Nmp22 核基质蛋白临床意义.docx

1.什么是膀胱癌21.1膀胱癌概述21.2膀胱癌诊断技术现状22.核基质蛋白NMP22技术42.1NMP22检测原理42.2产品性能52.3使用说明62.4干扰因素82.5官方推荐93.竞争产品104.市场信息124.1产品特点宣传124.2价格情况134.3目标市场144.4市场容量分析144.5相关全国性会议155.FAQ166.附录171.什么是膀胱癌1.1膀胱癌概述我国膀胱癌年龄标准化发病率男性为3.8/10万，女性为1.8/10万。近年来，我国部分城市肿瘤发病率报告显示膀胱癌发病率有增高趋势。膀胱癌男性发病率为女性的3-4倍。膀胱癌的发生是复杂、多因素、多步骤的病理变化过程，既有内在的遗传因素，又有外在的环境因素。较为明确的两大致病危险因素是吸烟和长期接触工业化学产品。吸烟是目前最为肯定的膀胱癌致病危险因素，约30%-50%的膀胱癌由吸烟引起，吸烟可使膀胱癌危险率增加2-4倍。职业因素是最早获知的膀胱癌致病危险因素，约20%的膀胱癌是由职业因素引起的，包括从事纺织、染料制造、橡胶化学、药物制剂和杀虫剂生产、油漆、皮革及铝、铁和钢生产。柴油机废气累积也可增加膀胱癌的发生危险。其他可能的致病因素还包括慢性感染（细菌、血吸虫及HPV感染等）。膀胱癌可分为非肌层浸润性膀胱癌(Tis, Ta, T1)和肌层浸润性膀胱癌(T2以上)。1.2膀胱癌诊断技术现状症状主要有间歇全程无痛性血尿，可表现为肉眼血尿或镜下血尿。但所有血尿症状者只有5-10%为膀胱癌，且其出现时间及出血量与肿瘤恶性程度、分期、大小、形态并不一致。影像学检查包括超声检查，尿路造影，CT, MRI, PET等，在诊断分期中具优势，但等待周期长，操作繁琐。尿细胞学尿脱落细胞学为常用传统方法，其对分级低的膀胱癌敏感性较低，一方面是由于肿瘤细胞分化较好，其特征与正常细胞相似，不易鉴别。另一方面由于癌细胞之间黏结相对紧密，没有足够多的癌细胞脱落到尿中而被检测到，所以尿细胞学阴性并不能排除低级别尿路上皮癌的存在。另外，细胞的不典型或退行性变、泌尿系感染、结石、膀胱灌注治疗和检查者的技术差异等因素会影响尿细胞学检查结果。尿液膀胱癌标记物为了提高无创检测膀胱癌的水平，尿液膀胱癌标记物的研究受到了很大的关注，美国FDA已经批准NMP22、FISH等用于膀胱癌的检测，在检测膀胱癌的临床研究中显示了较高的性能。虽然尿液膀胱癌标记物显示出了非常高的敏感性，但是其特异性可能低于尿细胞学检查，这也是在应用中需要改进的。膀胱镜常用的可靠方法，可明确膀胱肿瘤的数目、大小、形态等。但存在尿道狭窄或膀胱有活动性出血不能进行膀胱镜检查，在出血或炎症情况下准确性降低，另外在原位癌与正常组织难以区别。2.核基质蛋白NMP22技术2.1NMP22检测原理核基质蛋白-是参与维持细胞核功能的一种三维网状结构蛋白NMP22通过凋亡而释放到尿液中，与尿路上皮肿瘤密切相关在膀胱癌上皮细胞内NMP22的含量要比正常尿路上皮高数十倍Mostafid,. BJU Int., 2010核有丝分裂器蛋白（NuMA）在核基质蛋白（NMPs）中占有很大的比例，由于细胞死亡（如凋亡），该蛋白从细胞内释放出来，并达到可检测的水平。利用识别核分裂器蛋白特定区域的单克隆抗体对尿液中由膀胱肿瘤细胞释出的核分裂器蛋白进行检测。BladderChek Test试验所检测的核分裂器蛋白抗原部分称为NMP22。Alere NMP22 BladderChek Test试剂盒利用装在塑料盒中的横流免疫层析条带定性检测病人尿样中的核基质蛋白。2.2产品性能FDA 批准 作为膀胱癌的辅助诊断和监测适用于：无症状高危人群 (吸烟史，家族史，化学品从业者,消防员,发型师等)无痛血尿等症状的膀胱癌筛查 膀胱癌术后复发监测 (隔月一次，延迟膀胱镜检)NMP22检测数据：研究者 受试人数 敏感性 特异性Kehinde, S. J. Urology and Nephrology. 2011 178 88 /Hutterer , BJU Int. 200826877882Grossman, JAMA, 2005 1331 5686Ponsky . J Urol. 200160888 84系列研究表明，NMP22拥有良好检测敏感性及特异性2.3使用说明联合膀胱镜检查，敏感性达99%以上(检出率)：阴性预测值达99.5%，为膀胱癌最理想排除手段：2.4干扰因素研究一，存在严重血液污染下，尿液的标志物检测是否受到影响不同血液浓度下 尿检NMP22结果：不同血液浓度下 尿检BTA结果：(注： 由右至左血液浓度依次升高，最左端为阴性纯尿液对照)结论：参照物为阴性尿液。当尿液混有150 红细胞/l时, BTA方法开始出现微弱假阳性，达到250红细胞/l时结果为假阳性，可能血液中存在一定浓度蛋白补充因子，出现与检测板抗体的交叉反应。 而本实验中NMP22检测不受血液影响。