7 一 一 一 一 一 一 6 一 一 一 一 3 一 4 一 一 一 N 3 一 一 一 一 一 一 一 4 一 3 一 4 一 一 一 一 7 一 一 一 一 一 一 6 一 N 3 一 4 一 一 一 7 一 一 一 6 一 3 一 一 一 一 一 一 一 一 一 4 一 N N O O N O H3C HN F Cl C22H24ClFN4O3 Mol Wt 446 9 N 3 一 4 一 一 一 7 一 一 一 6 一 3 一 一 一 一 一 一 一 一 一 4 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 3 4 一 一 7 一 一 一 4 一 一 一 一 一 6 一 一 一 一 一 一 一 1 一 一 一 2 一 一 一 3 一 一 一 4 SM1 一 一 一 一 一 一 一 过渡中间体 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 一 图 3 2 S 2 2 1 化学反应流程图 步骤 1 三氯甲烷 草酰氯 DMF 回流 步骤 2 异丙醇 40 60 步骤 3 氢氧化钠 甲醇 40 60 步骤 4 DMF 碳酸钾 碘化钾 80 90 一次精制 无水醋酸 浓盐酸 75 85 10 15min 饱和碳酸氢钠 pH 8 9 二次精制 无水醋酸 活性炭 回流溶解 20 10 析晶 2 工艺流程图 工艺流程图 药物药物 A 氨化物的制备 氨化物的制备 原辅料 过程 控制参数 减压蒸馏 异丙醇减压蒸馏 药物 A 氯代物 搅拌 升温异丙醇 降温10 20 调节 pHpH 6 7碳酸氢钠 离心 洗涤三氯甲烷 搅拌 三氯甲烷 SM1 滴加 反应 草酰氯 回流 TLC 至 SM1 斑点消失 滴加 DMF 原辅料 过程 控制参数 降温 10 0 1 1 2h 离心 烘干35 45 14 15h 药物 A 氨化物 保温反应杂质 40 60 TLC 至药 物 A 氯代物斑点消失 外观 浅黄色至黄色固体 有关物质 10 0 药物药物 A 水解物的制备 水解物的制备 原辅料 过程 控制参数 药物 A 水解物 降温 10 0 离心 滤饼纯化水 调节 pH 饱和碳酸氢钠 水溶液 pH 7 8 离心 烘干50 60 12 14h 50 60 7 8h 烘干 搅拌溶解 甲醇 氢氧化钠 保温反应 降温 离心 药物 A 氨化物 10 0 40 60 TLC 至药物 A 氨化物斑点消失 调节 pH 母液 浓盐酸 滤饼 pH 1 2 纯化水 外观 类白色至黄 色固体 有关物质 8 0 药物药物 A 粗品的合成 粗品的合成 原辅料 过程 控制参数 烘干 药物 A 粗品 50 60 18 20h 降温 离心 纯化水洗涤滤饼 降温20 35 滴加 40 纯化水 搅拌 药物 A 水解物 碳酸钾 碘化钾 DMF 滴加 保温反应 杂质 3 80 90 TLC 至药 物 A 水解物斑点消失 80 90 0 10 1 1 2h 外观 浅黄色至黄色固体 总杂质 15 0 洗涤滤饼异丙醚 药物药物 A 一次精制物的制备 一次精制物的制备 原辅料 过程 控制参数 滴加饱和碳酸氢钠溶液pH 8 9 搅拌溶清 加热溶清 药物 A 粗品 无水醋酸 滴加 降温 离心 洗涤无水醋酸 离心 滤饼 浓盐酸 10 0 保温 1 1 2h 75 85 10 20min 纯化水 搅拌 热过滤 EDTA 2Na 活性炭 80 90 10 15min 80 90 纯化水洗涤 原辅料 过程 控制参数 烘干50 60 13 15h 药物 A 一次精制物 外观 类白色至黄褐色固体 杂质 7 5 杂质 0 1 其他单个杂质 0 3 总杂质 8 0 氯化物 0 03 滴加 pH 8 9 搅拌 10 15min 饱和碳酸氢钠溶液 降温0 10 离心 离心 洗涤滤饼 搅拌升温 纯化水 纯化水 滤饼40 60 0 10 保温 1 1 2h 降温 纯化水洗涤滤饼 洗涤滤饼异丙醚 二次精制 烘干 包装工序 二次精制 烘干 包装工序 原辅料 过程 控制参数 内包装 离心 洗涤 烘干 50 60 8 10h 粉碎 减蒸 降温 蒸出 1 3 1 2 体积 20 10 析晶 1 1 2h 无水醋酸 降温 搅拌析晶 20 10 保温 3 3 5h 搅拌升温 无水醋酸 滤饼 回流 洗涤 搅拌溶解 无水醋酸 药物 A 一次精制物 回流 搅拌 活性炭 10 15min 无水醋酸 离心 热过滤 外包装 入库 十万级洁净区控制区一般生产区 3 2 S 2 2 2 工艺描述 工艺描述 工艺描述以典型的大生产规模为代表 本公司典型的大生产规模约为 25kg 批 详细的合成过程如下 药物药物 A 氨化物的合成氨化物的合成 原料配比 序号名称分子式分子量单位投料量投料比 1SM1C11H10N2O4234 21kg30 