安捷伦液相色谱柱的选择与保养

HPLC色谱柱选择与维护保养 Sa安捷伦科技 分离模式的选择 样品 溶于有机溶剂 溶于水 溶于四氢呋喃 非离子化 离子化 溶于有机溶剂 溶于水 溶于正己烷 溶于甲醇或甲醇 水或乙腈或乙腈 水 用硅胶的正相模式 用键合相的正相模式 用键合相的反相模式 用键合相的反相模式 低分子凝胶渗透色谱 用键合相的反相模式 抑制电离反相键合相色谱 离子对键合相的反相模式 用硅胶的正相模式 离子交换模式 凝胶渗透色谱 凝胶过滤色谱 大孔填料的离子交换模式 用大孔填料的反相模式 分子量 2 000 分子量 2 000 反相分配色谱极性 固定相 流动相固定相 非极性流动相 甲 乙醇 乙腈 THF 二氯乙烷 极性非极性物质后出峰 正相吸附色谱极性 固定相 流动相固定相 极性流动相 己烷 庚烷 非极性极性物质后出峰 正相色谱20 反相色谱80 正相 反相色谱 硅胶基质 pH3 8Al2O3 nH2O pH1 14聚合物基质 pH1 14 高或低pH下 硅胶会溶解 化学修饰困难 孔结构复杂 孔径不均匀导致柱效不够高 有机溶剂可能导致聚合物基质溶涨而受损 柱填料基质 C 18柱 性能影响因素 硅胶纯度 填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度色谱柱尺寸 填料床的长度和内径颗粒形状 球型或不规则型粒径 平均颗粒直径 通常3 10 m表面积 颗粒外表面和内部孔表面的总和 以m2 gram表示孔径 颗粒的孔或腔的平均尺寸 范围80 300 色谱柱物理性质 C 18柱 性能影响因素 键合类型 单体键合 键合相分子与基体单点相连 聚合体键合 键合相分子与基体多点相连碳覆盖率 与基体物质相连的键合相的量封端 键合步骤之后 用短链将裸露的硅羟基键合后封闭起来 色谱柱化学性质 C 18柱 性能影响因素 A类硅胶OriginalZORBAXSIL 1970s 由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表面上金属含量高 硅羟基的pKa低 导致碱性化合物发生拖尾 B类硅胶 高纯 ZORBAXRx Sil 1987 由于金属含量低 硅羟基pKa高 碱性化合物不发生拖尾 ZorbaxRx SIL 11种金属 35ppm 未检出其他杂质 1ppm 99 995 纯度的二氧化硅 C 18柱 性能影响因素 ZORBAX 生产工艺 微球表面的略微融合专利技术增强了硅胶填料的耐流动相冲刷能力 Zorbax色谱柱使用寿命长的技术保障 安捷伦拥有此项溶胶 凝胶填料专利技术 StableBondEclipseXDBBonus RPExtend ZORBAXRx多孔硅胶微球 色谱柱尺寸 对色谱分离的影响 短柱 15 100mm 运行时间短 柱压低 长柱 150 250mm 分辨率高 运行时间长 窄径柱 2 1mm 检测器灵敏度高 宽径柱 3 21 2mm 载样量高 C 18柱 性能影响因素 颗粒形状 对色谱分离的影响当使用黏度较大的流动相50 50 MeOH H2O时 球型颗粒可以降低柱压 延长色谱柱寿命 C 18柱 性能影响因素 球形 不规则形 粒径 对色谱分离的影响较小的颗粒柱效较高 但会引起柱压过高 3 5 m粒径的常用于分离复杂的多组份样品 而组份单一的样品多采用5 m的粒径 1 8 m3 5 m5 m7 m10 m 表面积 对色谱分离的影响高表面积对于多组份样品的分离具有较强的保留能力 柱容量和分离度 表面积低的填料通常能迅速达到平衡状态 对于梯度淋洗尤为重要 C 18柱 性能影响因素 孔径 对色谱分离的影响大孔的填料颗粒可以延长溶质大分子在填料表面滞留的时间 达到充分分离 改善峰形样品MW 4 000 选择80 的孔径样品MW 4 000 选择300 的孔径 大孔径填料适用于大分子分析 大孔径300 全多孔色谱柱可用于分离蛋白质和多肽分子量虽小但hydrodynamicvolume 