2.5官方推荐欧洲泌尿外科协会指南2012版： NMP22比尿脱落细胞具更高敏感性，经筛选病例后特异性得以提高。其高阴性预测值，可在监测中使用以延迟膀胱镜检经筛选病例后(排除炎症等)，NMP22检测特异性得以极大提高3.竞争产品各检测产品比较：产品技术收费厂家市场NMP22胶体金(核基质蛋白)150200Alere在国外已上市，销量数百万人份BTA胶体金(膀胱肿瘤抗原)北京220,未上市梅里埃，美国Polymedco批准早，已落魄，技术指标也不好，各地普遍无收费FISH荧光探针1000雅培，安必平，金菩嘉收费贵实验室操作繁琐尿脱落细胞染色镜检80-150染料试剂传统手段，敏感性极差方法比较-用于膀胱癌筛查诊断：灵敏度% 特异性% NMP22 尿细胞 NMP22 尿细胞2012,Schlake, Can J Urol. N=391 51 35 96 97 2009 ,Lotan , BJU Int. N=1272 82 / 75 / 2007,Talwar, Urology N=196 67 21 81 98 2005,Grossman, JAMA N=1331 56 15 86 99 2001, Ponsky, J Urol. N=608 88 31 84-99 99 注：受人群体包括高危职业者，血尿症状者等方法比较-用于膀胱癌复发监测：灵敏度% 特异性% NMP22 尿细胞 NMP22 尿细胞2012, Hosseini , Urol J. N=320 79 44 70 83 2009,Gupta NP, Urology N=145 86 / 78 / 2008, Hutterer , BJU Int. N=2687 78 20 82 95 2006,Grossman, JAMA N=668 50 12 87 99 2006, Kumar,Jpn J Clin Oncol. N=131 91 41 88 96 结论：综合数据表明，NMP22检测无论在早期筛查或复发监测中，敏感性大大高于尿脱落细胞，但特异性略低于尿细胞。方法比较-检测特点：结论：数据显示，检测方法的敏感性与肿瘤细胞分级密切相关。NMP22对低分级膀胱癌敏感性显著高于尿细胞学方法4.临床需求4.1产品特点关键词一无创诊断 目前广泛使用的膀胱镜检属有创性检查，在炎症或活动性出血下也会降低准确性。无创NMP22尿检配合膀胱镜检，使得医生和病人对检出的癌症更放心。关键词二研究热门目前已收集国内60余篇文献，国外50多篇(多数为泌尿外科高端杂志，详见压缩包)关键词三使用便捷1.四滴尿液，30分钟开始读数2.无需仪器，专业/非专业人士均可操作关键词四竞争少目前FDA批准使用的主要无创尿液检测方法有：NMP22, FISH, BTA, 而后两者都受到收费高，操作繁琐，技术指标落后等问题而无法在市场上广泛使用。国内传统无创尿液方法：尿脱落细胞学，敏感性差，需实验室操作，连续3天晨尿检，传统手段陈旧成医生一致意见关键词五干扰少相比较BTA标志物，基本不受血污染影响(国外论文支持)关键词六官方推荐国际权威指南：欧洲泌尿外科协会2012指南1. NMP22比尿脱落细胞具更高敏感性，经筛选病例后特异性得以提高。其高阴性预测值，可在监测中使用以延迟膀胱镜检2. 经筛选病例后(排除炎症等)，NMP22检测特异性得以极大提高4.2价格情况NMP22 上海 200 （医保）山西85-130北京 220 甘肃170广东 145 安徽 待定 河南 待定 山东 待定 成都 140-200 湖南待定江西 120 4.3应用市场1）三甲医院泌尿外科(少数在检验科操作)2）大型体检中心(作为针对性人群-家族史/吸烟/职业风险-专项膀胱癌初筛项目，若阳性，可行使下一步检查，排除结石/感染后，必要时膀胱镜检)3）二甲医院泌尿外科(配备膀胱镜)4）家庭自用(市场成熟后，方便的操作使非专业人士也能准确的检测，主要适用人群-术后跟踪监测，自行向医院处购买，隔月检测一次，若阴性可延迟膀胱镜检)4.4市场容量分析根据发病率统计，中国约7/10万，即年均9万人。血尿初筛应用：血尿症状15%为膀胱癌，即9万/15%=60万/份监测应用：80%为浅表性膀胱癌，95%达5年生存期；剩下为浸润性，其中过半实施膀胱全切术不适宜检测，另一半实施保留术，5年生存期达45%80%X9万X95%X20次(5年)=136万/份10%X9万X45%X20次(5年)=8万/份即年容量 粗估可达 60万+ 136万+8万 = 200 万/份4.5相关全国性会议2013-CUA全国泌尿外科学术会议2013-CUA分会-全国泌尿男生殖系统肿瘤学会会议20132013-抗癌协会-CSCO 年会5.FAQ产品的规格及收费信息是什么？规格号：D1200E , 24人份/盒 (每份内含检测板及吸管)检测编号：全国医疗服务价格项目规范（2012年版）项目编号CGSK1000保存产品需注意什么？产品需在2-30度下保存，保质期22个月，切勿冰冻储存检测的尿液有什么要求？