01 2草酰氯C2Cl2O2126 93kg81 32 70 2 75 3 N N 二甲基甲 酰胺 C3H7NO73 09L9 00 25 0 35 4三氯甲烷CHCl3119 38kg45014 16 5碳酸氢钠NaHCO384 00kg90 03 3 5 6杂质C6H5ClFN145 56kg20 00 66 0 67 7异丙醇C3H8O60 10kg1655 6 注 SM1 杂质 9 工艺过程 1 将三氯甲烷加入到反应釜中 搅拌下加入 SM1 滴加入草酰氯 加毕后滴加 N N 二甲基甲酰胺 2 加毕后将反应体系加热至回流反应 反应 5h 开始 TLC 检测 每隔 0 5h 检测一次 至 TLC 检测 SM1 斑点消失 TLC 条件 二氯甲烷 甲醇 10 1 15 1 3 反应完全后将反应体系降至 10 20 加入碳酸氢钠固体 加毕后搅拌至 pH 6 7 离心 滤饼用 180kg 的三氯甲烷洗涤 4 离心母液减蒸至无液体流出 加入 47kg 异丙醇继续减蒸 减蒸至无液体流出为 止 得到药物 A 氯代物 5 向药物 A 氯代物中加入 165kg 异丙醇 加热至 40 60 搅拌均匀 加入杂质 40 60 保温反应 40min 后开始 TLC 检测 每隔 10min 检测一次 至 TLC 检 测药物 A 氯代物斑点消失 TLC 条件 乙酸乙酯 石油醚 1 1 6 反应完全后将反应体系降温至 10 0 保温析晶 1 1 2h 离心 7 滤饼 35 45 下真空干燥 14 15h 得到药物 A 氨化物 46 1kg 检测合格后进 入下一步 摩尔收率范围 90 105 摩尔收率 药物 A 氨化物净重 SM1 投料量 0 647 100 药物药物 A 氨化物的质控标准 氨化物的质控标准 外观 浅黄色至黄色固体 有关物质 10 0 HPLC 面积归一化法 药物药物 A 水解物的合成 水解物的合成 原料配比 序号名称分子式分子量单位投料量投料比 1 药物 A 氨 化物 C17H13ClFN3O3361 75kg46 01 2氢氧化钠NaOH40kg6 10 13 0 14 3甲醇CH4O32kg1092 3 2 5 工艺过程 1 将甲醇加入到反应釜中 搅拌下加入氢氧化钠 搅拌溶解 加热至 40 60 然 后将药物 A 氨化物加入到反应釜中 2 40 60 保温反应 40min 后 TLC 检测 每隔 10min 检测一次至 TLC 检测药物 A 氨化物斑点消失 TLC 条件 二氯甲烷 甲醇 10 1 3 将反应体系降温至 10 0 离心 4 滤饼 50 60 真空干燥 7 8h 得 34 1kg 药物 A 水解物 1 检测合格后进入下一 步 5 将离心后的母液转入反应釜中 搅拌下用浓盐酸调节 pH 1 2 降温至 10 0 离心 6 将滤饼加到 120L 纯化水中搅拌均匀 然后用饱和 NaHCO3水溶液调节 pH 7 8 离心 用 50L 纯化水洗涤 7 滤饼 50 60 真空干燥 12 14h 得 6 0kg 药物 A 水解物 2 检测合格后进入下 一步 摩尔收率范围 90 105 摩尔收率 药物 A 水解物净重 药物 A 氨化物投料量 1 13 100 药物药物 A 水解物的质控标准 水解物的质控标准 外观 类白色至黄色固体 有关物质 8 0 HPLC 面积归一化法 药物药物 A 粗品的合成粗品的合成 原料配比 序 号 名称分子式分子量单位投料量投料比 1 药物 A 水 解物 C15H11ClFN3O2319 72kg40 01 2 N 3 杂质 4 吗啡啉 C7H14ClNO163 65kg22 00 54 0 56 3碳酸钾K2CO3138kg34 40 8 0 9 4 N N 二甲 基甲酰胺 C3H7NO73 09kg1203 4 5碘化钾KI kg4 00 10 0 12 6纯化水H2O L220050 60 工艺过程 1 向反应釜中加入 N N 二甲基甲酰胺 搅拌下依次加入碳酸钾 碘化钾 药物 A 水解物 2 加热至 80 90 滴加 N 3 杂质 4 吗啡啉 滴毕后 80 90 保温反应 反 应 4h 后开始 TLC 检测 每 0 5h 检测一次 至 TLC 检测药物 A 水解物斑点消失 TLC 条件 乙酸乙酯 二氯甲烷 甲醇 10 10 1 3 将反应体系降温至 20 35 向反应液中滴加纯化水 控制反应体系温度不超过 40 4 滴加完毕后将反应体系降温至 0 10 保温析晶 1 1 2h 离心 用 100L 纯 化水洗涤 用 40 70kg 异丙醚洗涤 5 滤饼 50 60 真空干燥 18 20h 得药物 A 粗品 45 9kg 检测合格后进入下一 步 摩尔收率范围 75 95 摩尔收率 药物 A 粗品净重 药物 A 水解物投料量 0 715 100 药物药物 A 粗品的质控标准 粗品的质控标准 外观 