EPI400电击感受态细胞使用手册.doc

EPI400电击感受态细胞使用手册 EPI400电击感受态细胞EPI400Electroporation CompetentCell编号名称规格北京华越洋WG07229EPI400电击感受态细胞10100ul EPI400电击感受态细胞基因型F-mcrA(mrr-hsdRMS-mcrBC)80dlacZM15lacX74recA1endA1araD139(ara,leu)7697galU galK-rpsL(StrR)nupG trfAtonA pB4dhfr EPI400电击感受态细胞说明EPI400电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。 该菌株EC100菌株，将EC100核基因中控制质粒拷贝数的pB基因删除后引入一个诱导启动子驱动的pB基因，即是EPI400菌株。 EPI400菌株可以降低质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定DNA或毒性基因的克隆，在加入诱导剂CopyCutter InductionSolution后又可以提高质粒产量到正常状态。 mcrA,(mrr-hsdRMS-mcrBC)基因型使EPI400菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。 recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。 lacZM15标记的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选，tonA赋予其抗噬菌体T1和T5的能力，rpsL赋予其链霉素抗性。 EPI400电击感受态细胞适用于不稳定DNA或毒性基因的克隆，经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率1010cfu/g DNA。 EPI400电击感受态细胞操作方法1.0.1cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。 2.取-80保存的EPI400电击感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 A.测定转化效率使用1l10pg/l的对照质粒pUC19；B.对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液(10mM TrisHCl,pH7.5;1mM EDTA)重悬，DNA浓度不超过100ng/l，体积不超过5l/50l感受态。 3.用200l枪头将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。 4.启动电转仪，设置参数C=25F，PC=200，V=1.8kV(此为BioRad电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。 5.2min后从冰中取出电击杯，放室温，加入700l不含抗生素的无菌SOC培养基（室温），用1ml枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50ml离心管（BD Falcon50ml锥形离心管等），向离心管中补加S.O.C.培养基至5ml。 37，225rpm复苏60分钟。 6.5000rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200l涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上（因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个）。 将平板倒置放于37培养箱过夜培养13-17小时。 EPI400电击感受态细胞注意事项1.加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。 2.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。 3.当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。 4.电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。 5.对于连接产物转化，最好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液(10mM TrisHCl,pH7.5;1mM EDTA)重悬产物，保证DNA浓度不超过100ng/l。 过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。 6.混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。 转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。 7.电击感受态细胞最好保存在-80以下，高于-80超期储存会导致转化效率会下降。 EPI400电击感受态细胞保存条件-80洋华越洋EPI400电击感受态细胞相关Rosetta-gami B(DE3)pLacI感受态细胞DMT感受态细胞Rosetta-gami2(DE3)pLacI感受态细胞TKB1感受态细胞Rosetta-gami感受态细胞Origami感受态细胞Rosetta感受态细胞HMS174,HMS174(DE3),HMS174(DE3)pLysS Rosetta-gami2(DE3)pLysS感受态细胞平板涂布专用玻璃珠Stbl3超级感受态细胞Stbl3感受态细胞RosettaBlue感受态细胞NMY51酵母感受态细胞RosettaBlue(DE3)感受态细胞TG1感受态细胞，TG1感受态细胞TOP10F超级感受态细胞EHA105感受态细胞RosettaBlue(DE3)pLysS感受态细胞Stbl2感受态细胞RosettaBlue(DE3)pLacI感受态细胞DH10B感受态细胞Tuner(DE3)pLacI感受态细胞T1感受态细胞Rosetta2(DE3)感受态细胞M15感受态细胞Rosetta2(DE3)pLacI感受态细胞HB101感受态细胞Tuner(DE3)pLysS感受态细胞JM109感受态细胞Rosetta(DE3)感受态细胞Y1HGold酵母感受态细胞Rosetta(DE3)pLySs感受态细胞Rosseta(DE3)感受态细胞Rosetta(DE3)pLacI感受态细胞AH109酵母感受态细胞Rosetta2感受态细胞TB1感受态细胞，TB1Rosetta2(DE3)pLySs感受态细胞EGY48酵母菌感受态细胞Origami B感受态细胞XL1-Blue感受态细胞Origami2(DE3)pLysS感受态细胞DH10Bac感受态细胞Tuner(DE3)感受态细胞BJ5183感受态细胞，BJ5183Origami2(DE3)pLacI感受态细胞DB3.1感受态细胞Tuner感受态细胞JM110感受态细胞OmniMAX2-T1感受态细胞GV3101感受态细胞NovaF-感受态细胞SURE感受态细胞，SURE感受态细胞NovaBlue感受态细胞BL21(DE3)感受态细胞XL1-Blue化学感受态细胞stbl3感受态细胞，stbl3感受态细胞DH5超级感受态细胞BL21Star(DE3)感受态细胞DH5-T1感受态细胞BL21Star(DE3)pLySs感受态细胞BLR(DE3)感受态细胞AD494(DE3)感受态细胞BLR(DE3)pLysS感受态细胞KM71H,KM71H酵母感受态细胞BLR(DE3)pLysS感受态细胞EHA101,EHA101农杆菌感受态细胞BL21-SI感受态细胞ER2566感受态细胞BL21-Gold(DE3)感受态细胞Tuner(DE3)，Tuner(DE3)感受态细胞BL21-AI感受态细胞TOP10F感受态细胞BL21(DE3)pLacI感受态细胞EHA101农杆菌感受态细胞BL21trxB(DE3)感受态细胞TG1感受态细胞BL21trxB(DE3)pLysS感受态细胞XL10-Gold感受态细胞Mach1-T1Phage Resistant感受态细胞农杆菌感受态细胞DH10bac(BmNPV)感受态细胞Stable感受态细胞BJ5183-AD-1感受态细胞F-DH5感受态细胞F-TOP10感受态细胞stable电击感受态细胞DH10B电击感受态细胞EPI400电击感受态细胞TG1电击感受态细胞BL21(DE3)pLysS感受态细胞CodonPlus感受态细胞BL21感受态细胞GV3101电击感受态细胞E