取新鲜尿液，滴4滴(不含气泡)至检测板，尿液样本收集后，在室温最多保存2小时如何才能避免假阳，假阴性？NMP22推荐与膀胱镜联合检测。为避免假阳性，可排除结石，泌尿炎症等病例，再实施NMP22监测。 若出现假阴性，病例可能为早期T1，Ta型,需联合膀胱镜及影像学等检查使用中应注意什么？如果测试板是冷藏的，在打开包装前，先使检测材料恢复至室温（18-30），30分钟时读取结果，但不应超过50分钟，50分钟后读出的结果应视为无效。此检测不适合膀胱全切除术或正接受放化疗的病人6.附录尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）说明书【产品名称】通用名称：尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）英文名称：Alere NMP22 BladderChek Test【包装规格】24人份/盒【预期用途】该试剂盒使用的是体外免疫层析技术，用于对具有膀胱癌风险因子或膀胱癌症状或者膀胱癌病史的病人尿液中的核分裂器蛋白（NuMA）进行定性检测。 NuMA在核基质蛋白中占有很大的比例。该试验与标准诊断方法相结合，可在专业机构对膀胱癌病人进行辅助诊断。膀胱癌美国癌症协会预测，2006年美国膀胱癌新增病例数为61,420例，因膀胱癌致死人数接近13,060。大多数膀胱癌病人的发病年龄大于50岁，且70%以上为男性。早期诊断对膀胱癌的预后有显著影响。如果膀胱癌在浅表期就得到诊断，则五年生存率可达94%，如果已经发生了侵入和转移才得到诊断，则五年生存率分别为49%和6%。1膀胱癌病人中的75%-80%表现为浅表期疾病（Ta,Tis,T1）,大部分浅表期肿瘤病人（50-80%）在六个月至十二个月内会复发。这类肿瘤中接近10-20%在分期和分级上会进一步恶化。复发最重要的危险因素是瘤体大小和分级程度。大部分复发位于原发肿瘤切除的部位，但也可能有膀胱内其他部位新肿瘤的形成。2膀胱镜检查膀胱癌病人的诊断标准是膀胱镜检查。有多少膀胱癌病人的膀胱镜检查结果为假阴性尚不得知，但据估计有10-40%3-5。由于炎症和出血可影响视野辨认，而扁平细胞损伤（例如严重发育异常和原位癌）常常难以与正常膀胱组织相区别，因而使敏感性受到影响。6-7脱落细胞学尿液细胞学诊断的敏感性和特异性受肿瘤分化程度影响很大。对于分级较低的肿瘤，肿瘤细胞的形态特征与正常细胞差别很小，与一些炎症或创伤导致的疾病的细胞形态部分相似，这些因素都可降低脱落细胞学诊断的准确性。另外，小的和/或分化良好（低级）的乳头瘤因为更好的保留了其牢固的细胞连接而与自发脱落的鳞状细胞形态上的相似性更小。据报道，细胞学对低级损伤的敏感性仅为16-30%。细胞学样本的结果需要经培训的人员才能判定，所以尿液必须被送往实验室，临床医生得到结果必须等待24小时或更长的时间，因此，在医生进行膀胱镜检查的时候无法看到脱落细胞学的检测结果。一种快速、简便的尿液试验改善了膀胱癌的检查条件，使得医生在进行膀胱镜检查前就可得到结果。尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）试验是一步法，利用抗体做检测的试验，测试过程仅需要30分钟，不需要对尿样做预处理。核基质蛋白核基质蛋白（NMPs）构成了细胞核的内部结构框架，并与DNA复制、RNA合成、激素结合等功能有关。进一步的研究表明NMPs参与了基因表达的调节和协调。Fey和Penman的研究表明，NMP的表达存在细胞间差异。核有丝分裂器蛋白（NuMA）在核基质蛋白（NMPs）中占有很大的比例。它在分裂间期的细胞核内是分散的，在有丝分裂期位于纺锤体两极。核有丝分裂器蛋白最初由Lydersen和Pettijohn在分析染色质非组蛋白时首次报道22。随后，核分裂器蛋白的其他功能被提了出来，包括维持细胞核结构，建立/维持有丝分裂纺锤体和有丝分裂后细胞核的重建。23在结构上，这一240KD的核有丝分裂器蛋白含有球形的头部和由中央螺旋竿分割开来的尾部结构域。核有丝分裂器蛋白的cDNA已被数个研究小组克隆并测序，虽然所报道的序列有所差异。24-28在肿瘤细胞内，核有丝分裂器蛋白的升高与恶性细胞的细胞核结构/形态改变相符合。由于细胞死亡（如凋亡），该蛋白从细胞内释放出来，并达到可检测的水平。利用识别核分裂器蛋白特定区域的单克隆抗体对尿液中由膀胱肿瘤细胞释出的核分裂器蛋白进行检测。尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）试验所检测的核分裂器蛋白抗原部分被Matritech公司称为NMP22。【检验原理】该试剂盒利用装在塑料盒中的横流免疫层析条带定性检测病人尿样中的核基质蛋白。横流免疫层析条带中的抗体是抗NuMA的单克隆抗体，是利用Fey和Penman的方法从宫颈癌细胞系得到的。