浅黄色至黄色固体 有关物质 总杂质 15 0 药物药物 A 一次精制物的制备一次精制物的制备 原料配比 序号名称分子式分子量单位投料量投料比 1粗品C22H24ClFN4O3446 9kg45 01 2醋酸C2H6O46 07kg106623 25 3浓盐酸 kg63 91 4 1 5 4纯化水H2O18L49510 12 5EDTA 2Na g902 3 6活性炭 g75116 20 工艺过程 1 将无水醋酸加入到反应釜中 搅拌下加入粗品 加热溶解 滴加浓盐酸 加完后 回流 120min 2 降温至 50 0 搅拌析晶 1 1 2h 离心 50kg 无水醋酸洗涤 3 将滤饼用 495L 纯化水转入到反应釜中 加热至 搅拌溶解 加入活性炭 搅拌 10 15min 4 热过滤 150kg 纯化水洗涤 5 向滤液中滴加饱和碳酸氢钠水溶液调节 pH 8 9 6 降温至 0 10 搅拌 1 1 2h 离心 用 500L 纯化水洗涤 7 将滤饼转入反应釜中加入 500L 纯化水加热至 40 60 用饱和 NaHCO3溶液 调节 pH 8 9 搅拌 10 15min 8 降温至 0 10 离心 用 500L 纯化水洗涤 用 90kg 醚洗涤 9 滤饼 50 60 真空干燥 13 15h 得药物 A 一次精制物 33 9kg 检测合格后进入 下一步 摩尔收率范围 70 85 摩尔收率 药物 A 一次精制物净重 药物 A 粗品投料量 100 药物药物 A 一次精制物的质控标准 一次精制物的质控标准 外观 类白色至黄褐色固体 有关物质 杂质 7 5 杂质 0 1 其他单个杂质 0 3 总杂质 8 0 氯化物 0 03 二次精制二次精制 原料配比 序号名称分子式分子量单位投料量投料比 1 药物 A 一 次精制物 C22H24ClFN4O3446 9kg33 81 2醋酸C2H6O46 07kg80123 25 3活性炭 g67620 25 4乙醚C2H6O46 07kg53415 18 工艺过程 1 将无水醋酸加入到反应釜中 搅拌下加入药物 A 一次精制物 加热至回流溶解 加入活性炭搅拌 10 15min 后趁热压滤 100kg 醋酸洗涤 2 将滤液搅拌降温至 20 10 保温析晶 3 3 5h 离心 34kg 无水醋酸洗涤 3 将滤饼转入盛有 534kg 无水醋酸的反应釜中 加热至回流溶解 减蒸出投入量的 1 3 1 2 醋酸 4 降温至 10 20 保温析晶 1 1 2h 离心 34kg 无水醋酸洗涤 5 滤饼 50 60 真空干燥 8 10h 粉碎 得药物 A 产品 6 内包 双层药用低密度聚乙烯袋包装后 通知质检人员按成品取样规定取样 启 动快速塑料封口机 逐袋进行热合封口 将内包装完毕的成品由缓冲 传至外包 间 进行外包装 7 外包 在外包装间将内包袋的成品装入 30L 铝桶内 盖上带橡胶垫的内盖 放上 外盖后用压盖机压盖 贴好标签 完成外包 本步摩尔收率范围 70 85 摩尔收率 药物 A 产品净重 药物 A 一次精制物投料量 100 摩尔总收率范围 40 50 摩尔总收率 药物 A 产品净重 SM1 投料量 0 524 100 3 2 S 2 2 3 生产设备生产设备 合成用到的主要和特殊设备的相关信息见下表 表 3 2 S 2 2 1 合成中用到的主要设备的主要技术参数及其他相关信息 设备型号材质转速生产厂家用途 反应罐 1000LGL 搅拌转数为 120 转 min 溶解 脱色 反应罐 3000LGL 125 转 min精制析晶 反应罐 3000LGL 搅拌转数为 125 转 分 析晶 反应罐 K500LGL 搅拌转数为 120rpm 合成反应 反应罐 K500LGL 搅拌转数为 163 转 分 减蒸 合成反应 反应罐 3000LGL 搅拌转数为 122 转 min 精制析晶 离心机 150LSS316L 转速为 1200 转 分 分离固态中间体 离心机 SS800SS316L 转速为 1200 转 分 分离液态中间体 分离固态中间体 离心机 150LSS316L 1000 转 分分离固态中间体 双锥干燥 器 500LSS316L 椎体转速为 4r min 烘干中间体 双锥干燥 器 500LSS316L 椎体转速为 4r min 烘干产品 3 2 S 2 2 4 大生产的拟定批量大生产的拟定批量 大生产批量与注册批一致 大生产拟定的批量范围 22 29kg 批 3 2 S 2 3 物料控制物料控制 3 2 S 2 3 1 原材料规格来源及标准原材料规格来源及标准 药物 A 合成共用到 18 种原料 下表为药物 A 原材料规格 来源 标准 使用步 骤的情况 带 的物料为关键起始原料 表 3 2 S 2 3 1 原材料规格 来源 标准及使用步骤 原料名称规格质量标准生产商使用步骤 工业级 制药有限公司质量标 准 步骤一 