水动力学体积 较大的分子Poroshell色谱柱高流速下 高柱效分析大分子的蛋白质和多肽 色谱柱填料孔径必须适合待测物分子自由进出填料孔 与孔内表面的键合相进行分离分配 300 孔径可改善蛋白质和多肽峰形 选择合适的填料孔径分析大分子可获得最佳峰形 300 孔径可改善大分子的峰形 色谱柱 4 6x150mm 5mm流动相 60 MeOH 40 0 1 三氟乙酸流速 0 75mL min温度 RT检测器 UV282nm 溶液中的分子尺寸决定适宜的色谱柱孔径窄的峰宽表明待测分子进入填料孔没有受到阻碍 分子量虽小但hydrodynamicvolume 水动力学体积 较大的分子 键合类型 对色谱分离的影响单齿键合 提高传质速率 加快色谱柱平衡双齿键合 增加色谱柱稳定性 增加色谱柱的载样量 C 18柱 性能影响因素 碳覆盖率 对色谱分离的影响高碳覆盖率 提高分辨率 分析时间长低碳覆盖率 缩短运行时间 封端 对色谱分离的影响封端 减轻待测组份与硅胶表面残留的酸性硅羟基反应而引起的色谱峰拖尾现象对于极性样品 未封端与经过封端处理的色谱柱在选择性上有明显差异 C 18柱 性能影响因素 固定相键合二甲基硅烷 封端四甲基硅烷 Si O OH O O CH 3 Si R CH 3 CH 3 Si CH 3 CH 3 Si R CH 3 R C8 C18 etc O OH OH O CH 3 Si R CH 3 CH 3 Si R CH 3 Cl CH 3 Si CH 3 CH 3 OH OH OH OH CH 3 Cl R CH 3 TMS 传统键合及封端技术 取代基 五个旁侧基团 异丙基 ZorbaxStableBond空间位阻保护 抗水解能力 键合相流失 保留减弱 另一个裸露的硅羟基 潜在的拖尾因素 普通硅胶柱低pH 2不稳定 发生水解 安捷伦专利的空间位阻保护 液相柱 保留值与pH的关系 pH变化值0 1 RS变化值1 6 色谱柱 ZorbaxStableBondC184 6X250mm 5um部件号 880975 906流动相 27 甲醇 73 磷酸pH2 5 2 6温度 500C流速 1 0mL min 色谱柱 ZORBAXEclipseXDB C84 6x75mm 3 5 m流动相 44 25mM磷酸 pH7 00 56 甲醇流速 1 0mL min温度 25 C检测 UV250nm 可电离的组份的分离可能会随pH变化发生显著变化 甚至很小的0 05 0 25个pH变化单位 样品 ketoprofenethylparabenHydrocortisonefenoprofenpropylparabenPropranololibuprofen 液相柱 保留值与pH的关系 0 25个pH 液相柱 保留值与pH的关系 pH变化 0 2个pH 7 0 7 2 保留时间改变 1 2分钟 13 6 14 8分钟 保留时间随pH改变不明显 保留时间随pH改变不明显 酸性环境中 方法稳定区方法波动区 pKa 1 5 方法稳定区 液相柱 保留值与pH的关系 液相柱 保留值与pH的关系 复杂组分的流动相pH选择技巧 色谱柱 ZORBAXExtend C184 6x150mm 5mm流动相 30 缓冲液 70 MeOHpH7缓冲液20mMNa2HPO4pH11缓冲液20mMTEA流速 1 0mL min温度 RT检测器 UV254nm 05 1 2 3 4 5 Time min 7 6 Extend C18pH7 1 Maleate马来酸盐2 Scopolamine东莨菪碱pKa7 63 PseudoEphedrine假麻黄碱pKa9 84 Doxylamine抗敏安 多西拉敏 pKa9 25 Chlorpheniramine氯苯吡胺pKa9 16 Triprol内径ine苯丙烯啶pKa6 57 Diphenhydramine苯海拉明pKa9 0 Extend