该试验使用了两种不同的单克隆抗体：一种是捕获抗体，另一种是报告抗体。将未经处理的尿样加到塑料盒的样品孔中，反应30分钟。没有其他步骤。如果尿液中存在抗原，该抗原将与胶体金结合粒子相互作用形成免疫复合物，反应混合物流经含有固定抗体区的膜条。在检测区（T区），抗原结合物复合物由捕获抗体捕获，如果尿液中的抗原浓度升高，会形成一条可见的线条。程序对照区（C区）含有固定的羊抗鼠IgG的特异性抗体，该抗体可捕获胶体金标记的抗体，从而在对照窗口产生一条可见的线条。不管尿样中是否有抗原存在，该程序对照都可使操作者对每次测试的操作是否正确做到心中有数。【主要组成成分】该试验盒包含24个独立密封包装的铝箔袋：每一个独立包装包含有尿液滴管，干燥剂和检测板，每个检测板中都含有结合有报告抗体的胶体金粒子和固定在膜上的单克隆捕获抗体。程序对照区含有羊抗鼠IgG特异性抗体。产品不包含，但对该试验必须的组份：尿液塑料采集容器，请勿使用纸杯和泡沫杯时钟或计时器【储存条件及有效期】储存在2-30条件下，检测板在外包装印刷的有效期前是稳定的，有效期为22个月。切勿冰冻储存。【样本要求】该试剂盒需要自然排泄出的尿液作为检测样本，不能使用经膀胱穿刺抽出的尿液、经导尿管导出的尿液、血清、血浆和全血。尿液应收集在干净的尿杯中并做相应标记，不能加防腐剂或固定剂。如果此份尿液标本还需用于其他检测，为避免污染，吸出一部分样本（最少2ul）。尿液样本收集后，在室温最多保存2小时。此检测不适用于有泌尿道留置器械（如支架）或膀胱全切除术后病人。只能使用塑料容器收集尿液，不能用纸杯或泡沫杯。在化疗、免疫治疗或放疗期间收集样本，可能会造成阳性结果。有些前列腺癌活动期病人的尿液检测结果可能呈阳性。对因手术、组织活检等原因导致的膀胱或泌尿道损伤的病人行此检测前，医生应给予其足够的时间让病人恢复这类损伤。当血尿样本中的红细胞浓度大于肉眼血尿阈值40倍（基于5.0106红细胞/毫升浓度计算，相当于4.0 104红细胞/毫升尿液的浓度）以上时，可能会对检测结果造成干扰，使正常检测值为0-5U/mL的尿液检测板呈现阳性结果。【检验方法】检测步骤1.收集经排泄出的尿液标本于塑料尿液收集容器中。2.在检测前，将尿液置室温保存，不要冷藏或冰冻。3.在标本收集后的两小时内进行检测。4.检查检测板的外包装是否有穿孔或破裂。若有损坏，请勿使用。5.如果测试板是冷藏的，在打开包装前，先使检测材料恢复至室温（18-30）。6.测试前从铝箔袋中拿出检测板和滴管，将装有干燥剂的袋子丢掉。7.用提供的吸管吸取病人尿液，垂直置于加样孔上方。8.向样品孔中加4大滴（无气泡）尿样。9.30分钟时读取结果，但不应超过50分钟，50分钟后读出的结果应视为无效。结果读取见下述“结果解释”部分。10.将使用过的滴管和检测板扔到合适的生物危险品收集容器内。质量控制良好实验室操作规程建议使用适当的对照品。该试剂盒有内部程序对照。程序对照程序对照在检测板的对照（C）区。该对照可确保操作者（1）在检测板上加了样并发生了样品流动（2）对照区的羊抗-鼠抗体和连接胶体金的单克隆报告抗体是完整有功能的。该对照不能保证检测（T）区对样本中抗原的有或无的检测的正确性。外部质控Alere NMP22 BladderChek Control kit（目录号#D1250）单独提供外部阳性对照品和阴性对照品。外部对照品测试检测板的捕获和结合型的单克隆抗体的存在及反应性。请联系Alere Scarborough, Inc.公司或当地代理商获取外部对照品。Alere Scarborough, Inc.公司建议在以下时间做外部质控：1. 检测板在室温储存，但实验室或室温高于30时。2. 对测试人员进行培训和再培训时。3. 检测结果和临床检查和症状不符时。良好实验室操作规范包含完整的质量控制程序。这包括正确采集样本并做适当处理，对测试人员进行培训，对对照品结果进行评估，对检测试剂盒进行正确储存等。应保留质控结果的永久记录。【检验结果的解释】1.检查程式对照（C）窗口。有效试验必然有一条线出现。2.阳性结果：仔细观察检测板的检测（T）区。在对照（C）线存在时，检测（T）区的任何完整线，都表示结果阳性。不要对检测（T）区内的条带颜色和深浅与对照（C）区内的条带作比较。3.阴性结果：仔细观察检测板的检测（T）区。如果存在对照（C）线，而在检测（T）区无任何颜色线条出现，即表示结果为阴性。4.无效结果：如果程式对照（C）区无条带出现，或检测（T）线涂抹不清或不完整，试验无效，必须用新检测板重测。无效结果的最常见原因是未能向加样孔加足4大滴尿样，或尿液中有气泡。【参考值】临床诊断特性在22个地点进行的前瞻性临床试验的目的是为确定尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）作为一种辅助诊断方法，对辅助诊断有膀胱癌危险因素或膀胱癌症状的病人时的可利用性。对1331位病人在行膀胱镜检前收集排泄尿液，并由临床人员进行检测。