化学纯 制药有限公司质量标 准 步骤一 工业级 步骤一 步骤四 三氯甲烷工业级步骤一 碳酸氢钠食品级 步骤一 步骤三 一次精制 工业级 步骤一 步骤二 工业级步骤二 氢氧化钠工业级步骤三 甲醇工业级步骤三 盐酸分析纯 步骤三 一次精制 纯化水 步骤三 步骤四 一次精制 工业级步骤四 碳酸钾工业级步骤四 碘化钾分析纯步骤四 异丙醚工业级 步骤四 一次精制 无水醋酸分析纯 一次精制 二次精制 乙二胺四乙酸二钠分析纯一次精制 活性炭 北京鑫伯利科技发 展有限公司 一次精制 二次精制 主要原料的厂家资质 检验报告 发票 合成路线见附件附件 1 3 2 S 2 3 2 起始原材料的检测方法及质量标准起始原材料的检测方法及质量标准 药物 A 合成共用到 18 种原料 其中有 3 个关键起始原料 15 种常规试剂 常规 试剂采用公司已有的质量标准进行控制 药物 A 的关键起始原材料乙酸酯 苯胺 国内均有充足供应 参照 化学药物杂质研究的技术指导原则 等药物研究指导原 则及各原料厂家检验报告 对三个关键起始原料进行了研究 确定了质量标准 并 进行了方法学验证 3 2 S 2 3 2 1 乙酸酯乙酸酯 起始原料 起始原料 3 2 S 2 3 2 1 1 质量标准质量标准 表 3 2 S 2 3 2 起始原料 质量标准限度 项目方法标准限度 性状目测浅褐色粉末 鉴别红外光谱法 本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致 有关物质HPLC 二甲氧基不得大于 1 0 其他单个杂质不得大于 0 7 总杂质不得大于 2 0 干燥失重干燥失重测定法不得过 1 0 炽灼残渣炽灼残渣检查法不得过 0 1 含量HPLC按峰面积归一化法计算 不得少于 98 0 起始原料 起始原料 C55H10N2O4 345 本品为杂质 9 按峰面积归一化法计算 含 C55H10N2O4不得少于 98 0 性状性状 本品为浅褐色粉末 鉴别鉴别 本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致 中国药典 2010 年版二 部附录 C 检查检查 有关物质有关物质 取本品适量 精密称定 加呋喃 含量测定项下的流动相 1 9 超 声溶解并定量稀释制成每 1ml 中约含 0 25mg 的溶液 作为供试品溶液 另取对照品 适量 精密称定 加呋喃 含量测定项下的流动相 1 9 超声溶解并定量稀释制成每 1ml 中约含 0 1mg 的溶液 作为的定位溶液 照含量测定项下的色谱条件 精密量取 供试品溶液和定位溶液各 20 l 分别注入液相色谱仪 记录色谱图至主成分峰保留 时间的 4 倍 供试品溶液色谱图中如有与峰保留时间一致的色谱峰 按峰面积归一 化法计算 其峰面积不得大于总峰面积的 1 0 其他单个杂质峰面积不得大于总峰 面积的 0 7 各杂质峰面积的和不得大于总峰面积的 2 0 干燥失重干燥失重 取本品 在 105 干燥至恒重 减失重量不得过 1 0 中国药典 2010 年版二部附录 L 炽灼残渣炽灼残渣 取本品 1 0g 依法检查 中国药典 2010 年版二部附录 N 遗留残 渣不得过 0 1 含量测定含量测定 照高效液相色谱法 中国药典 2010 年版二部附录 D 测定 色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 以水 乙腈 85 15 为流动相 检测波长为 240nm 柱温为 40 理论板数按乙酸酯计算不低 于 3000 测定法测定法 取本品适量 精密称定 加 流动相 1 9 超声溶解并定量稀释制成每 1ml 中约含 0 25mg 的溶液 作为供试品溶液 精密量取供试品溶液 20 l 注入液相 色谱仪 记录色谱图至主成分峰保留时间的 4 倍 按峰面积归一化法计算 含 C11H10N2O4不得少于 98 0 注 杂质结构式为 3 2 S 2 3 2 1 2 方法验证方法验证 1 有关物质方法验证结果及结论 有关物质方法验证结果及结论 表 3 2 S 2 3 3 起始原料 有关物质验证总结及结论 项目预期标准验证结果 专 属 性 强制 降解 试验 起始原料 I 峰与各杂质峰的分离度 应符合要求 1 5 且峰纯度角 小于纯度阈值 起始原料 I 在酸和碱性条件下不稳定 在氧化 高 温及光照条件下稳定 各降解条件下的主峰峰纯度 角均小于纯度阈值 主峰峰纯度良好 主峰与相邻 杂质峰及各杂质峰相互间的分离度良好 检测限 信噪比 S N 3 时 计算可检出的最 低浓度或量 证明方法具有足够低 的检测限 起始原料 I 的检测限为 10 2 ppm 定量限 信噪比 S N 10 时 计算可定量的 最低浓度或量 起始原料 I 的定量限为 30 5ppm 溶液稳定 性 检测溶液在室温条件下放置一定时 间 