C18pH11 0510 1 2 3 4 Time min 6 5 7 高pH下 碱性成分的保留增加 待测物pKa 1 5以外的流动相pH可保证方法的稳定性 Zorbax 色谱柱发展史 1973ZORBAXSIL发明专用于HPLC分离的球状 小颗粒硅胶 专利 1977ZORBAXODS单官能团 单层键合相发明者之一1978ZORBAXcolumn首先推出色谱柱的质量信誉保证1982ZORBAXGF 250改善了蛋白质尺寸分离的稳定性1987ZORBAXRx SIL推出适合碱性化合物的HPLC分离的全新硅溶胶技术 专利 1990ZORBAXStableBond增强了低pH条件下键合相的稳定性 专利 1996ZORBAXEclipseXDB双封端技术提高了中等pH条件下键合相的稳定性 专利 1997ZorbaxLC MScolumn15和30mm 3 5um 快速 高分辨率 高通量LC MS色谱柱1998ZORBAXBonus RP极性键合技术使碱性化合物的分离得到改善 专利 1999ZORBAXCombiHT专为小规模组合化学样品制备设计的高通量色谱柱1999ZORBAXEclipsedsDNA用于分析双链DNA的多孔硅胶柱1999ZORBAXCarbohydrate分析单 双 三糖和糖醇的专用柱1999ZorbaxExtendC18独特宽pH跨度 高pH下使用的硅胶基质色谱柱 专利 2001ZorbaxSB aq可在低pH下 1 8 使用100 水相的填料 专利 2002ZorbaxPoroshell300SB蛋白质高速 高效反相分离新填料2002ZORBAX3 0mm内径 3 mm柱径溶剂节省柱2003ZORBAXsub2micron1 8um粒径的高通量 超高速色谱柱 5月1日上市 2003ZORBAXPrepHT高通量全系列制备柱 分析柱向制备柱直接放大 6月1日上市 键合相 适用pH范围 低pH下 分析酸性 碱性和中性组分 峰形优异 柱寿命长 中等pH下 分析酸性 碱性和中性组分 尤其碱性组分峰形优异 柱寿命长 中等pH下 分析酸性 碱性和中性组分 可用于100 全水相 尤其极性组分峰形优异 柱寿命长 中 高pH下 分析酸性 碱性和中性组分 尤其碱性组分峰形优异 柱寿命长 SB C1880A 300ApH 1 8 SB C880A 300ApH 1 8 SB 苯基80ApH 1 8 反相色谱柱 Bonus RP空间位阻保护 三封端80ApH 2 9 Extend C1880A 300ApH 2 11 5 EclipseXDB双封端 EclipseXDB C1880ApH 2 9 EclipseXDB C880ApH 2 9 EclipseXDB 苯基80ApH 2 9 StableBond空间位阻保护 Poroshell300SB C18实心核多孔壳pH 1 8 SB CN80A 300ApH 1 8 SB C380A 300ApH 1 8 Zorbax产品系列 SB AQ空间位阻保护80ApH 1 8 可使用100 水相 Extend双齿键合 双封端 低pH 中pH 高pH 安捷伦HPLC色谱柱维护保养 Zorbax色谱柱 高柱效 长寿命 min 0 0 5 1 1 5 2 Norm 0 10 20 30 40 50 色谱柱 ZORBAXSB C184 6x30mm 1 8um流动相 60 甲醇 40水流速 1mL min温度 室温检测 UV254nm 柱效进样次数 3 416635613810068576372200688263813006895638140068836294500681563126006687623670066536115800669562219006781630068106302130068586528203468236343 1 2 3 4 样品尿嘧啶苯酚4 Cl 硝基苯甲苯 色谱柱柱内体积和平衡时间 单次样品运行时间 分析时间 