行膀胱镜检的医生对此检测板的检测结果是预先不知的。为确定特异性和敏感性，病人被分为膀胱癌阴性和阳性两组。膀胱癌阴性病人是指膀胱镜下未见病变或有可见病变但经病理学诊断为良性的病人。有682位病人被诊断为良性疾病，567例病人无泌尿道疾病指征。膀胱癌阳性是指行膀胱癌镜检时可见肿瘤，若取活检经病理诊断为恶性。有82例肿瘤，其中75例经切除并有分期信息，70例有可利用的的分级信息。其他7例未行外科切除术，故无分期和分级信息（TX, GX）。患有其他非膀胱癌的活动期癌症的病人被单独归为一组。下表所示每组的特异性，分别为：无疾病指征组、良性疾病组、无膀胱癌史的病人组、患非膀胱部位的活动期癌症病人组。特异性 （95%CI）没有疾病指征的病人（危险因素或临床症状）90.3%（512/567）（87.6%，92.6%）良性疾病*BPH/前列腺炎82.5%（231/280）（77.5%，86.8%）膀胱炎/炎症/膀胱三角炎/UTI77.6%（97/125）（69.3%，84.6%）红斑82.4%（42/51）（69.1%，91.6%）前列腺肥大/鳞状细胞化生/囊肿和息肉76.9%（40/52）（63.2%，87.5%）结石72.5%（29/40）（56.1%，85.4%）小梁形成80.7%（175/217）（74.7%，85.7%）其他肾脏和泌尿生殖系统良性疾病81.4%（179/220）（75.6%，86.3%）有癌症史，非膀胱非活动性其他癌症87.5%（7/8）（47.3%，99.7%）有癌症史，非膀胱活动性其他癌症86.8%（33/38）（71.9%，95.6%）* 病人患良性疾病可能多于一种 癌症史：肺（1/1），前列腺（6/7） 活动性癌症：乳腺（13/14）, 肾脏（3/5），白血病/淋巴瘤（3/3），肺（1/1），前列腺（10/12），其他（3/3，舌，睾丸，梭状细胞（肋）对膀胱癌病人（Ta-Tx）的敏感性是55.7%。膀胱癌阳性是指行膀胱癌镜检时可见肿瘤，若取活检经病理诊断为恶性。尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）膀胱镜阴性阳性合计阴性1070381108阳性17944223合计124982*1331*包括T0-Tx的肿瘤下表所示临床试验总的敏感性（Ta-Tx）和特异性敏感性（95%精确可信区间）特意性（95%精确可信区间）阳性预期值（95%精确可信区间）阴性预期值（95%精确可信区间）尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）对比膀胱镜55.7%（44.1%,66.9%）(44/79)85.7%（83.6%,87.6%）(1070/1249)19.7%（14.7%,25.6%）(44/223)96.8%（95.6%,97.8%）(1070/1105)虽然大部分肿瘤是非侵入性的，但尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）对分期较晚或分级较高的肿瘤病人有更高的敏感性。按照分期和分级分类的敏感性如下表所示。尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）敏感性（95% CI）肿瘤分期：Ta-T150%（31/62）(30.7%,63.0%)肿瘤分期：T2-T390%（9/10）(55.5%,98.8%)肿瘤分期：Tx57.1%（4/7）(18.4%,90.1%)肿瘤分级：分化良好（1级）48.2%（13/27）(28.7%,68.1%)肿瘤分级：中度分化（2级）50.0%（9/18）(26.0%,74.0%)肿瘤分级：低分化（3或4级）72.0%（18/25）(50.6%,87.9%)肿瘤分级：Gx（分级未知）44.4%（4/9）(13.7%,78.8%)此研究中膀胱癌的发病率是5.9%。下表所示不同发病率时尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）的阳性预期值（PPV）和阴性预期值（NPV）.发病率尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）敏感性=55.7%特异性=85.7%PPVNPV1%3.8%99.5%5.9%*19.7%96.8%7%22.7%96.3%15%40.7%91.6%此统计中的膀胱癌为：Ta-Tx*尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）诊断研究的实际发病率临床监测特性在23个地点进行的前瞻性临床试验的目的是确定尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）对有膀胱癌病史的病人的监测作用。收集668位病人行膀胱镜检查前的排泄尿液，并由临床人员进行检测。