检测结果应无明显变化 供试品检测溶液在室温条件下放置 12 小时稳定 结论 经过对该有关物质方法进行验证 验证结果证明该检测方法适用于起始原料 有关物质 的检测 2 有关物质方法验证具体步骤及数据 有关物质方法验证具体步骤及数据 采用有关物质分析方法检测起始原料 中甲氧基和其他未知杂质 并对方法进 行了方法学研究 仪器及色谱条件仪器及色谱条件 仪器 仪器 Waters e2695 2489 2998 液相色谱仪 色谱柱 色谱柱 Waters X terra C18 5 0 m 4 6 250mm 流动相 流动相 水 乙腈 85 15 流速 流速 1 0ml min 柱温 柱温 30 进样体积 进样体积 20 l 检测波长 检测波长 230nm 运行时间 运行时间 主峰保留时间的 4 倍 溶剂 溶剂 呋喃 流动相 1 9 降解试验降解试验 a 未降解供试品溶液的制备 未降解供试品溶液的制备 称取供试品 25 1mg 置 100ml 量瓶中 加溶剂超 声溶解并稀释至刻度 摇匀 即为未降解供试品溶液 b 酸性条件下降解试验溶液的制备 酸性条件下降解试验溶液的制备 称取供试品 25 1mg 置 100ml 量瓶中 加 1mol L 的盐酸溶液 1ml 室温下放置 3 小时后 加 1mol L 的氢氧化钠溶液中和 再 加溶剂超声溶解并稀释至刻度 摇匀 即为酸性条件下降解试验溶液 c 碱性条件下降解试验溶液的制备 碱性条件下降解试验溶液的制备 称取供试品 25 8mg 置 100ml 量瓶中 加 0 01mol L 的氢氧化钠溶液 1ml 室温下放置 12 小时后 加 0 01mol L 盐酸溶液 1ml 中和 再加溶剂超声溶解并稀释至刻度 摇匀 即为碱性条件下降解试验溶液 d 氧化条件下降解试验溶液的制备 氧化条件下降解试验溶液的制备 称取供试品 25 3mg 置 100ml 量瓶中 加 30 过氧化氢溶液 4ml 室温下放置 24 小时后 加溶剂超声溶解并稀释至刻度 摇 匀 即为氧化条件下降解试验溶液 e 氧化空白溶液的制备 氧化空白溶液的制备 量取 30 过氧化氢溶液 4ml 置 100ml 量瓶中 加溶 剂稀释至刻度 摇匀 即为氧化空白溶液 f 高温条件下降解试验溶液的制备 高温条件下降解试验溶液的制备 称取适量供试品 在 60 高温条件下放置 24 小时 精密称取 25 7mg 加溶剂超声溶解并稀释至刻度 摇匀 即为高温条件下 降解试验溶液 g 光照条件下降解试验溶液的制备 光照条件下降解试验溶液的制备 取适量供试品 在 4500 500lx 光照条件 下放置 15 天 精密称取 25 2mg 置 100ml 量瓶中 加溶剂超声溶解并稀释至刻度 摇匀 即为光照条件下降解试验溶液 h 检测 检测 精密量取上述各降解试验条件下制备的溶液各 20 l 分别注入液相色 谱仪 记录色谱图 图谱见附件 2 图 5 图 13 试验结果见表 3 2 S 2 3 4 和图 3 2 S 2 3 1 表 3 2 S 2 3 4 起始原料 降解试验结果 降解条件未降解酸降解碱降解氧化降解高温降解光照降解 保留时间 min 14 66914 63914 75714 75514 62714 670 峰面积 98 9294 9788 3298 9298 9298 91 纯度角0 9940 8330 1471 3900 1921 286 主 峰 纯度阈值1 8611 1810 3532 4630 3852 049 保留时间 min 4 2844 2834 3014 3104 2584 280 峰面积 0 504 5511 200 530 540 51 纯度角1 2610 3620 2371 0633 7951 110 杂 质 1 纯度阈值1 4780 4170 3981 1912 0601 307 图 3 2 S 2 3 1 起始原料 强制降解图谱比较 以上试验结果表明 起始原料 在酸和碱条件下不稳定 在氧化 高温及光照 条件下稳定 各降解条件下的主峰峰纯度角均小于纯度阈值 主峰峰纯度良好 主 峰与相邻杂质峰间及各杂质峰相互间的分离度良好 说明该检测方法专属性良好 检测限检测限 确定在起始原料 有关物质色谱条件下起始原料 可以被检出的最低量 精密量取空白溶剂 20 l 注入液相色谱仪 连续进样 3 次 记录在起始原料 峰时间范围内的仪器的噪声水平 计算平均噪声 起始原料起始原料 检测限溶液的制备 检测限溶液的制备 精密称取起始原料 25 4mg 置 100ml 量瓶中 加溶剂超声溶解并稀释至刻度 摇匀 精密量取 1ml 置 100ml 量瓶中 加溶剂稀释 至刻度 摇匀 精密量取 1ml 置 100ml 量瓶中 加溶剂稀释至刻度 摇匀 再精密 量取 1ml 置 10ml 量瓶中 加溶剂稀释至刻度 摇匀 作为起始原料 检测限溶液 检测 检测 精密量取起始原料 