色谱柱平衡时间色谱柱平衡时间 10倍柱内体积 流速 清洗液相色谱柱 冲洗色谱柱 用比流动相更强的溶剂 反相色谱柱用以下溶剂至少各25mL冲洗色谱柱 分析柱 不含缓冲盐的流动相100 甲醇100 乙腈75 乙腈 25 异丙醇100 异丙醇100 二氯甲烷 100 己烷 若使用己烷或二氯甲烷冲洗色谱柱 则在重新使用反相流动相以前 必须用异丙醇冲洗色谱柱 正相色谱柱用以下溶剂至少各50mL冲洗色谱柱 分析柱 50 甲醇 50 三氯甲烷100 乙酸乙酯 0 12mm内径管线用于毛细管HPLC中 2 1内径色谱柱0 17mm内径管线用于分析型HPLC中2 1 4 6内径色谱柱0 25mm内径管线用于半制备型HPLC中9 4内径色谱柱0 5mm内径管线用于制备型HPLC中21 2内径色谱柱 连接管线与接头 色谱柱 StableBondSB C18 4 6x30mm 3 5mm流动相 85 H2Owith0 1 三氟乙酸 15 ACN流速 1 0mL min温度 35 C 50mL柱外体积 管线 样品 1 苯丙胺酸2 5 苯基 3 6 二氧 2 哌嗪乙酸3 Asp Phe4 天冬甜素 HPLC常用的色谱柱接头 TroubleshootingLCFittings PartII J W DolanandP Upchurch LC GCMagazine6 788 1988 HPLC常用的色谱柱接头 活塞杆与密封圈 蓝宝石活塞杆1 包装部件号 5063 6586活塞杆密封圈 Vespel聚酰亚胺用于反相 2 包装部件号 5063 6589 己烷对Vespel聚酰亚胺有溶涨作用活塞杆密封圈 聚乙烯用于正相 2 包装部件号 0905 1420 样品 尿嘧啶苯酚N N 二甲基苯胺 更换前更换后 塔板数USP拖尾因子 5 1 36701 452 104571 093 100851 00 活塞杆与密封圈 检测器用灯 检测器用灯 检测器用灯 1 DAD的氘灯替代VWD的氘灯关闭灯电源 冷却5min以上将lamp设定的VWDconfiguration的灯类型改为2140 05902 灯能量测试以水为流动相灯预热10min以上在化学工作站Diagnosis状态下进行波长校准 将紫外灯的使用时间归零 DAD的氘灯替代VWD的氘灯 DAD故障诊断与维护 要进行DAD故障诊断 单击DAD图标 然后选择ShowModuleTest选项 进入DAD测试选项画面 DAD故障诊断测试共有8项内容 DADSelf TestDADIntensityTestDADCellTest 常做的DAD维护 更换灯清洗或更换流动池窗 Diagnosis界面故障原因分析 故障选择框 可能原因框 诊断过程故障分析样品分析过程中故障分析 在Diagnosis画面中为用户提供了在诊断过程或样品分析过程中出现的问题以及可能的原因 样品溶剂溶解强度 样品溶剂溶解能力强于流动相导致色谱峰峰形问题 裂分峰或宽峰 中性分析时为何要使用缓冲液 色谱柱 ZORBAXEclipseXDB C8 4 6x75mm 3 5 m流动相 44 A 56 甲醇流速 1 0mL min温度 25 C检测 UV250nm 含缓冲液的流动相可改善保留 分离和色谱峰峰形 样品 1 ketoprofen2 ethylparaben3 hydrocortisone4 fenoprofen5 propylparaben6 propranolol7 ibuprofen A pH7 0水 A pH7 0水 25mM磷酸缓冲液 增加缓冲液浓度减少拖尾 色谱柱 ZORBAXEclipseXDB C84 6x150mm 5mm流动相 40 磷酸盐缓冲液60 ACN流速 1 5mL min 温度 40 C USPTf1 621 651 631 771 831 12 10mM磷酸盐pH7 0 USPTf1 411 501 331 391 361 00 25mM磷酸盐pH7 0 