行膀胱镜检的医生对此检测板的检测结果是预先不知的。为确定敏感性和特异性，病人被分为膀胱癌阳性和膀胱癌阴性组。膀胱癌阴性病人是指膀胱镜下未见病变或有可见病变但经病理学诊断为良性的病人。有291例病人被诊断为良性疾病，279例病人无泌尿道疾病指征。膀胱癌阳性是指行膀胱癌镜检时可见肿瘤，若取活检经病理诊断为恶性。有98例肿瘤复发病人，其中61例经切除并有可用的分期和分级信息。其余37例未行外科切除术，故无法确定分级和分期（Tx，Gx）。下表所示每组的特异性，分别为：无疾病指征组、良性疾病组、无膀胱癌史的病人组、患非膀胱部位的活动期癌症病人组。特异性 （95%CI）没有疾病指征的病人（膀胱癌病史）83.9%（234/279）（79.0%，88.0%）良性疾病*BPH/前列腺炎89.6 %（120/134）（83.1%，94.2%）膀胱炎/炎症/膀胱三角炎/UTI85.2%（23/27）（66.3%，95.8%）红斑92.5%（49/53）（81.8%，97.9%）前列腺肥大/鳞状细胞化生/囊肿和息肉82.4%（14/17）（56.6%，96.2%）结石100 %（5/5）（47.8%，100%）小梁形成89.1%（106/119）（82.0%，94.1%）其他肾脏和泌尿生殖系统良性疾病86.4%（51/59）（75.0%，94.0%）有癌症史，非膀胱非活动性其他癌症88.8%（71/80）（79.7%，94.7%）有癌症史，非膀胱活动性其他癌症71.4%（5/7）（29.0%，96.3%）* 病人患良性疾病可能有多于一种 癌症种类：前列腺（n=29），皮肤（n=18），肾脏（n=15），泌尿生殖器，非膀胱，非前列腺（n=5），乳腺（n=6），消化道（n=6），肺/呼吸道（n=4），血液（n=1），其他（n=3） 病人可能患有多余一种的先前癌症和现在发生的良性疾病。 癌症种类：前列腺（2/4），1例 肾脏（0/1），1例卵巢（0/1），1例肺/肝脏（1/1）对膀胱癌病人的敏感性是45.9%。膀胱癌阳性是指行膀胱癌镜检时可见肿瘤，若取活检经病理诊断为恶性。膀胱镜尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）阴性阳性合计阴性49253545阳性7845123合计57098668下表所示临床试验总的敏感性和特异性敏感性（95%精确可信区间）特异性（95%精确可信区间）阳性预期值（95%精确可信区间）阴性预期值（95%精确可信区间）尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）对比膀胱镜45.9%（35.8%,56.3%）(45/98)86.3%（83.2%,89.0%）(492/570)36.6%（28.1%,45.8%）(45/123)90.3%（87.5%,92.6%）(492/545)虽然大部分肿瘤是非侵入性的，但尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）对分期较晚或分级较高的肿瘤病人有更高的敏感性。按照分期和分级分类的敏感性如下表所示。尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）敏感性（95% CI）肿瘤分期：Ta-T140.0%（22/55）(27.0 %,54.1%)肿瘤分期：T2-T380.0%（4/5）(28.4%,99.5%)肿瘤分期：Tx51.4%（19/37）(34.4%,68.1%)肿瘤分级：分化良好（1级）30.0%（9/30）(14.7%,49.4%)肿瘤分级：中度分化（2级）33.3%（4/12）(9.9%,65.1%)肿瘤分级：低分化（3或4级）66.7%（12/18）(41.0%,86.7%)肿瘤分级：Gx（分级未知）52.6%（20/38）(35.8%,69.0%)此研究中膀胱癌的复发率是14.7%。下表所示不同发病率时尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）的阳性预测值（PPV）和阴性预测值（NPV）.发病率尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）敏感性=45.9%特异性=86.3%PPVNPV10%27.1%93.5%14.7%*36.6%90.3%20%45.6%86.5%30%58.9%78.8%*尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）监测研究的实际发病率尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）和NMP22 Tset Kit(微孔板)一致性对比试验使用排泄尿液标本，尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）与NMP22 Tset Kit(微孔板)比较有很好的一致性。