检测限溶液 20 l 注入液相色谱仪 连续进样 3 次 记录色谱图 计算起始原料 色谱峰的峰高与噪声的比值 信噪比 信噪比 S N 在 3 左右的样品浓度即为检测限浓度 其相对于理论样品浓度的比值为检测限 试验结 果见表 3 2 S 2 3 5 和表 3 2 S 2 3 6 图谱见附件 2 图 14 图 19 表 3 2 S 2 3 5 空白溶剂基线噪声检测结果 名称峰高 1 V 峰高 V 峰高 V 平均 V 空白溶剂6746 表 3 2 S 2 3 6 起始原料 检测限的检测结果 名称 浓度 g ml 保留时间 min 峰高 V 信噪比 S N 平均 信噪比 检测限 ppm 14 811183 14 804183 起始 原料 0 00254 14 825203 3 3 110 2 定量限定量限 确定在起始原料 有关物质色谱条件下 起始原料 可以被准确定量的最低限 度 起始原料起始原料 定量限溶液的制备 定量限溶液的制备 精密称取起始原料 25 4mg 置 100ml 量瓶中 加溶剂超声溶解并稀释至刻度 摇匀 精密量取 1ml 置 100ml 量瓶中 加溶剂稀释 至刻度 摇匀 精密量取 1ml 置 100ml 量瓶中 加溶剂稀释至刻度 摇匀 再精密 量取 3ml 置 10ml 量瓶中 加溶剂稀释至刻度 摇匀 作为起始原料 定量限溶液 检测 检测 精密量取起始原料 定量限溶液 20 l 注入液相色谱仪 连续进样 5 次 记录色谱图 计算起始原料 色谱峰的峰高与噪声的比值 信噪比 信噪比 S N 在 10 左右的样品浓度即为定量限浓度 其相对于理论样品浓度的比值为定量限 试验 结果见表 3 2 S 2 3 7 图谱见附件 2 图 20 图 24 表 3 2 S 2 3 7 起始原料 定量限的检测结果 名称 浓度 g ml 保留时间 min 峰高 V 信噪比 S N 平均 信噪比 定量限 ppm 14 7426611 2 14 7516711 0 14 7646611 2 14 7806211 0 起始 原料 0 00762 14 7926610 3 10 930 5 溶液稳定性试验溶液稳定性试验 确定起始原料 检测溶液在室温放置一定时间后 测试结果不受影响的程度 供试品溶液的制备 供试品溶液的制备 精密称取起始原料 25 4mg 置 100ml 量瓶中 加溶剂超 声溶解并稀释至刻度 摇匀 作为供试品溶液 将供试品溶液在室温条件下放置 在不同的时间点 0 1 2 4 6 8 10 12 小时 进样检测 记录色谱图 测定结果见表 3 2 S 2 3 8 图谱见附件 2 图 49 图 56 表 3 2 S 2 3 8 起始原料 溶液稳定性试验结果 时间 h 0124681012RSD 6 7 二甲氧基 3H 喹唑 啉 4 酮 未检 测到 未检 测到 未检 测到 未检 测到 未检 测到 未检 测到 未检 测到 未检 测到 0 00 其他单个杂质 0 610 610 610 620 620 620 620 620 84 杂质总量 2 372 362 362 332 302 282 262 232 25 结果表明 起始原料 检测溶液在室温 12 个小时内 6 7 二甲氧基 3H 喹唑啉 4 酮 其他单个杂质及总杂质的 RSD 小于 5 说明起始原料 检测溶液在室温 12 个小时内稳定 3 2 S 2 3 2 1 3 起始原料起始原料 SM1 的关键指标限度制定依据 的关键指标限度制定依据 SM1 中主要存在的杂质为 酮 其结构为 6 7 二甲氧基 3H 喹唑啉 4 酮在步骤一 步骤二中经过下述反应生成杂质 如下 图所示 图 3 2 S 2 3 1 杂质 的生成过程 因此我们对 6 7 二甲氧基 3H 喹唑啉 4 酮在 SM1 中的限度进行了研究 表 3 2 S 2 3 9 不同纯度的 SM1 对产品质量的的影响 原料产品 批号纯度 其他最 大杂质 批号纯度杂质 其他最大 杂质 01207090 198 06 0 95 0 36 10121399 87 0 03 0 03 01207090 298 19 0 84 0 33 101200199 75 0 01 0 08 10122197 63 0 0 61 110200199 76 0 0 05 结论 SM1 中的杂质的含量为 0 95 相对应的产品中生成的杂质为 0 03 SM1 的纯度为 97 63 时产品中的最大未知单杂为 0 05 SM1 中最大未知单杂从 0 33 到 0 61 对产品质量无明显影响 因此控制起始原料中杂质的含量不超过 1 0 其余最大杂质不超过 0 7 同时 总杂质不超过 2 0 可以保证终产品符合质量要求 3 2 S 2 3 2 2 杂质 起始原料杂质 起始原料 3 2 S 2 3 2 2 1 质量标准质量标准 表 3 2 S 2 3 10 起始原料 