在中等pH下 离子强度较高 能有效掩蔽硅羟基的二次作用减少拖尾 样品 TricyclicAntidepressants 三环抗抑郁剂 1 Desipramine 脱甲丙咪嗪 2 Nortriptyline 去甲替林 3 Doxepin 多塞平 4 Imipramine 丙咪嗪 5 Amitriptyline 阿米替林 6 TrImipramine 三甲丙咪嗪 TEA对碱性成分峰形的影响 02 55 0 Time min 1 2 3 4 5 色谱柱 ZORBAXEclipseXDB C8 4 6x150mm 5mm流动相 85 25mMNa2HPO4 15 ACN流速 1 0mL min 温度 35 C USPTF5 1 1 292 1 333 1 634 2 355 1 57 NoTEA 10mMTEA USPTF5 1 1 192 1 183 1 204 1 265 1 14 pH7 样品 1 Phenylpropanolamine 去甲麻黄碱 2 Ephedrine 麻黄素 3 Amphetamine 苯丙胺 4 MethAmphetamine 脱氧麻黄碱 5 Phenteramine 苯丁胺 竞争酸对酸性组分的峰形的影响 色谱柱 ZORBAXStableBondSB C184 6x150mm 5mm流动相 40 A 60 ACN流速 1 0mL min 温度 室温样品 Ibuprofen 异丁苯丙酸 pKa4 4 pH35mMNaH2PO4 Tf 1 8 pH35mMNaH2PO41 乙酸 pH2 50 1 三氟乙酸 Tf 1 0 Tf 1 09 A 乙酸和三氟乙酸均能作为竞争酸填加至流动相中三氟乙酸由于所需浓度较低 可作为首选 色谱柱技术 5988 6467EN流动相对色谱的影响 TE40 液相色谱柱 ZORBAXEclipseXDB C8色谱柱尺寸 4 6x50mm3 5 m部件号 935967 906 UV 254nm流速 1mL min 室温 UracilButylparabenNaphthaleneDipropylphthalateAcenaphthene 尿嘧啶尼帕尔金丁酯萘二丙基邻苯二甲酸酯苊 刻度混合 Dial a MixA 水B 甲醇 用泵抽取50 B 体积比混合 Vol Vol250mL水 250mL甲醇 用泵抽取100 混合液 定容混合 Mix to Mark250mL甲醇 用水定容至500mL 用泵抽取100 混合液 预混合 重量比混合 Premixed w w 200g甲醇 200g水 用泵抽取100 混合液 改变流动相配比方式 可增加柱效 提高灵敏度 液相分析 小诀窍 提高柱温 可增加柱效 提高灵敏度 减小柱内径 可增加柱效 提高灵敏度 缩短检测器响应时间 可增加柱效 提高灵敏度 减小柱外体积 可增加柱效 提高灵敏度 使用超纯硅胶 可增加柱效 提高灵敏度 使用高能量氘灯 可增加柱效 提高灵敏度 使用中孔透光氘灯 可增加柱效 提高灵敏度 改变流动相pH 可增加柱效 提高灵敏度 改变有机相 可增加柱效 提高灵敏度 改变键合相 可增加柱效 提高灵敏度 改变有机添加剂 可增加柱效 提高灵敏度 改变流动相配比方式 可增加柱效 提高灵敏度 生化 多肽 5988 6316EN升温对于反相HPLC分离强疏水肽的影响 B27 Polypeptide 流动相 A 含0 05 三氟乙酸的水B 含0 05 三氟乙酸的乙腈2 B min进样量 100 L 50 g的6M脲 5 乙酸 UV 210nm流速 1mL min室温 液相色谱柱 ZORBAXStableBond C18色谱柱尺寸 4 6x250mm5 m部件号 880975 902 室温300C400C500C600C700C 提高柱温 可增加柱效 提高灵敏度 环保 样品 除草剂流动相 52 480 1M乙酸钠 甲醇 pH6流速 0 45mL min温度 40 90 检测 UV 除草剂 