收集泌尿门诊217位病人的排泄尿液标本。每份标本取部分尿液用尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）进行检测，其余部分立即加入稳定剂，并用NMP22 Tset Kit(微孔板)检测NMP22抗原浓度。总一致性为91.2%（198/217, CI86.7%,94.7%）,阳性一致性为87.0%（20/23, CI66.4%,97.2%）, 阴性一致性为91.8%（178/194, CI86.9%,95.2%）。NMP22微孔板检测尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）阴性阳性合计阴性17816194阳性32023合计18136217【检验方法的局限性】尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）的结果不能作为确诊膀胱癌的唯一手段。任何可以导致核基质蛋白在尿液中出现的疾病均可以产生阳性结果。阳性结果也可见于某些患泌尿道良性疾病，前列腺癌和活动癌症治疗期的病人（参见特异性表格）。由尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）得出的结果只能与病人临床评估的可用信息和其他的诊断手段结合使用。没有其他诊断手段的支持，尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）的结果不能被看作是膀胱恶性疾病有或无的证据。在疾病诊断和病人护理中要综合考虑其他临床认可的试验和检查手段。膀胱内治疗药物如BCG,丝裂霉素C, Thiotepa, Bropirimine (研究中), 或干扰素（研究中）的治疗影响不详。尚处于试验阶段的药物对尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）检测的影响不知。【产品性能指标】实验室技术员的重复性进行精确性研究的目的是确定正确判读检测板结果的百分比。标本盘NMP22的水平分别为0，5，15，25U/ml。三个实验室技术员每人用五天时间按照随机顺序判读每个浓度水平的十个检测板（40个检测板/实验室技术员）。因此每个标本盘水平有150个单独的判读结果（3个实验室技术员10个检测板每样本盘5天）。此试验使用三个不同批次的检测板。NMP22抗原水平为0和5U/ml被视为阴性，NMP22抗原水平为15和25U/ml被视为阳性，在此前提下，正确判读尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）检测结果的百分比在批间（n=3），实验室技术员间（n=3）和日间（n=5）是一致的。总的正确判读的百分比是99.2%（1786/1800）。14个错误结果中的12个是5U/ml（438/450或97%），这被认为是检测的临界值。非专业用户与专业判读者重复性比较进行精确性研究的目的是评价非专业使用者的重复性，同样使用三个水平的精确样本盘。三个水平的浓度分别为2，10和15 U/ml，对应为阴性，弱阳性和阳性。五个非专业判读者每位使用两个未知浓度且随机的部分上述样本进行检测，每个水平总共得到十个结果。另外，俩个专业判读者每位使用五个未知浓度且随机的部分上述样本进行检测，每个水平总共得到十个结果。在不同非专业判读者间，非专业判读者和专业判读者间，不同专业判读者间的结果判读是100%一致的。所有2U/ml的样本均被判读为阴性，所有10和15 U/ml的样本均被判读为阳性，非专业用户与专业用户比较的特性三个地点进行的回收率研究的目的是评估专业用户和非专业用户使用尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）的能力比较。这些志愿者的年龄均为50岁或大于50岁，部分有膀胱癌病史，每个志愿者使用一个检测板检测他或她的尿样。每个地点的专业医务人员对非专业使用者的用于检测的检测板重新判读，同时，他们也使用新的检测板对志愿者的尿液重新进行检测。为确保此项研究能够得到一些阳性结果，在28个尿样中额外加入NMP22抗原，使其中的14个尿样NMP22的浓度接近15U/ml, 另外的14个尿样NMP22的浓度接近25U/ml.另外，8个检测板因没有出现程序质控条带而视为无效。由非专业用户判读的结果的一致性的合计百分比地点1（n=55）地点1（n=35）地点1（n=47）合计（n=137）专业人员使用新检测板对同一份尿样进行重新检测的结果96.4%（53/55）97.1%（34/35）93.6%（44/47）95.6%（131/137）专业人员对非专业人员使用的检测板重新判读结果96.4%（53/55）100%（35/35）93.6%（44/47）96.4%（132/137）对高剂量钩状效应的检测目的是确定尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）是否受高浓度阳性样本的干扰。