质量标准限度 项目方法放行标准 性状目测白色至浅红棕色晶体 鉴别红外光谱法本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致 有关物质GC 杂质不得大于 0 02 其他单个杂质不得大于 0 3 杂质总量不得大于 0 5 水分 水分测定法 费休氏法 不得过 0 2 纯度GC按峰面积归一化法计算 不得少于 99 5 杂质杂质 C6H5 15 56 本品为杂质 按峰面积归一化法计算 含 C6H5ClNF 不得少于 99 5 性状性状 本品为白色至浅红棕色晶体 鉴别鉴别 本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致 中国药典 2010 年版二 部附录 C 检查检查 有关物质有关物质 取本品适量 精密称定 加甲醇溶解并定量稀释制成每 1ml 中约含 0 1g 的溶液 作为供试品溶液 另取杂质对照品适量 精密称定 加甲醇溶 解并定量稀释制成每 1ml 中约含 0 02mg 的溶液 作为杂质对照品溶液 照含量测定 项下的色谱条件 精密量取供试品溶液和杂质对照品溶液各 1 l 注入气相色谱仪 记录色谱图 供试品溶液色谱图中如有与杂质保留时间一致的杂质峰 按外标法以 峰面积计算 不得过 0 02 其他单个杂质峰 按峰面积归一化法计算 其峰面积不 得大于总峰面积的 0 3 杂质总量不得过 0 5 水分水分 取本品 照水分测定法 中国药典 2010 年版二部附录 M 第一法 A 测 定 含水分不得过 0 2 含量测定含量测定 照气相色谱法 中国药典 2010 年版二部附录 E 测定 色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用 5 二苯基 95 二甲基聚硅氧烷为固定液的柱 为色谱柱 起始温度 50 维持 5 分钟 再以每分钟 40 的速率升温至 200 维 持 15 分钟 进样口温度 200 检测器温度 250 分流比 30 1 流速为每分钟 3 0ml 测定法测定法 取本品适量 精密称定 加甲醇溶解并定量稀释制成每 1ml 中约含 0 1g 的溶液 作为供试品溶液 精密量取供试品溶液 1 l 注入气相色谱仪 记录色 谱图 按峰面积归一化法计算 纯度不得少于 99 5 注 杂质杂质结构为 H2N Cl Cl 3 2 S 2 3 2 2 2 方法验证方法验证 1 有关物质方法验证结果及结论 有关物质方法验证结果及结论 表 3 2 S 2 3 11 起始原料 有关物质验证总结及结论 项目预期标准验证结果 专属性 起始原料 峰与各杂质峰的分离度 应符合要求 1 5 起始原料 与杂质的分离度大于 1 5 符合要求 检测限 信噪比 S N 3 时 计算可检出的最 低浓度或量 证明方法具有足够低 的检测限 起始原料 的检测限为 3 0 ppm 杂质的检测限为 4 6ppm 定量限 信噪比 S N 10 时 计算可定量的 最低浓度或量 起始原料 的定量限为 10 0ppm 杂质的定量限为 23 2ppm 溶液稳定 性 检测溶液在室温条件下放置一定时 间 检测结果应无明显变化 供试品检测溶液在室温条件下放置 8 小时稳定 线性线性方程相关系数不小于 0 99 杂质测定浓度在 0 00232mg ml 0 0464mg ml 范围 内 线性关系良好 线性方程 y 3046112x 3357 相关系数 r 0 9978 n 6 准确度回收率应为 80 120 杂质测定的平均回收率为 100 6 符合预期标准 预期标准 加样回收率在 80 120 之间 方 法准确度良好 能准确测定起始原料 样品中杂质 的含量 结论 经过对该有关物质方法进行验证 验证结果证明该检测方法适用于起始原料 有关物质 的检测 2 有关物质方法验证具体步骤及数据 有关物质方法验证具体步骤及数据 采用有关物质分析方法检测起始原料 中杂质和其他未知杂质 并对方法进行 了方法学研究 仪器及色谱条件仪器及色谱条件 仪器 仪器 Agilent7890A 气相色谱仪 检测器 检测器 氢火焰离子化检测器 FID 检测器温度 250 色谱柱 色谱柱 5 二苯基 95 二甲基聚硅氧烷为固定液 规格 30 0m 0 53mm 1 5 m 推荐使用 或极性相似的色谱柱 程序升温 程序升温 起始温度 50 维持 5 分钟 以每分钟 40 的速率升温至 200 维持 15 分钟 进样口温度 进样口温度 200 恒流 恒流 3 0ml min 溶液直接进样溶液直接进样 进样体积 进样体积 1 l 分流比 分流比 30 1 专属性专属性 精密量取起始原料 1 0007g 置 10ml 量瓶中 加甲醇溶解并稀释至刻度 摇匀 作为起始原料 的定位溶液 精密称取杂质 23 2mg 置 100ml 量瓶中 加甲醇溶解 并稀释至刻度 