柱温的影响Herbicides EffectofColumnTemperature 1 西玛津2 敌草隆3 扑灭津4 扑灭净5 异丙甲草胺 1 Simazine2 Diuron3 Propazine4 Prometryn5 Metolachlor 液相色谱柱 ZorbaxStableBond C18色谱柱尺寸 4 6x150mm 5 m部件号 883975 902 目录P625 40 90 提高柱温 可增加柱效 提高灵敏度 生物制药 液相色谱柱 Zorbax300StableBond C3色谱柱尺寸 4 6x150mm 5 m部件号 883995 909 肽类 蛋白质 升温对分离的影响Peptides Proteins EffectofElevatedTemperature 样品 多肽流动相 A 5 95 乙腈 水 0 10 三氟乙酸 V V B 95 5 乙腈 水 0 085 三氟乙酸 V V 梯度 在20min内15 53 后运行时间12min流速 l 0mL min温度 室温 60 检测 UV215nm 1 亮氨酸脑啡呔2 血管紧张素II3 核糖核酸酶A4 牛胰岛素5 细胞色素C6 溶菌酶7 肌红蛋白8 碳酸酐酶 1 LeucineEnkephalin2 AngiotensinII3 RnaseA4 Insulin BOV 5 CytochromeC6 Lysozyme7 Myoglobin8 Carbonicanhydrase 目录P611 提高柱温 可增加柱效 提高灵敏度 生物制药 液相色谱柱 ZorbaxStableBond C8色谱柱尺寸 150mm 5 m 减小毛细管内径来提高低浓度样品的检测灵敏度ReducingCapillaryIDtoImproveSensitivityforConcentration LimitedSamples 流动相 60 乙腈 40 水流速 内径0 3mm 4uL min内径0 5mm 10uL min内径1 0mm 50uL min内径4 6mm 1 0uL min温度 室温检测器 UV254nm样品 200ng联二苯 100nl 目录P611 减小柱径 可增加柱效 提高灵敏度 色谱柱技术 5988 6454EN使用小体积色谱柱对于检测器响应时间的重要性 TE32 液相色谱柱 ZORBAXStableBond C18色谱柱尺寸 4 6x15mm3 5 m部件号 831975 902 流动相 乙腈 1 甲酸 32 68UV 254nm流速 1 0mL min 30 C进样量 5 L 响应时间 4 0秒响应时间 2 0秒响应时间 1 0秒响应时间 0 5秒响应时间 0 1秒 尿嘧啶乙酰水杨酸N 乙酰苯胺 UracilAcetylsalicylicacidAcetanilide 缩短检测器响应时间 可增加柱效 提高灵敏度 色谱柱技术 5988 6428EN不同硅胶类型比较 TE1 流动相 含0 05 甲醇的二氯甲烷 液相色谱柱 toluenebenzanilidephenolbenzylalcohol ZorbaxSilSpherisorbZorbaxRx Sil 甲苯N 苯甲酰苯胺苯酚苯甲醇 使用高纯硅胶 可增加柱效 提高灵敏度 有机化学 5988 6366ENpH对苯胺取代物分析的影响 ORCH1 流动相25mM磷酸 甲醇 58 42流速 1mL min22 C 液相色谱柱 ZORBAXStableBond C18色谱柱尺寸 4 6x150mm5 m部件号 883975 902 对位甲氧基苯胺间位苯甲胺3 氨基 苯甲腈对位氯苯胺间位氯苯胺邻位氯苯胺 p anisidinem toluidine3 amino benzonitrilep chloroanilinem chloroanilineo chloroaniline pH 2 5pH 7 0 改变流动相pH 可增加柱效 提高灵敏度 生化 肽 5988 