结果显示，病人尿液中高至10,000U/ml的 NMP抗原浓度没有产生钩状效应，此为以往检测中的最高浓度。干扰物质用尿核基质蛋白22(NMP22)检测试剂盒（胶体金法）检测混合了下述物质的阳性和阴性尿液。物质不产生干扰的最高浓度存在干扰物质时的检测水平全血高达0.6%(v/v)0.8%(v/v)蛋白质高达20mg/dL对MLT*无干扰葡萄糖高达10mg/dL对MLT无干扰丝裂霉素C高达20mg/dL对MLT无干扰对乙酰氨基酚高达20mg/dL对MLT无干扰咖啡因高达20mg/dL对MLT无干扰水杨酸钠高达20mg/dL对MLT无干扰乙酰水杨酸钠高达20mg/dL对MLT无干扰布洛芬高达20mg/dL对MLT无干扰氨苄西林高达20mg/dL对MLT无干扰抗坏血酸钠（维生素C）高达20mg/dL对MLT无干扰尼古丁高达14mg/dL对MLT无干扰氯化钠高达365mg/dL对MLT无干扰酒精高达1%(v/v)对MLT无干扰四环素高达20mg/dL对MLT无干扰甲氧苄氨嘧啶高达50mg/dL对MLT无干扰酰胺高达80mg/dL100mg/dL2非结合型胆红素高达0.8mg/dL对MLT无干扰呋喃妥英高达50mg/dL对MLT无干扰IgG高达10mg/dL对MLT无干扰BCG5106CFU对MLT无干扰尿酸高达250mg/dL对MLT无干扰血红蛋白高达100mg/dL对MLT无干扰E.Coil2.50E+10对MLT无干扰P.Aerugenosa2.5E+12对MLT无干扰C白色念珠菌1.25E+10对MLT无干扰环丙沙星100mg/dL125mg/dL3左氧氟沙星150mg/dL对MLT无干扰Isovue1%(v/v)对MLT无干扰Isovue17.5mg/dL对MLT无干扰Thiotepa60mg/dL对MLT无干扰非那雄胺2.5 mg/dL对MLT无干扰盐酸非那吡啶72 mg/dL80mg/dL4盐酸阿霉素高达10 mg/dL对MLT无干扰*MLT：最大检测水平1.阳性干扰：物质增加了浓度为0和5U/ml的尿液盘的阳性结果。这个全血药浓度代表40血尿阈浓度。基于对血液5.0106RBCs/mL计算得到的尿液平均值为4.0104RBCs/mL2.阴性干扰：物质减低了浓度15U/ml的尿液盘的阴性结果。3.物质导致了浓度为0和5U/ml的尿液盘的无效结果。4.物质颜色导致全部尿液盘结果判读困难。据报道0.8%（v/v）的全血,100mg/dL浓度酰胺，125mg/dL环丙沙星，80mg/dL盐酸非那吡啶对该试剂盒检测有干扰。其他物质在可检出的最大浓度水平对结果无干扰。临床研究（中国境内）在4个地点进行的临床试验目的是为评估考核试剂尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）对具有膀胱癌风险因素和症状、或具有膀胱癌病史病人进行辅助诊断的临床性能。以尿核基质蛋白22（NMP22）检测试剂盒（胶体金法）对1003位病人的清晨自然排泄的新鲜尿液标本进行检测，以膀胱镜检检测结果作为临床确认进行比对，对确诊阳性的病例有分期和分级结果的病例进行临床评价。病例分组情况：膀胱癌病人组是指经膀胱镜检查或组织学确认的膀胱癌或复发膀胱癌患者，有392例，其中可得到病理分期结果的有337例，可得到术后分级结果的有322例；其他泌尿道系统良性疾病/有非膀胱癌病史或患非膀胱部位的活动期癌症病人组是指有膀胱炎、结石、BPH、炎症或患非膀胱部位的活动期癌症等但经膀胱镜或病理诊断排除膀胱癌的人群，有411例，其中有非膀胱癌病症史或非膀胱部位活动期癌症病人42例；无疾病指征组是指无泌尿系统疾病症状、体征的人群，有200例。临床总体性能评估总体敏感性与特异性及95%的置信区间如下：考核试剂 临床诊断 + 合计 + 27392365 119519638合计 3926111003总体敏感性为：273/392*100%=69.6% ，95%CI（64.92%73.99%）总体特异性为：519/611*100%= 84.9% ，95%CI（81.09%87.56%）Ka=0.55临床分组性能评估根据病例分组进行敏感性和特异性评估如下：分组 完成例数敏感性 特异性 膀胱癌病人 392 69.6%（273/392）BPH/结石/膀胱炎/炎症/其他泌尿系统良性疾病 有非膀胱癌病史或非膀胱部位活动期癌症病人 无疾病指征组 总计 369 42 200 1003 87.8%（324/369） 69.0%（29/42） 97.5%（195/200） 在膀胱癌病人组中的性能评估 本试验共入组膀胱癌病人392例，其中可得到病理分期结果的为3