摇匀 精密量取 5ml 置 50ml 量瓶中 加甲醇稀释至刻度 摇匀 作为杂质的定位溶液 取适量起始原料 和杂质 置 10ml 量瓶中 加甲醇溶解并稀释至刻度 作为混 合溶液 精密量取起始原料 和杂质的定位溶液及混合溶液各 1 l 分别注入气相色谱仪 记录色谱图 试验结果见表 3 2 S 2 3 12 和表 3 2 S 2 3 13 图谱见附件 2 图 57 图 60 表 3 2 S 2 3 12 专属性试验单针定位结果 起始原料 杂质 保留时间 min 10 03911 635 表 3 2 S 2 3 13 专属性试验混合溶液结果 起始原料 杂质 保留时间 min 10 02211 637 分离度27 27 检测限检测限 确定在起始原料 有关物质色谱条件下起始原料 可以被检出的最低量 精密量取空白溶剂 1 l 注入气相色谱仪 连续进样 3 次 记录在起始原料 峰 时间范围内的仪器的噪声水平 计算平均噪声 1 起始原料 起始原料 的检测限测定的检测限测定 起始原料起始原料 检测限溶液的制备 检测限溶液的制备 精密称取起始原料 1 0047g 置 10ml 量瓶中 加甲醇溶解并稀释至刻度 摇匀 精密量取 1ml 置 100ml 量瓶中 加甲醇稀释至刻 度 摇匀 精密量取 1ml 置 100ml 量瓶中 加甲醇稀释至刻度 摇匀 精密量取 3ml 置 100ml 量瓶中 加甲醇稀释至刻度 摇匀 作为起始原料 的检测限溶液 检测 检测 精密量取起始原料 检测限溶液 1 l 注入气相色谱仪 连续进样 3 次 记录色谱图 计算起始原料 色谱峰的峰高与噪声的比值 信噪比 信噪比 S N 在 3 左右的样品浓度即为检测限浓度 其相对于理论样品浓度的比值为检测限 试验结 果见表 3 2 S 2 3 14 和表 3 2 S 2 3 15 图谱见附件 2 图 61 图 66 表 3 2 S 2 3 14 噪声的检测结果 名称峰高 1峰高 2峰高 3平均 空白溶剂186200191192 表 3 2 S 2 3 15 起始原料 检测限的检测结果 名称 浓度 mg ml 峰高 信噪比 S N 平均信噪比 S N 检测限 ppm 17013 6 27984 1 3 氯 4 氟苯 胺 3 014 10 4 36993 6 3 83 0 2 杂质的检测限测定 杂质的检测限测定 杂质的检测限溶液的制备 杂质的检测限溶液的制备 精密称取杂质 23 2mg 置 100ml 量瓶中 加甲醇溶 解并稀释至刻度 摇匀 精密量取 5ml 置 50ml 量瓶中 加甲醇稀释至刻度 摇匀 再精密量取 1ml 置 50ml 量瓶中 加甲醇稀释至刻度 摇匀 作为杂质的检测限溶 液 检测 检测 精密量取杂质检测限溶液 1 l 注入气相色谱仪 连续进样 3 次 记录色 谱图 计算杂质色谱峰的峰高与噪声的比值 信噪比 信噪比 S N 在 3 左右的样品浓 度即为检测限浓度 其相对于理论样品浓度的比值为检测限 试验结果见表 3 2 S 2 3 16 和表 3 2 S 2 3 17 图谱见附件 2 图 67 图 72 表 3 2 S 2 3 16 噪音的检测结果 空白噪声 1噪声 2噪声 3平均噪声 甲醇241214222226 表 3 2 S 2 3 17 杂质检测限的检测结果 名称 浓度 mg ml 峰高 信噪比 S N 平均 信噪比 检测限 ppm 16202 7 26302 8杂质4 64 10 4 36322 9 2 84 6 定量限定量限 确定在起始原料 有关物质色谱条件下 起始原料 可以被准确定量的最低限 度 1 起始原料 起始原料 的定量限测定的定量限测定 起始原料起始原料 定量限溶液的制备 定量限溶液的制备 精密称取起始原料 1 0047g 置 10ml 量瓶中 加甲醇溶解并稀释至刻度 摇匀 精密量取 1ml 置 100ml 量瓶中 加甲醇稀释至刻 度 摇匀 精密量取 1ml 置 100ml 量瓶中 加甲醇稀释至刻度 摇匀 再精密量取 1ml 置 10ml 量瓶中 加甲醇稀释至刻度 摇匀 作为起始原料 的定量限溶液 检测 检测 精密量取起始原料 定量限溶液 1 l 注入气相色谱仪 连续进样 5 次 记录色谱图 计算起始原料 色谱峰的峰高与噪声的比值 信噪比 信噪比 S N 在 10 左右的样品浓度即为定量限浓度 其相对于理论样品浓度的比值为定量限 试验 结果见表 3 2 S 2 3 18 图谱见附件 2 图 73 图 77 表 3 2 S 2 3 18 起始原料 定量限的检测结果 名称 浓度 mg ml 峰高 信噪比 S N 平均信噪比 S N 定量限 ppm 1217811 3 2201310 5 3195510 2 4201710 5 3 氯 4 氟 苯胺 1 005 10 3 5193410 0 10 510 0 2 杂质的定量限测定 杂质的定量限测定 杂