6293EN三氟乙酸浓度对于反相肽的分离的影响 B10 Peptide 流动相 A 水和三氟乙酸B 乙腈和三氟乙酸0 30 B 30min 内 流速 1mL minUV 254nm进样量 6uL十肽菌素标样S1 S5 疏水性有略微差异 40 C 液相色谱柱 ZORBAX300SB C8色谱柱尺寸 4 6x150mm5 m部件号 883995 906 1 0 三氟乙酸 0 05 三氟乙酸 0 25 三氟乙酸 改变流动相pH 可增加柱效 提高灵敏度 食品分析 5988 6360EN流动相强度对单糖和二糖分离的影响 FD4 流动相 乙腈 水如图流速 1mL min示差折光检测器 液相色谱柱 ZORBAXNH2色谱柱尺寸 4 6x250mm5 m部件号 880952 708 果糖葡糖蔗糖Palatinose海藻糖异麦芽糖 FructoseGlucoseSaccharosePalatinoseTrehaluloseIsomaltose 乙腈 水70 30乙腈 水75 25 改变有机相 可增加柱效 提高灵敏度 色谱柱技术 5988 6468EN有机改性剂和pH对于选择性的影响 TE5 流动相 25mM磷酸缓冲液流速 1 0mL min 22 C 液相色谱柱 ZORBAXStableBond CN色谱柱尺寸 4 6x150mm5 m部件号 883975 905 anisidinem toluidine4 cl aniline3 aminobenzonitrile3 cl aniline2 cl aniline 甲氧基苯胺间位苯甲胺4 氯 苯胺3 氨基苯甲腈3 氯 苯胺2 氯 苯胺 42 甲醇 58 缓冲液30 甲醇 70 缓冲液 pH2 6 pH3 0 改变有机相 可增加柱效 提高灵敏度 色谱柱技术 5988 6453ENZORBAXEclipse系列色谱柱的选择性 TE31 液相色谱柱 ZORBAXEclipseXDB Phenyl色谱柱尺寸 4 6x150mm5 m部件号 993967 912 流动相 甲醇 水 70 30UV 254nm流速 1 0mL min 室温 ZorbaxEclipseXDB 苯基ZorbaxEclipseXDB C8ZorbaxEclipseXDB C18 尿嘧啶苯酚4 氯 硝基苯甲苯萘 UracilPhenol4 Cl nitrobenzeneTolueneNaphthalene 改变键合相 可增加柱效 提高灵敏度 生物制药 液相色谱柱 ZorbaxExtend C18色谱柱尺寸 2 1x150mm 5um部件号 773700 902 三氟乙酸和氢氧化铵用于肽类RP HPLC ESI MS分离的选择性比较SelectivityComparisonofTFAandNH4OHforPeptideRP HPLC ESI MSAnalysis 流速 0 25mL min 温度 25 梯度 5 60 Bin20min LC MS 正离子 ESI Vf70V Vcap4 5kV N2 35psi 12L min 300 样品 4 L 各50ng 三氟乙酸条件 A 0 1 三氟乙酸水溶液B 0 085 三氟乙酸80 的乙腈溶液 NH4OH条件 A 20mMNH4OH水溶液B 20mMNH4OH80 的乙腈溶液 目录P613 改变有机添加剂 可增加柱效 提高灵敏度 生化 肽 十肽菌素 5988 6299EN酸对于反相肽的分离的影响 B16 decapeptide 流动相 A 含相应的酸的水相B 含相应的酸的乙腈0 30 B 30min 内 进样量 6 L肽标样UV 254nm流速 1mL min40 C 液相色谱柱 ZORBAX300SB C8色谱柱尺寸 4 6x150mm5 m部件号 883995 906 十肽菌素S1十肽菌素S2十肽菌素S3十肽菌素S4十肽菌素S5 decapeptideS1decapeptideS2decapeptideS3decapeptideS